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    早期安定干預對匹羅卡品誘導顳葉癲癇小鼠學習記憶能力變化的影響*

    2011-07-16 12:26:48張月輝關俊文李永紅楊天華
    四川生理科學雜志 2011年3期
    關鍵詞:顳葉迷宮癲癇

    張月輝 關俊文 李永紅 楊天華

    (1.攀枝花市中心醫(yī)院神經內科,四川 攀枝花617067;2.四川大學華西醫(yī)院神經外科,四川 成都610041;3.成都信息工程學院電子工程學院,四川 成都610225;4.四川大學華西醫(yī)院神經內科,四川 成都610041)

    癲癇(Epilepsy)是由多種病因引起的慢性腦功能障礙綜合癥,歷時短暫,可多次突然發(fā)作,給患者和家庭帶來極大的痛苦[1]。PILO誘導的癲癇動物模型是一種比較成熟的顳葉癲癇模型,國際上廣泛用于顳葉癲癇的研究[2]。而氯化鋰——匹羅卡品腹腔注射所致的小鼠顳葉癲癇,具有操作簡單、重復性好、受外界干擾小等優(yōu)點[3]。由于PILO顳葉癲癇小鼠的海馬和杏仁核受損,我們推測其學習記憶功能可能受到損害。但早期安定抑制其點燃效應是否影響造模程度及學習記憶功能目前未見相關文獻報道,本實驗采用氯化鋰——匹羅卡品建立ICR小鼠顳葉癲癇模型,在此基礎之上早期使用安定麻醉干預,運用Morris水迷宮實驗系統(tǒng),從行為學角度探討抑制PILO誘導癲癇的首次點燃對學習記憶能力的影響效果。

    1 材料與方法

    1.1 動物和試劑

    選取4周齡清潔級雄性健康ICR小鼠,由四川省動物所提供,生產許可證號:scxk(川)2008—24。試驗起始體質量(20±5)g。12 h光亮/黑暗條件、22℃~25℃環(huán)境溫度,分籠喂養(yǎng),每籠5只。動物管理嚴格按照中國衛(wèi)生部實驗動物管理條例執(zhí)行。

    實驗所用試劑包括:氯化鋰(LiCl)由四川大學華西醫(yī)院提供,腹腔注射,127 mg·kg-1;阿托品,西南藥業(yè)股份有限公司生產,產品批號:07030008,腹腔注射,10 mg·kg-1;匹羅卡品,由四川大學華西醫(yī)院提供,腹腔注射,350 mg·kg-1;地西泮(安定),天津金耀氨基酸有限公司生產,產品批號:0904141,腹腔注射,10 mg·kg-1。

    1.2 方法

    ICR小鼠 40只,隨機分為:癲癇組(A組)、安定麻醉條件下PILO癲癇組(B組)、安定麻醉對照組(C組)、正常對照組(D組)(n=10)。

    本實驗采用Li-PILO腹腔注射誘發(fā)顳葉癲癇小鼠模型,腹腔注射Li,18~24 h后腹腔注射PILO,PILO注射前0.5 h注射阿托品以阻斷外周膽堿能作用。安定麻醉條件下PILO癲癇實驗組(B組)小鼠于PILO注射前5 min腹腔注射地西泮(安定)10 mg·kg-1,其余條件與癲癇實驗組相同。

    1.3 統(tǒng)計學處理

    統(tǒng)計學處理采用PASWStatistics 18.0(原SPSS)統(tǒng)計學軟件進行數據處理,數據以均數±標準差表示,組間比較用單因素方差分析(Analysis of variance,ANOVA)檢驗。

    2 結果

    四組小鼠所檢測的水迷宮潛伏期均數及相互之間的比較詳細見表1。隨著小鼠學習次數的增加,各組尋找平臺潛伏期的時間均逐漸縮短,平臺所在的第三象限區(qū)域搜索時間也有相應的改變。安定狀態(tài)下小鼠雖腹腔注射PILO后第一次癲癇發(fā)作程度明顯減弱,但相比對照組,平臺搜索的時間相比對照組明顯有延長(P<0.05)。點燃癲癇前注射了安定麻醉的小鼠組尋找平臺所需潛伏期與癲癇組相比明顯縮短(P<0.05)。

    3 討論

    PILO誘導的癲癇動物模型是一種比較成熟的顳葉癲癇模型,在發(fā)作行為腦電圖、癇性放電擴散等方面與人類的顳葉癲癇極為相似[5]。

    表1 四組小鼠水迷宮潛伏期對比(±sd,n=10)

    表1 四組小鼠水迷宮潛伏期對比(±sd,n=10)

    注:與對照組(D)相比,#:P<0.05;與癲癇實驗組(A)相比,*:P<0.05。

    組別 潛伏期(s)癲癇組(A組) 46.75±11.23#安定麻醉條件下PILO癲癇組(B組) 29.83±5.36*安定對照(C組) 12.39±2.53正常對照(D組) 10.12±2.74

    癲癇發(fā)作(Epileptic seizure)是指腦神經元異常和過度超同步化放電所造成的臨床現象。其特征是突然和一過性癥狀,由于異常放電的神經元在大腦中的部位不同,而有多種多樣的表現??梢允沁\動感覺神經或自主神經的伴有或不伴有意識或警覺程度的變化。Morris水迷宮實驗是一種研究與海馬功能直接相關的空間學習記憶方法,癲癇組較對照組在水迷宮中尋找到平臺的潛伏期延長(P<0.01)。本實驗在傳統(tǒng)癲癇造模的方法下,新增加了一組實驗,即在PILO腹腔注射之前腹腔注射安定麻醉小鼠,希望能抑制由PILO誘導的癲癇發(fā)作,實際實驗表明,安定麻醉下的小鼠腹腔注射PILO后0.5 h內出現口吐白沫,眼珠突出的癥狀,有稍微的抽搐現象,但癥狀不是太明顯。24 h后學習記憶實驗數據分析表明,該組小鼠的學習記憶能力受到損害,但相比沒有注射安定麻醉組的小鼠潛伏期的延長程度減輕。因為兩組癲癇小鼠第一次發(fā)作情況相差較大,安定麻醉組小鼠基本無大動作的發(fā)作癥狀,而未麻醉癲癇組小鼠發(fā)作程度較明顯,故表明PILO誘導癲癇的首次點燃對小鼠學習記憶能力有密切聯(lián)系。

    1 1賈麗景,王維平,劉瑞春,等.美金剛對戊四氮致癇大鼠空間學習記憶能力的影響及其機制[J].廣東醫(yī)學,2010,31(02):170-172.

    2 Antoniadis EA,McDonald RJ,Amygdala,et al.Hippocampus and discriminative fear conditioning to contex t[J].Behav Brain Res,2000,108(1):1-19.

    3 Phelps EA.Emotion and cognition:insights from studies of the human amygdale[J].Annu Rev Psychol,2006,57:27-53.

    4 MoserMB,Moser EI.Functional differentiation in the hippocampus[J].Hippocampus,1998,8(6):608-619.

    5 Szyndler J,Wierzba-Bobrowicz T,Skorzewska A,et al.Behavioral,biochemical and histological studies in a model of pilocarpine induced spontaneous recurrent seizures[J].Pharmacol Biochem Behav,2005,81(1):15-23.

    6 Silva JG,Mello LE.The role of mossy cell death and activation of protein synthesis in the sprouting of dentate mossy fibers:evidence from calretinin and neo-timm staining in pilocarpine-epileptic mice[J].Epilepsia,2000,41(l6):S18-S23.

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