柔筋方對緊張型頭痛模型大鼠血漿及腦組織NO、NOS的影響

胡志強，吳宏赟，全 偉

(1山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，濟南250000;2山東中醫(yī)藥大學)

緊張型頭痛是最常見的原發(fā)性頭痛，其病因和發(fā)病機制未完全明了，而近年研究表明，一氧化氮(NO)在緊張型頭痛的病理生理過程中起重要作用。Ashina等［1］研究發(fā)現(xiàn)，硝酸甘油(NO 前體)可能觸發(fā)慢性緊張型頭痛患者內(nèi)源性NO的生成，從而激活血管周圍的傳入神經(jīng)纖維。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，NO及一氧化氮合酶(NOS)與緊張型頭痛密切相關(guān)，通過影響頭區(qū)肌肉和皮膚的痛閾值及頭區(qū)肌筋膜痛敏感性參與緊張型頭痛的發(fā)作。臨床資料表明，柔筋方治療緊張型頭痛的療效確切，能有效緩解患者的頭痛癥狀，降低頭痛指數(shù)。2010年9～12月，我們觀察了柔筋方對緊張型頭痛大鼠模型血漿和腦組織中NO及NOS含量的影響，探討柔筋方對緊張型頭痛鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料 電子天平，大鼠固定器，大鼠手術(shù)臺，BNI-A精密電子天平(臺灣櫻花)秒表，玻璃勻漿器，721分光光度計(上海第三分析分析儀)，ATP為廣東天豐藥業(yè)有限公司出產(chǎn)(批號:090303)，臨用前用生理鹽水配置成1 μmol/L的溶液;10%水合氯醛(購于山東省齊魯醫(yī)院兒童醫(yī)院);NO試劑盒(南京建成建成生物工程研究所)。Wistar大鼠40只，雌雄各半，體質(zhì)量(254±28)g，購自山東大學實驗動物中心。動物飼養(yǎng)于SPF級環(huán)境。動物分籠飼養(yǎng)，自由飲水。

1.2 方法

1.2.1 灌胃藥物制備 柔筋方煎劑按成人每日服用劑量:白芍40 g、炙甘草10 g、木瓜15 g、天麻12 g、卷柏10 g、羌活10 g，以蒸餾水煎煮30min，提取2次，再合并煎液，濃縮成含生藥濃度為1 g/ml的混懸液，避光貯于4℃冰箱中備用。復(fù)方羊角顆粒按成人每日服用劑量16 g/d，以蒸餾水溶解，配置成0.165 g/ml的混懸液，避光貯于4℃冰箱中備用。

1.2.2 模型制作及干預(yù) 所有大鼠正常飼養(yǎng)15 d后開始實驗。所有動物隨機分為四組各10只，對照組頸部注射生理鹽水，模型組、柔筋方組及羊角顆粒組均頸部雙側(cè)半棘肌局部注射ATP制作緊張型頭痛模型。柔筋方組予柔筋方煎劑灌胃，羊角顆粒組予復(fù)方羊角顆粒溶液灌胃，均每天1 ml/100 g，每日1次，連續(xù)用藥1周。對照組、模型組均給予等容積的動物飲用水。

1.2.3 NO和NOS含量的檢測 于末次給藥后1 h用分光光度法測定NO濃度，比色法測定NOS。操作均按試劑盒說明書操作。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件。計量數(shù)據(jù)以±s表示。各組NO、NOS含量先進性正態(tài)分布和方差齊性檢驗，各組間進行單因素方差分析，并作LDS檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

各組腦組織及血漿中NO、NOS的表達見表1。

表1 各組腦組織及血漿中NO、NOS的表達(±s)

表1 各組腦組織及血漿中NO、NOS的表達(±s)

注:與模型組相比，*P ＜0.01;與柔筋方組相比，#P ＜0.01

組別 腦組織NO(mmol/L)NOS(U/gprpt)血漿NO(mmol/L)NOS(U/gprpt)模型組 25.88 ±0.79 1.55 ±1.26# 52.08 ±2.60#17.91 ±0.92#羊角顆粒組 21.38 ±0.75*#1.22 ±1.00* 37.09 ±2.09*#15.30 ±0.62*#柔筋方組 16.10 ±0.48*1.21 ±0.97* 33.09 ±1.27*13.58 ±1.2*對照組 16.47 ±0.64*1.02 ±0.57* 32.87 ±1.88*13.24 ±0.68*

3 討論

NO是一種非經(jīng)典的新型遞質(zhì)和信息傳遞分子，它參與機體的許多生理過程和生命活動，如細胞信號傳遞、神經(jīng)修復(fù)、疼痛調(diào)制等［2］。NO主要由酶學途徑生成:在NOS催化下，由左旋精氨酸(L-Arg)末端胍基上的一個氮原子氧化生成NO。一般認為NOS是生成內(nèi)源性NO的最主要限速物質(zhì)。NO引起頭痛的機制可能是:①在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中起神經(jīng)元間信使物質(zhì)作用，同時介導(dǎo)谷氨酸等興奮性氨基酸細胞毒性作用，舒張腦血管，產(chǎn)生疼痛。②使降鈣素基因相關(guān)肽從周圍血管神經(jīng)末梢中釋放出來，并在神經(jīng)源性炎癥反應(yīng)中起作用。③與活化的鳥苷酸環(huán)化酶的鐵離子結(jié)合，誘導(dǎo)環(huán)磷酸鳥苷增加，環(huán)磷酸鳥苷作為第二信使和神經(jīng)遞質(zhì)而激活三叉神經(jīng)節(jié)，使局部神經(jīng)肽—降鈣素基因相關(guān)肽反復(fù)釋放。④通過激活平滑肌細胞內(nèi)可溶性鳥苷酸環(huán)化酶，提高環(huán)磷酸鳥苷水平，從而松弛血管平滑肌，產(chǎn)生血管舒張作用，引起血管擴張性頭痛。⑤激活腦血管周圍三叉神經(jīng)末梢，使血管周圍組織產(chǎn)生血管性多肽，導(dǎo)致無菌性炎癥。⑥直接影響血管旁感覺神經(jīng)，腦神經(jīng)元對NO毒性反應(yīng)極脆弱，從而直接激活感覺神經(jīng)纖維。⑦可直接通過前列腺素調(diào)節(jié)機制使傷害性感覺神經(jīng)元的活動增加。⑧在頭痛的痛覺傳遞中起易化作用，產(chǎn)生和維持頭痛的中樞敏化。

柔筋方中的白芍、甘草、天麻等藥物均具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜的作用。芍藥與甘草配伍具有明顯鎮(zhèn)痛抗炎作用，與抑制多種致痛因子、炎性因子有關(guān)，其鎮(zhèn)痛部位既在外周神經(jīng)末梢，亦可能在中樞神經(jīng)，其鎮(zhèn)痛作用機制可能與NO有關(guān)［3］。葉紅等［4］通過扭體法發(fā)現(xiàn)具有良好的鎮(zhèn)痛作用。實驗研究發(fā)現(xiàn)，野木瓜片對多種疼痛，包括物理性致痛(熱板法)、化學性致痛(扭體法)、大鼠三叉神經(jīng)痛模型均有顯著的鎮(zhèn)痛作用［5］。秦彩玲等［6］對羌活的鎮(zhèn)痛作用進行的研究顯示，紫花前胡苷為中藥羌活鎮(zhèn)痛作用的有效單體化合物。此外，卷柏也有較明顯的鎮(zhèn)痛作用，而且毒性小，無成癮性，鎮(zhèn)痛作用特點為起效慢，持續(xù)時間長［7］。我們以往的研究證實，復(fù)方芍甘柔筋湯能緩解顱周肌肉緊張與壓痛，降低血漿中縮血管物質(zhì)的濃度［8］。

實驗中發(fā)現(xiàn)緊張型頭痛模型大鼠腦組織及血漿中NO、NOS含量均異常升高;柔筋方湯劑和復(fù)方羊角顆粒均能降低腦組織中NO、NOS含量;柔筋方湯劑相較于復(fù)方羊角顆粒更能有效的降低緊張型頭痛模型大鼠血漿中NO、NOS含量及腦組織NO含量，雖然腦組織NOS含量兩組無統(tǒng)計學差異，但柔筋方湯劑亦低于復(fù)方羊角顆粒，可能與樣本量偏少有關(guān)。因此柔筋方湯劑可能通過調(diào)節(jié)體內(nèi)血漿、腦組織中NO、NOS的含量對緊張型頭痛發(fā)揮作用。但柔筋方湯劑調(diào)節(jié)血漿、腦組織中NO、NOS的具體機制，尚有待研究。

［1］Ashina M，Simonsen H，Bendtsen L，et al.Glyceryl trinitrate may trigger endogenous nitric oxide production in patients with chronic tension-type headache［J］.Cephalalgia，2004，24(11):967-972.

［2］朱長庚.神經(jīng)解剖學［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:351-358.

［3］鄢順琴，吳愫清，鳳良元，等.芍藥甘草湯的鎮(zhèn)痛作用機制［J］.安徽中醫(yī)學院學報，2001，34(6):43.

［4］葉紅，沈映君，汪鋆植，等.天麻種子、種麻及商品麻的藥理作用比較［J］.時珍國醫(yī)國藥，2003，14(9):3.

［5］張孝友，譚毓治，趙詩云.野木瓜片鎮(zhèn)痛抗炎作用的實驗研究［J］.廣東藥學院學報，1998，14(3):195-198.

［6］秦彩玲，張毅，劉婷，等.中藥羌活有效成分的篩選試驗［J］.中國中藥雜志，2000，25(10):639.

［7］陳美琳，傅正中，李嚴，等.卷柏復(fù)方鎮(zhèn)痛研究［J］.中成藥研究，1986，(6):25.

［8］胡志強，侯書偉，田財軍，等.復(fù)方芍甘顆粒治療緊張型頭痛療效觀察［J］.山東中醫(yī)雜志，2007，25(12):810-812.