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    自體DC、CIK回輸聯(lián)合干擾素治療慢性乙肝的臨床觀察

    2011-06-14 05:39:12康海燕王建彬董江龍趙子龍張紅霞
    山東醫(yī)藥 2011年45期
    關鍵詞:回輸干擾素自體

    康海燕,王建彬*,董江龍,趙子龍,張紅霞,王 艷

    (1石家莊市第五醫(yī)院,石家莊050021;2河北醫(yī)科大學第三附屬醫(yī)院)

    目前研究認為,乙肝的主要發(fā)病機制與機體感染乙肝病毒(HBV)后產(chǎn)生的免疫反應有關。HBV感染后發(fā)生的免疫耐受和慢性乙肝(CHB)與機體抗原提呈細胞[即樹突狀細胞(DC)]功能缺陷密切相關。DC是迄今體內(nèi)功能最強大的抗原提呈細胞[1,2],在免疫應答誘導中有獨特的地位,對清除HBV起重要作用。細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK)是新型的免疫活性細胞,具有T細胞的抗腫瘤活性和非主要組織相容性復合體(MHC)限制性殺瘤的優(yōu)點;CD3+CD56+T細胞是CIK群體中的主要效應細胞。研究表明,將HBsAg致敏的DC、CIK共同培養(yǎng),可誘導出HBsAg特異性CIK,增強各自的作用。為探討自體DC、CIK聯(lián)合干擾素治療CHB的臨床療效,我們進行了相關臨床觀察?,F(xiàn)報告如下。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料 選擇2008年5月~2010年12月在石家莊市第五醫(yī)院門診或住院治療的CHB患者320例,男180例、女140例,年齡18~63(37.8±16.3)歲,病程5~20年;均符合2005年中華醫(yī)學會肝病學分會、感染病學分會制定的《慢性乙型肝炎防治指南》中的診斷標準[3],ALT、AST 均 >80 IU/ml,HBV-DNA 定量 >1.0 ×106IU/ml,無其他感染及嚴重并發(fā)癥。將患者隨機分為觀察組、對照組各160例,兩組臨床資料有可比性。

    1.2 方法

    1.2.1 自體DC、CIK制備 抽取受試者外周靜脈血10 ml,肝素抗凝后,用生理鹽水與靜脈血以1∶1比例稀釋后,沿離心管壁緩慢加到淋巴細胞分離液中,2 000 r/min離心20 min;取白膜層細胞,用生理鹽水洗滌2次,以無血清培養(yǎng)基懸浮細胞終濃度為2×106/ml,置于培養(yǎng)瓶內(nèi),37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱孵育3 h,分離黏附細胞及非黏附細胞。黏附細胞用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng),加入重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(rhGM-CSF)1 000 kU/L、重組人白介素4(rhIL-4)500 kU/L,在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),隔天半量換液并添加rhIL-4及rhGM-CSF;第6天加入含前S1的表面抗原20 mg/L、腫瘤壞死因子(TNF)500 μg/L,培養(yǎng)第7天收集活化 DC,對患者行皮下注射。非黏附細胞用無血清培養(yǎng)基懸浮,加入干擾素10 kU/L、IL-2 500 kU/L、CD3單克隆抗體500 μg/L、IL-1 100 kU/L,隔天換液,培養(yǎng)第 7 天加入活化DC,繼續(xù)培養(yǎng)7 d后收集細胞(即HBsAg特異性CIK),對患者行靜脈回輸。

    1.2.2 治療方法 兩組均行自體DC、CIK回輸治療,第1天抽血,第7天皮下注射自體DC、第14天靜脈回輸CIK,并同時行第2次抽血,連續(xù)循環(huán)三次為一療程(抽血3次,注射DC 3次,回輸CIK 3次)。在此基礎上,觀察組加用干擾素500萬U,隔日1次皮下注射,連續(xù)6個月為一療程。

    1.2.3 觀察指標 兩組治療前后均檢測肝功能(包括 AST、ALT、TBIL)、HBeAg 定量及 HBV-DNA定量。

    1.2.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件,計量資料用±s表示,組間比較用方差分析。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 兩組治療前后肝功能指標變化 見表1。治療后,對照組 AST、ALT、TBIL 分別降低(32.69 ±5.78)U/L、(30.29 ± 4.58)U/L、(7.41 ± 1.21)μmol/L,觀察組分別降低(57.01 ± 8.23)U/L、(42.66 ±6.32)U/L、(9.02 ±0.88)μmol/L;兩組比較 P 均 <0.05。

    表1 兩組治療前后肝功能指標變化(±s)

    表1 兩組治療前后肝功能指標變化(±s)

    注:與同組治療前比較,*P<0.01;與對照組治療后比較,#P<0.05

    組別 n ALT(U/L) AST(U/L) TBIL(μmol/L)對照組160治療前 127.37 ±19.69 101.22 ±17.22 28.28 ±4.86治療后 68.62 ±12.11* 62.02 ±13.25* 22.07 ±4.03*觀察組 160治療前 125.36 ±23.86 112.05 ±19.67 27.53 ±5.09治療后 57.21 ±11.26*#60.35 ±13.57*#18.37 ±3.94*#

    2.2 兩組治療前后HBV-DNA及HBeAg定量變化見表2。

    表2 兩組治療前后HBV-DNA及HBeAg定量變化(±s)

    表2 兩組治療前后HBV-DNA及HBeAg定量變化(±s)

    注:與同組治療前比較,*P<0.01;與對照組治療后比較,#P<0.05

    組別 nHBV-DNA定量(IU/ml)HBeAg定量(S/CO)對照組160治療前 (5.86 ±0.98)×107 422.86 ±45.23治療后 (4.65 ±1.23)×105* 260.51 ±35.28*觀察組 160治療前 (7.51 ±2.01)×107 436.27 ±51.23治療后 (5.67 ±1.51)×104*# 200.17 ±32.11*#

    3 討論

    研究表明,CHB的發(fā)生、發(fā)展與HBV持續(xù)感染和機體免疫功能障礙有關[4]。DC是機體中功能最強的抗原提呈細胞,在誘導T細胞抗病毒和抗腫瘤免疫中起核心作用[5]。細胞免疫功能低下、CD4+T細胞功能不足,是導致乙肝慢性化的主要原因。另外,DC也會受到 HBV感染。Beckebaum等[6]研究發(fā)現(xiàn),CHB患者單核細胞來源的DC受到HBV感染后,表現(xiàn)為抗原提呈功能下降,輔助T細胞反應受損。提示HBV感染可抑制DC功能,減弱DC抗原提呈功能及其分泌細胞因子的能力,使HBV感染持續(xù)。CHB患者皮下注射自身活化的DC,可明顯提高其對機體淋巴細胞的活化能力,誘導針對HBV特異性細胞的免疫反應。

    CIK是新型的免疫活性細胞,它是由IFN-γ、IL-2等細胞因子誘導產(chǎn)生的殺傷細胞,具有T細胞的抗瘤活性和MHC限制性殺瘤的優(yōu)點。將HBsAg致敏的DC與CIK共同培養(yǎng),可誘導出HBsAg特異性CIK,增強各自的療效。干擾素是治療CHB常用的抗病毒藥物,主要通過抑制病毒復制實現(xiàn)抗病毒作用;并有廣泛的免疫調(diào)節(jié)特性,包括激活T輔助細胞、抗原提呈細胞等,進而增強宿主對病毒的免疫應答。本研究表明,對CHB患者行CIK自體回輸,可有效增強其DC功能,激活細胞免疫,促進病毒清除。兩組患者治療后肝功能、HBV-DNA及HBeAg定量均明顯改善,以觀察組改善明顯。提示利用HBsAg致敏的DC誘導特異性CIK增殖,有望成為臨床治療HBV持續(xù)性感染的新途徑。

    綜上所述,DC、CIK回輸是治療CHB的有效療法,其可有效地改善患者的肝功能,促進肝臟儲備能力恢復,清除HBV;DC、CIK聯(lián)合干擾素治療CHB療效更佳。

    [1]邢利和,張麗欣,張麗麗.樹突狀細胞與肝臟疾病的研究進展[J].中國全科醫(yī)學,2010,13(32):3701-3703.

    [2]Skmd FA,Norio H,Morikazu O.Immune therapy including dendritic cell based therapy in chronic hepatitis B virus infection[].World J Gastronterol,2006,12(18):2876-2883.

    [3]中華醫(yī)學會肝病學分會、感染病學分會.慢性乙型肝炎防治指南[J].中華肝臟病雜志,2005,13(12):881-891.

    [4]李俊卿,周俊英.免疫細胞在慢性乙型肝炎免疫耐受機制中的作用[J].臨床肝膽病雜志,2011,27(4):437-440.

    [5]張書廣,趙歧剛,李友忠.樹突狀細胞疫苗的制備及治療慢性乙型肝炎的療效觀察[J].山東醫(yī)藥,2005,45(5):7-9.

    [6]Beckebaum S,Cicinnati VR,Zhang X,et al.Hepatitis B virus-induced defect of monocyte-derived dendritic cells leads to impaired T helper typeⅠresponse in vitro:mechanisms for viral immune escape[J].Immunology,2003,109(4):487-495.

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