血管內(nèi)皮生長因子及其受體對(duì)妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥發(fā)病的影響

陳 忠，張 婷，印永祥，許建娟，許 飛，趙 華，馮一中

(1無錫市婦幼保健院，江蘇無錫214002;2蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)院)

妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥(ICP)是妊娠期特有的并發(fā)癥，孕婦預(yù)后較好，但可致圍生兒早產(chǎn)、胎兒窘迫、胎死宮內(nèi)等，使圍生兒患病率及病死率升高［1］。其發(fā)病原因和病變機(jī)制目前仍未完全清楚。本研究將探討血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)及其受體(Flt-1)在ICP發(fā)病中的作用。

1 資料與方法

1．1 臨床資料 選擇2009年6月～2010年5月在我院住院分娩的30例 ICP患者(ICP組)，年齡(26．5 ±2．4)歲，孕周(37．3 ±2．6)周。隨機(jī)選擇同期住院分娩的30例正常晚期妊娠婦女為對(duì)照組，均因頭盆不稱、胎位不正或社會(huì)因素等原因行選擇性剖宮產(chǎn)，年齡(26．3 ±3．1)歲，孕周(38．0 ±2．3)周。兩組產(chǎn)婦均無內(nèi)外科合并癥，均為單胎、剖宮產(chǎn)分娩。

1．2 研究方法

1．2．1 標(biāo)本采集及處理 術(shù)前分別抽取肘靜脈血5 ml，3 000 r/min離心5 min，分離血清，－70 ℃保存待檢。胎盤娩出后，立即從胎盤中央帶無明顯出血鈣化處取材，取胎盤組織約1 cm×1 cm×1 cm，10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片(4 μm)。

1．2．2 檢測(cè)方法 血清VEGF測(cè)定采用ELISA法，人VEGF ELISA試劑盒購自北京四正柏生物科技有限公司。胎盤VEGF及Flt-1測(cè)定采用免疫組織化學(xué)PV法。PV-6001試劑盒和兔抗人VEGF單克隆抗體(克隆號(hào)SP28)購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。兔抗人Flt-1多克隆抗體(克隆號(hào)BS1606)購自美國Bioworld Technology公司。操作步驟均嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行。

1．2．3 免疫組織化學(xué)結(jié)果判定 VEGF與Flt-1陽性染色位于胞質(zhì)或胞膜。以胞質(zhì)或胞膜出現(xiàn)淺黃色至棕褐色顆粒為陽性細(xì)胞，無著色或與背景相一致為陰性細(xì)胞。結(jié)果判定采用4級(jí)半定量積分法，即依據(jù)每張切片陽性細(xì)胞比例及著色深淺計(jì)分［2］:鏡下未見陽性細(xì)胞為0分，陽性細(xì)胞＜10%為1分，10% ～50%為2分，50%以上為3分;無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。依據(jù)二者乘積判斷陽性等級(jí):0分為陰性(－)，1～3分為弱陽性(+)，4～6分為陽性(++)，7～9分為強(qiáng)陽性(+++)。所有免疫組化切片經(jīng)雙盲法分別觀察評(píng)估，對(duì)少數(shù)不易判定切片的多次閱片確定。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS10．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用t檢驗(yàn)和秩和檢驗(yàn)，以P≤0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 血清VEGF水平 ICP組血清VEGF為(40．27 ±11．35)ng/L，對(duì)照組為(78．21 ± 14．69)ng/L，兩組比較 P ＜0．01。

2．2 VEGF及Flt-1表達(dá)定位 VEGF及 Flt-1在ICP組和對(duì)照組胎盤中的分布基本一致，主要分布在合體滋養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和絨毛間質(zhì)細(xì)胞。

2．3 VEGF及Flt-1表達(dá)強(qiáng)度 ICP組胎盤 VEGF及Flt-1表達(dá)強(qiáng)度與對(duì)照組相比均明顯降低(P＜0．01)，見表 1。

表1 VEGF及Flt-1在ICP組和對(duì)照組胎盤表達(dá)強(qiáng)度的比較［例(%)］

3 討論

VEGF是一種高效特異內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂原，主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生。Flt-1是VEGF的高親和力受體。兩者結(jié)合可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞間及內(nèi)皮細(xì)胞與基質(zhì)間相互作用，促進(jìn)血管形成和增加血管通透性［3］。

VEGF是促進(jìn)胎盤血管網(wǎng)絡(luò)形成和構(gòu)建的最主要的細(xì)胞因子。整個(gè)孕期均能檢測(cè)到VEGF及其受體的表達(dá)，VEGF在受精、著床、胎盤血管形成及胎兒生長發(fā)育中起重要作用［4］。在孕早期，胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生VEGF，促進(jìn)胎盤毛細(xì)血管網(wǎng)絡(luò)發(fā)育;在孕晚期，隨著胎盤功能成熟，毛細(xì)血管生成減少，VEGF發(fā)揮調(diào)節(jié)血管通透性的作用，維持母胎間營養(yǎng)物質(zhì)交換［3］。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，血管生長是胎盤形成過程中的關(guān)鍵因素，血管機(jī)能不全是導(dǎo)致產(chǎn)科并發(fā)癥的重要因素之一［5］。血清或組織VEGF及Flt-1的表達(dá)異常，必然引起血管生成和滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤異常，導(dǎo)致各種異常妊娠和妊娠并發(fā)癥的發(fā)生［2，3，6～8］。

本研究發(fā)現(xiàn)，ICP組血清VEGF水平與對(duì)照組相比明顯降低，提示胎兒在子宮內(nèi)的生長發(fā)育主要受胎盤血液供應(yīng)的影響，而這與其表達(dá)的VEGF水平關(guān)系密切，通過VEGF濃度的變化，來調(diào)節(jié)胎盤毛細(xì)血管密度及通透性。VEGF濃度降低可致胎盤毛細(xì)血管密度降低和血液灌注減少。因此，我們認(rèn)為通過檢測(cè)血VEGF水平對(duì)臨床監(jiān)測(cè)ICP有一定實(shí)際意義。本組研究還發(fā)現(xiàn)，VEGF及Flt-1在ICP組和對(duì)照組胎盤中的分布基本一致，主要分布在合體滋養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和絨毛間質(zhì)細(xì)胞;但是表達(dá)強(qiáng)度明顯不同，ICP組胎盤VEGF及Flt-1表達(dá)強(qiáng)度與對(duì)照組相比明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果提示，VEGF和Flt-1在胎盤的表達(dá)定位說明VEGF以自分泌形式調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細(xì)胞的浸潤分化和代謝，以旁分泌形式促進(jìn)胎盤的血管形成和增加血管的通透性，參與子宮血管重鑄，以利于母胎物質(zhì)交換和妊娠維持。ICP組胎盤VEGF及Flt-1表達(dá)降低引起滋養(yǎng)細(xì)胞的分化與增殖異常，滋養(yǎng)細(xì)胞侵入障礙，影響子宮血管重鑄;同時(shí)，VEGF及Flt-1表達(dá)減少使胎盤血管生成減少，胎盤血流灌注減少，進(jìn)一步損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，導(dǎo)致胎盤毛細(xì)血管密度降低和血管通透性下降，影響了胎盤屏障的物質(zhì)交換功能和胎盤血液供應(yīng)，發(fā)生胎盤缺血缺氧和胎盤功能不全。一旦發(fā)生應(yīng)激刺激(如感染、宮縮等)，可致臨床常見的胎兒窘迫、死胎、死產(chǎn)和圍生兒死亡等妊娠不良結(jié)局。由此推斷，VEGF在ICP發(fā)病中占有一定地位，有必要進(jìn)一步深入研究其作用機(jī)制，為ICP防治提供理論依據(jù)。

綜上所述，血清VEGF水平下降及胎盤VEGF、Flt-1表達(dá)降低可能與ICP發(fā)病機(jī)理有關(guān)。

［1］王如英．妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥孕婦肝功能指標(biāo)與圍生兒預(yù)后的關(guān)系［J］．中國婦幼保健，2008，23(27):3818-3819．

［2］安瑞芳，周瑋，王姝，等．血管內(nèi)皮生長因子及其受體在正常絨毛及葡萄胎組織中的表達(dá)及意義［J］．西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2004，25(6):573-575，593．

［3］李妹燕，雷志英，黃金臺(tái)，等．自然流產(chǎn)患者血管內(nèi)皮生長因子水平的研究［J］．中國初級(jí)衛(wèi)生保健，2008，22(5):48-49．

［4］彭清妹，黃筱金．VEGF在婦產(chǎn)科及生殖領(lǐng)域中的應(yīng)用［J］．井岡山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2010，31(4):91-96．

［5］Torry DS，Hinrichs M，Torry RJ．Determinants of placental vascularity［J］．Am J Reprod Immunol，2004，51(4):257-268．

［6］Bills VL，Varet J，Millar A，et al．Failure to up-regulate VEGF165b in maternal plasma is a first trimester predictive marker for pre-eclampsia［J］．Clin Sci(Lond)，2009，116(3):265-272．

［7］陶麗，曹云霞．血管內(nèi)皮生長因子與妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥關(guān)系的研究［J］．安徽醫(yī)學(xué)，2009，30(3):276-278．

［8］陳忠，張婷，許建娟．血管內(nèi)皮生長因子在胎兒生長受限中的表達(dá)［J］．現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011，20(5):528-529．