膀胱癌組織中微小染色體維持蛋白2的表達變化及其意義

曾健文，莫鑒鋒，胡國洪，吳小偉，周理林

(清遠市人民醫(yī)院，廣東清遠511500)

近期研究發(fā)現(xiàn)［1］，微小染色體維持蛋白 2(MCM2)是一種細胞增殖相關因子，是DNA復制許可因子，可以反映腫瘤細胞的增殖能力，是多種腫瘤預后不良的預測指標?，F(xiàn)收集我院2005年8月～2010年7月確診的53例膀胱癌組織，采用免疫組化法檢測其MCM2的表達變化，分析MCM2與膀胱癌臨床病理參數(shù)的關系及其對膀胱癌預后的評估價值。

1 資料與方法

1．1 臨床資料 53例膀胱癌手術治療患者中，男38例，女15例;年齡35～80(62．05±10．71)歲。術前均無放、化療等抗腫瘤治療病史。TNM分期:T1期31例、T2期15例、T3期5例、T4期2例;N035例、N115例、N2+N33例;有4例出現(xiàn)遠處轉移，其中骨轉移2例，肺轉移1例，腸道轉移1例。按照膀胱癌惡性程度分級系統(tǒng)［2］:G1級28例，G2級20例，G3級5例。53例術后隨訪 1～6 a，平均2．5 a。復發(fā)18 例，復發(fā)時間在術后 0．5 ～2 a，平均1．5 a。本組53例的膀胱癌組織均為我院病理科存檔標本，常規(guī)石蠟包埋，厚5 μm切片。另取15例正常膀胱黏膜組織作為正常對照。

1．2 MCM2檢測方法 ①主要試劑:羊抗人MCM2單克隆抗體(美國Santa Cruz Biotechnology公司)，免疫組化SP-9003試劑盒。②染色方法:所有標本均采用免疫組化SP法染色，按試劑盒說明書操作，以人類乳腺癌組織的核酸染色作為陽性對照，PBS替代一抗作為陰性對照。③染色結果判定:細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒者為MCM2陽性細胞。采用雙盲法觀察，高倍鏡下(×200)隨機選擇5個視野，用高清晰度圖像采集處理系統(tǒng)(IPP軟件)分析陽性信號的表達和分布，并以累積分光密度(IOD)為參數(shù)進行半定量檢測分析;在顯微鏡下隨機選擇5個視野，計數(shù)每個視野陽性細胞數(shù)百分比，取其均值。表達結果采用半定量評估:陽性細胞＜10%為陰性(－)、10% ～15%為弱陽性(+)、～50%為中陽性(++)、＞50%為強陽性(+++);+～+++判為陽性。

1．3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17．0統(tǒng)計軟件，數(shù)據(jù)以±s表示，用F檢驗和兩兩比較的t檢驗進行分析。α =0．05。

2 結果

2．1 膀胱癌、膀胱正常黏膜組織中MCM2的表達結果 膀胱癌組織中MCM2 IOD值為5 653．45±1 253．64，明顯高于正常膀胱黏膜組織中的89．44±35．12(P ＜0．01);其中 G3級、術后復發(fā)的膀胱癌組織中MCM2表達為+++，G1、G2級者為+。

2．2 不同臨床病理參數(shù)的膀胱癌組織中MCM2的表達變化 不同年齡、性別及腫瘤部位的膀胱癌組織中MCM2 IOD值差異無統(tǒng)計學意義(P均＞0．05);不同分化程度、浸潤深度及有無淋巴結轉移、遠處轉移、復發(fā)的膀胱癌組織中MCM2 IOD值差異有統(tǒng)計學意義(P均＜0．05)。詳見表1。

3 討論

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，傳統(tǒng)診斷膀胱癌的方法是膀胱鏡檢及組織活檢，超聲和CT等可作為輔助檢查，但存在早期診斷敏感性不高、易漏診的缺點;尿脫落細胞學檢查也有一定的假陽性和假陰性。尋找有效的腫瘤分子標志物是腫瘤研究的方向之一。

表1 不同臨床病理特征的膀胱癌組織中MCM2的IOD值變化(ˉx ±s)

MCM是近期研究發(fā)現(xiàn)的一種細胞增殖相關因子，是DNA復制的許可因子，可作為增殖細胞的特殊標志物。MCM是由6個亞基構成的六聚體環(huán)狀蛋白質，由細胞分裂周期蛋白(CDC)基因編碼。MCM2是其中1個亞型。MCM只在處于增殖活動周期的細胞內(nèi)表達，提示MCM可作為增殖細胞的特殊標志物。有學者發(fā)現(xiàn)MCM表達與腫瘤細胞分化程度相關，細胞分化程度越低，MCM表達越明顯［1］。

本研究結果顯示，53例膀胱癌組織中MCM2均呈陽性表達(陽性率為100%)，且膀胱癌組織中MCM2表達明顯上調(diào);分化程度低、復發(fā)的膀胱癌呈強陽性表達。表明膀胱癌的發(fā)生與MCM2高表達密切相關。這與Kruger等［3］用單克隆MCM2抗體對膀胱癌手術切除標本進行蛋白芯片微陳列分析所得結果近似。國內(nèi)馮建華等［5］也發(fā)現(xiàn)MCM2在膀胱移行細胞癌組織中表達增高。提示MCM2可能在膀胱癌的發(fā)展過程中起到重要作用，并與膀胱癌的復發(fā)、預后有關。

本研究結果也顯示，不同分化程度、浸潤深度和有無淋巴結轉移、遠處轉移的膀胱癌組織中MCM2 IOD值不同(P均＜0．05)，分化程度越低、浸潤越深及有淋巴結、遠處轉移的膀胱癌組織中MCM2表達越強。由此推斷MCM2表達水平與膀胱癌的惡性程度有關，提示MCM2的高表達主要是表現(xiàn)在膀胱癌發(fā)生發(fā)展過程中的進展期;且與膀胱癌侵襲轉移潛能有關。MCM2有可能成為反映膀胱癌侵襲轉移的生物學標志之一。在本研究中我們還發(fā)現(xiàn)，復發(fā)的膀胱癌組織中MCM2表達明顯增強，表明MCM2高表達和腫瘤的復發(fā)有關。有學者發(fā)現(xiàn)［5，6］，在 Ta或T1期膀胱腫瘤中，MCM2有預測腫瘤復發(fā)的價值，且預測腫瘤復發(fā)較CK20、Ki-67及組織學分級有更高的準確性。因此我們認為，MCM2可以作為預測膀胱癌復發(fā)和預后的指標。

總之，膀胱癌組織中MCM2的表達明顯上調(diào)，并能較好地反映癌細胞增殖情況。檢測MCM2有助于對膀胱癌進行篩選、診斷及預后評估，并指導臨床治療。

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