環(huán)氧啉含量的HPLC法測(cè)定方法

戴麗雯，陳文利，巨修練*

(1.武漢工程大學(xué)化工與制藥學(xué)院，湖北省新型反應(yīng)器與綠色化學(xué)工藝重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,湖北 武漢 430074；2.武漢工程大學(xué)分析測(cè)試中心，湖北 武漢 430074)

0 引 言

環(huán)氧啉(Cycloxylidin)其化學(xué)名稱為1-(2，3-環(huán)氧丙基)-N-硝基亞咪唑烷-2-亞胺，它是基于計(jì)算機(jī)輔助藥物分子設(shè)計(jì)(CADD)方法，利用CoMFA模擬結(jié)果，以4個(gè)含不同藥效團(tuán)的活性中間體為原料合成的一系列新煙堿類化合物中殺蟲活性突出的創(chuàng)新的化合物，環(huán)氧啉殺蟲譜廣，防治效果與吡蟲啉相近[1]，是第四代新煙堿類殺蟲劑.

作為第一代的新煙堿類殺蟲劑的吡蟲啉，其是目前全球市場(chǎng)上銷量最大殺蟲劑品種.但是長期使用單一化合物，會(huì)使害蟲產(chǎn)生抗性，吡蟲啉也不例外.文獻(xiàn)報(bào)道，吡蟲啉的抗性的形成可能與害蟲解毒能力提高和靶標(biāo)部位對(duì)毒素敏感性降低有關(guān)[3].另外，吡蟲啉由于含有吡啶環(huán)，生產(chǎn)過程中會(huì)產(chǎn)生大量的污染物，難以治理.環(huán)氧啉可以有效的克服以上缺點(diǎn)，生產(chǎn)成本僅為吡蟲啉的1/3，且與吡蟲啉具有相似的殺蟲譜及殺蟲效果，且持效性高于吡蟲啉，毒性比吡蟲啉更低，結(jié)構(gòu)新穎，作為第四代煙堿殺蟲劑，具有較大的開發(fā)前景.

根據(jù)環(huán)氧啉的結(jié)構(gòu)，雖有一些方法可檢測(cè)，但鑒于環(huán)氧啉為新開發(fā)的化合物，本文參考并查閱了相關(guān)的煙堿類殺蟲劑吡蟲啉的高效液相色譜法[4]，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)采用了合適的色譜條件，直接測(cè)定環(huán)氧啉的含量.本方法不需要繁雜的化學(xué)操作，簡便快速，重復(fù)性極令人滿意.經(jīng)驗(yàn)證該方法對(duì)實(shí)際復(fù)雜樣品的分離效果好，可靠性高,抗干擾性強(qiáng).

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

甲醇為色譜純；水為二次蒸餾水；環(huán)氧啉標(biāo)樣[5](自制，含量為98.15％)；樣品為環(huán)氧啉原藥及10％可濕性粉劑.

Waters2695液相色譜儀；二極管陣列檢測(cè)器.

1.2 色譜條件

流動(dòng)相為甲醇-水(25∶75，V/V)溶液，流速為1.0 mL/min，C18色譜柱(C18250 mm×4.6 mm,5 μg/mL)，檢測(cè)波長為220 nm，柱溫為室溫，進(jìn)樣量10 uL.

1.3 對(duì)照品溶液

精密稱取干燥至恒重的環(huán)氧啉標(biāo)樣0.108 0 g，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解，用流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，得貯備液.

1.4 樣品溶液

精密稱取環(huán)氧啉原藥0.105 2 g，置于50 mL的容量瓶中，用甲醇溶解并用流動(dòng)相定容至刻度，搖勻.準(zhǔn)確移取該溶液10.0 mL置于50 mL的容量瓶中,并用流動(dòng)相定容至刻度，即為1#樣品溶液.

精密稱取質(zhì)量分?jǐn)?shù)10％可濕性粉劑0.757 0 g，置于50 mL的容量瓶中，用甲醇溶解，在恒定的溫度下超聲5 min，用流動(dòng)相定容至刻度，搖勻.然后準(zhǔn)確移取該溶液10.0 mL置于50 mL的容量瓶中,并用流動(dòng)相定容至刻度(注：移取時(shí)用孔徑0.45 μm的過濾膜進(jìn)行過濾)，作為2#樣品溶液.

2 結(jié)果與討論

2.1 方法耐用性的考察

在上述色譜條件下，改變流動(dòng)相的配比，采用相同的色譜柱，考察條件的耐用性，將流動(dòng)相甲醇-水分別設(shè)定為35∶65，30∶70，25∶75，20∶80，15∶85，10∶90時(shí)，結(jié)果顯示甲醇-水之比為25∶75時(shí)，環(huán)氧啉與其雜質(zhì)的分離度高，選擇性也較好，并符合溶劑選擇性分類三角形圖.

2.2 線性關(guān)系研究

準(zhǔn)確移取對(duì)照品貯備液1，2，3，4，5，6，7，8 mL分別置于25 mL的容量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，每次進(jìn)樣10 μL，以峰面積為縱坐標(biāo)，相應(yīng)的濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表1.

表1 環(huán)氧啉標(biāo)準(zhǔn)工作曲線測(cè)定結(jié)果

由表1數(shù)據(jù)可知，以環(huán)氧啉濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，線性回歸方程為：Y=1.603 593+0.169 560 5X，相關(guān)系數(shù)為0.999 92.結(jié)果表明，環(huán)氧啉檢測(cè)限為43.2～345.6 μg/mL時(shí)，峰面積與濃度成良好的線性關(guān)系.對(duì)照品溶液色譜圖見圖1.

圖1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖

2.3 精密度及重現(xiàn)性

取環(huán)氧啉對(duì)照品稀溶液，連續(xù)進(jìn)樣8次，每次進(jìn)樣10 μL，環(huán)氧啉的峰面積積分值的RSD為0.908％.

分別取1#樣品稀溶液,2#樣品稀溶液，每次進(jìn)樣10 μL，重復(fù)進(jìn)樣8次，環(huán)氧啉的峰面積積分值的RSD分別為0.912％，0.895％.

2.4 回收率實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取環(huán)氧啉原藥0.108 0 g，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并用流動(dòng)相定容至刻度，分別取10 mL，置于3個(gè)100 mL的容量瓶中，再分別取20 mL加入另外3個(gè)100 mL的容量瓶中，然后按順序精密加入0.5，1，2，4，6，8 mL的對(duì)照品貯備液，用水稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣，讀取峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得含量并計(jì)算回收率.其結(jié)果見表2.

表2 環(huán)氧啉回收率實(shí)驗(yàn)(n=6)

2.5 樣品穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

將環(huán)氧啉原藥和質(zhì)量分?jǐn)?shù)10％可濕性粉劑分別儲(chǔ)存在冰箱內(nèi)7，14，21，28 d，按上述方法測(cè)定，分析結(jié)果顯示環(huán)氧啉原藥和質(zhì)量分?jǐn)?shù)10％可濕性粉劑的含量無明顯變化.

2.6 樣品的含量測(cè)定

分別取1#樣品，2#樣品，分別在實(shí)驗(yàn)的色譜條件下(C18色譜柱，25％甲醇-75％水的流動(dòng)相，檢測(cè)波長220 nm，流速1.0 mL/min，室溫)測(cè)定環(huán)氧啉含量，進(jìn)樣10 μL，讀取峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見表3.

表3 樣品分析

圖2，3分別為1#樣品溶液的色譜圖，2#樣品溶液的色譜圖.

圖2 1#樣品溶液色譜圖

圖3 2#樣品溶液色譜圖

3 結(jié) 語

本研究通過實(shí)驗(yàn)建立的環(huán)氧啉含量的HPLC的測(cè)定方法，得到了理想的峰形及高的分離度.該分析法準(zhǔn)確，方便.本研究最佳色譜條件為：C18色譜柱(C18250 mm×4.6 mm,5 μg/mL)，流動(dòng)相為甲醇—水(25∶75,V/V)，流速為1.0 mL/min，室溫，220 nm檢測(cè)波長.樣品中環(huán)氧啉原藥的平均回收率是99.65％，其RSD為0.878％.

參考文獻(xiàn)：

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