施麗瑤，梁靜敏，武云鶴，馮 璐，吳曉光

(1.承德醫(yī)學(xué)院2008級(jí)本科，河北承德 067000;2.指導(dǎo)教師)

近來發(fā)現(xiàn)藥物預(yù)處理能起到預(yù)缺血預(yù)處理相類的臨床作用，其中中藥及其提取物以其療效較好、毒副作用小、效果確切而倍受重視[1]。補(bǔ)陽(yáng)還五湯具有益氣、活血、通絡(luò)的功效，對(duì)缺血再灌注損傷腦組織具有一定的保護(hù)作用[2]。然而，補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)微血管的影響尚無(wú)公識(shí)。

1 材料方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥 雄性長(zhǎng)爪沙鼠36只(首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部提供動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(京)2005-0006，體重65-80g,9-12w齡，隨機(jī)分成:假手術(shù)組、模型組、補(bǔ)陽(yáng)還五湯預(yù)處理組(BuYangHuanWu Decoction，BHD），每組12只。補(bǔ)陽(yáng)還五湯用量為51.48g/(kg·d)，模型組和假手術(shù)組均給予生理鹽水1ml/100g灌胃，每日灌胃1次，連續(xù)給藥7d。

1.2 腦缺血再灌注動(dòng)物模型制作 末次給藥1h后，據(jù)Kirino法[3]制作沙鼠腦缺血模型:2%戊巴比妥鈉(30mg/kg）腹腔注射麻醉，分離暴露雙側(cè)頸總動(dòng)脈，以無(wú)創(chuàng)性微動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈，缺血45min后松開動(dòng)脈夾，實(shí)行再灌注。假手術(shù)組分離暴露血管，不夾閉頸總動(dòng)脈。

1.3 微血管顯示及定量分析 再灌注48h后，各組沙鼠采用單寧酸-氯化鐵媒染微血管的方法[4]顯示海馬微血管構(gòu)筑。應(yīng)用MiVnt圖像分析系統(tǒng)對(duì)各組沙鼠海馬的微血管密度(microvessel density,MVD)和微血管面積密度(microvessel area density, MVA)進(jìn)行定量分析。每只沙鼠海馬水平部隨機(jī)選取3張切片，于CA 1-CA4區(qū)各選一個(gè)視野，分別計(jì)算MVD和MVA，取均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)中1只死亡，2只夾閉頸總動(dòng)脈45min后，海馬CA1區(qū)血流量大于基礎(chǔ)值的0.1%，予以剔除，并相應(yīng)補(bǔ)遺。各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用±s表示，利用SPSS 12.0軟件處理。進(jìn)行單因素方差分析，t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

假手術(shù)組沙鼠海馬微血管密集，呈空心狀管道，毛細(xì)血管豐富，彼此相互吻合成網(wǎng);模型組沙鼠海馬微血管明顯減少，毛細(xì)血管閉合、僵直，僅見粗大血管分支，MVD、MVA值與假手術(shù)組相比均有顯著差異性(P<0.01）;補(bǔ)陽(yáng)還五湯組微血管呈管狀，數(shù)量增多，形態(tài)多較正常，MVD、MVA值明顯高于模型組(P<0.05）見附表。

附表 補(bǔ)陽(yáng)還五湯預(yù)處理對(duì)海馬微血管MVD和MVA的影響(±s)vs sham control:*P<0.05;vs model control:#P 0.05

附表 補(bǔ)陽(yáng)還五湯預(yù)處理對(duì)海馬微血管MVD和MVA的影響(±s)vs sham control:*P<0.05;vs model control:#P 0.05

Group n MVD MVA

3 討論

微循環(huán)是血液與組織細(xì)胞發(fā)生接觸的部位，血液流經(jīng)此處時(shí)十分緩慢，是血液和組織細(xì)胞進(jìn)行物質(zhì)交換的重要場(chǎng)所，其結(jié)構(gòu)和功能的完整性是有效血液供應(yīng)的保證。微血管直徑和密度是反應(yīng)微循環(huán)物質(zhì)交換的功能狀態(tài)和局部血流量的主要參數(shù)，MVD、MVA與大腦各區(qū)的神經(jīng)元構(gòu)筑和功能活動(dòng)密切相關(guān)[5]。本研究結(jié)果顯示，腦缺血灌注損傷模型組沙鼠MVD和MVA均明顯低于假手術(shù)組，進(jìn)一步表明微血管密度與神經(jīng)元密度及功能狀態(tài)密切相關(guān)。缺血會(huì)引起部分毛細(xì)血管括約肌痙攣甚至損傷，隨著再灌注時(shí)括約肌不能正常舒張是毛細(xì)血管閉塞，血液灌注不足，因此缺血再灌注組海馬微血管數(shù)量明顯減少，微血管MVD和MVA明顯降低，海馬神經(jīng)功能受損。本實(shí)驗(yàn)用補(bǔ)陽(yáng)還五湯預(yù)處理腦缺血再灌注沙鼠，發(fā)現(xiàn)補(bǔ)陽(yáng)還五湯能夠顯著抑制前腦缺血再灌注沙鼠海馬的MVD及MVA減少，減輕缺血再灌注對(duì)微血管形態(tài)、結(jié)構(gòu)的損傷，增加了微血管再通能力，從而達(dá)到預(yù)防性保護(hù)缺血再灌注損傷腦組織的目的。

[1]張瑜，賀民.缺血預(yù)處理、缺血后處理的腦保護(hù)進(jìn)展[J].華西醫(yī)學(xué)，2009，24(2）:491-493.

[2]陳冬，楊潔紅.補(bǔ)陽(yáng)還五湯抗腦缺血作用的研究進(jìn)展[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2010，28(1):72-74.

[3]Kirino T. Delayed neuronal death in gerbil hippocampus following ischemia[J]. Brain Res ,1982, 23(9): 57-69.

[4]趙淑敏、孔祥玉.一種媒染微血管的新方法-單寧酸—氯化鐵法[J].解剖學(xué)雜志，2001，24(1）:91.

[5]Liu H, Kitazato KT, Uno M, et al.Protective mechanisms of the angiotensin II type 1 receptor blocker candesartan against cerebral ischemia: in-vivo and in-vitro studies[J].J Hypertens,2008,26(7):1435-1445.