離子色譜法測定牛黃上清丸中二氧化硫殘留量＊

喬蓉霞，楊瑞瑞，劉海靜，袁向輝

(1.陜西省食品藥品檢驗所，陜西 西安 710061;2.陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西 咸陽 712046)

牛黃上清丸是傳統(tǒng)中成藥，具有清熱瀉火、散風(fēng)止痛的功效，主要用于熱毒內(nèi)盛、風(fēng)火上攻所致頭痛眩暈、目赤耳鳴、咽喉腫痛、口舌生瘡、牙齦腫痛、大便燥結(jié)等證，由人工牛黃、薄荷、菊花、荊芥穗、白芷、黃連、黃芩、黃柏、川芎、梔子、大黃、連翹、赤芍、當(dāng)歸、地黃、桔梗、甘草、石膏、冰片加工而成[1]。2010年版《中國藥典(一部)》附錄以蒸餾法作為二氧化硫殘留量的測定方法。筆者建立了測定牛黃上清丸中二氧化硫殘留量的離子色譜法，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Dionex ICS-1100型離子色譜儀;電導(dǎo)檢測器;萬能粉碎機;水蒸氣蒸餾裝置;超純水系統(tǒng)(TTL-10B)。氫氧化鉀、亞硫酸鈉、乙二胺四乙酸、硫代硫酸鈉、碘、淀粉均為分析純;實驗用水均為電阻率為18.2 MΩ·cm的去離子水;硫酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液購自國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心(編號為 0942，標(biāo)示值為 1 000 μg/mL)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:AS-11-HC陰離子分析柱(250 mm×4 mm)，保護(hù)柱為AG-11-HC(50 mm×4 mm);淋洗液:20 mmol/L氫氧化鉀溶液，等度淋洗;流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:25 μL 。

2.2 溶液制備

取硫酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液，用去離子水逐級稀釋成質(zhì)量濃度分別為500，300，200，150，100，50，30，20，10，5，3，2，1，0.5，0.3，0.2，0.1 μg/mL的溶液，作為對照品溶液。取牛黃上清丸(大蜜丸，約6 g)1粒，剪碎，精密稱定，置水蒸氣蒸餾裝置的樣品瓶中，加水20 mL潤濕，使其分散，在100 mL量瓶中加入3%的雙氧水20 mL作為接收液，吸取鹽酸5 mL快速加入樣品瓶，立即密封，進(jìn)行水蒸氣蒸餾;至接收瓶中液體接近100 mL時，停止蒸餾，取下接收瓶;用去離子水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗:用牛黃上清丸組方中含有的菊花(未熏硫)作陰性對照，按供試品溶液制備方法同法制成陰性對照品溶液，依法測定。由圖1可見，沒有經(jīng)過硫磺薰制的菊花中未檢出二氧化硫。

圖1 離子色譜圖

線性關(guān)系考察:將2.2項下不同質(zhì)量濃度的對照品溶液分別進(jìn)樣25 μL，以峰面積和進(jìn)樣量繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，硫酸根進(jìn)樣量在0.1～500 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r=0.999 9。

精密度試驗:取已制備好的同一對照品溶液，平行進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積分別為 453.7，473.2，456.9，479.6，451.1，456.8，RSD 為2.58%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:取已制備好的同一供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24 h 時進(jìn)樣。結(jié)果峰面積分別為 438.3，449.0，435.7，449.2，457.6，450.2，RSD為1.83%(n=6)，表明供試品溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗:取同一批牛黃上清丸，依法平行制備6份供試品溶液并測定。結(jié)果樣品中二氧化硫平均含量為24.18 μg/g，RSD為4.51%(n=6)，表明方法重復(fù)性較好。

加樣回收試驗:精密稱定無水亞硫酸鈉，以0.05%乙二胺四乙酸溶解，臨用前用碘量法標(biāo)定[2]，以二氧化硫計質(zhì)量濃度為0.474 0 g/L。取牛黃上清丸1粒(約6 g)，精密稱定，用滴定管分別精密加入亞硫酸鈉對照品溶液0.4，1.2，6.0 mL，按供試品溶液的制備與測定方法每個質(zhì)量濃度平行操作3份，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測定

取6批樣品，依法檢測其中二氧化硫殘留量。結(jié)果批號為1002114，90603，90603，15057，15060，7015101 的 6 批樣品中，二氧化硫殘留量分別為 32，37，11，24，14，8 mg/kg，RSD 分別為 1.3%，0.9% ，1.3%，1.2% ，0.7%，1.0% 。

3 討論

牛黃上清丸的生產(chǎn)工藝是將方中飲片粉末研細(xì)、過篩、混勻后加煉蜜制成，其中甘草、當(dāng)歸、菊花、白芷、桔梗等中藥飲片在傳統(tǒng)加工過程中常采用硫磺熏蒸以達(dá)到潔白、防蟲、防霉的效果，導(dǎo)致這些飲片中殘留有二氧化硫。而牛黃上清丸是以飲片粉末直接投料制成的，硫磺熏蒸過的飲片會將殘留的二氧化硫帶入到制劑中。二氧化硫多以結(jié)合態(tài)的亞硫酸鹽存在，亞硫酸鹽具有一定的毒性，可與蛋白質(zhì)的巰基發(fā)生可逆反應(yīng)，刺激消化道黏膜，服用后會出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹瀉等癥狀，進(jìn)而導(dǎo)致免疫力下降;過量攝入亞硫酸鹽，會影響人體對鈣的吸收，并破壞B族維生素;長期攝入則會對肝臟造成損害[3]。目前，亞硫酸鹽的安全性問題已引起廣泛關(guān)注，因此各國紛紛限定食品和藥品中二氧化硫和亞硫酸鹽的殘留量。目前我國食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)對食品中亞硫酸鹽的允許量(GB 2706-1996)和檢測方法(GB/T 5009.34-1996)均作出了規(guī)定[4]。

加樣回收試驗時，將硫酸根與亞硫酸根的量均折算成二氧化硫后計算;試驗用水必須為電導(dǎo)率大于18 MΩ的超純水，樣品瓶及容量瓶都必須用超純水蕩洗;水蒸氣蒸餾法對樣品進(jìn)行提取時，應(yīng)注意密封。所建立的方法操作簡便快速、干擾少、易于掌握，測定的精密度較好。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:554.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:894.

[3]陳飛東，戴志遠(yuǎn).食品中亞硫酸鹽測定方法的研究進(jìn)展[J].食品研究與開發(fā)，2006，27(8):139-142.

[4]鐘志雄，梁春穗，杜達(dá)安，等.離子色譜法測定食品中亞硫酸鹽的應(yīng)用研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2003，13(1):29-32.