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    大孔樹脂對紅心蘿卜花色苷的純化

    2011-06-01 10:28:09董周永趙國建王笑丹閆琳娜
    食品科學(xué) 2011年4期
    關(guān)鍵詞:紅心大孔花色

    董周永,阿 嘎,趙國建,王笑丹,閆琳娜

    大孔樹脂對紅心蘿卜花色苷的純化

    董周永1,阿 嘎1,趙國建2,王笑丹1,閆琳娜1

    (1.吉林大學(xué)生物與農(nóng)業(yè)工程學(xué)院,吉林 長春 130022;2.山西師范大學(xué)食品科學(xué)與工程系,山西 臨汾 041000)

    比較6種大孔吸附樹脂對紅心蘿卜花色苷的吸附解吸效果,研究AB-8型大孔樹脂對紅心蘿卜花色苷的吸附與解吸條件。結(jié)果表明,AB-8型大孔樹脂是純化紅心蘿卜花色苷較適合的樹脂類型;紅心蘿卜花色苷在AB-8型樹脂上的吸附平衡時間4h,吸附最適溫度20℃,花色苷溶液的最適吸附pH3.0,解吸時宜選用75%乙醇溶液。經(jīng)純化后的蘿卜花色苷為紫黑色粉末,色價為47.8,是純化前的12倍。

    紅心蘿卜;花色苷;純化;大孔樹脂

    紅心蘿卜(Raphanus sativus L.)系十字花科作物,其肉質(zhì)根中含有豐富的花色苷和類黃酮物質(zhì),具有很高的營養(yǎng)保健價值。大量研究表明,果蔬中的花色苷具有較強(qiáng)的清除自由基[1-3]、抗氧化[4-6]、抗癌[7-9]、預(yù)防心血管疾病[10]、減肥[11]等多種生理功能。因此,從果蔬中提取天然的花色苷類色素物質(zhì)已經(jīng)成為目前的研究熱點之一。由于大孔樹脂分離純化與傳統(tǒng)純化工藝相比,具有工藝簡單、效率高、生產(chǎn)成本低、再生方便等諸多優(yōu)點,已經(jīng)成為當(dāng)前分離純化天然產(chǎn)物的主流方法[12]。目前有關(guān)花色苷類物質(zhì)的分離純化已有較多的研究報道,但蘿卜花色苷純化的研究卻鮮見報道。為此本實驗比較色素純化常用的6種大孔樹脂對紅心蘿卜花色苷的吸附分離效果,從中篩選出較為合適的紅心蘿卜花色苷分離純化樹脂類型,并對其吸附解吸性能進(jìn)行研究,以期為紅心蘿卜花色苷類天然抗氧化物質(zhì)的工業(yè)化生產(chǎn)提供技術(shù)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料、試劑與儀器

    表1 6種大孔樹脂的物理參數(shù)Table 1 Physical parameters of 6 kinds of macroporous resins

    紅心蘿卜(青皮紅心蘿卜) 長春市磐石路綜合市場。

    大孔樹脂:HPD-700、HPD-722、HPD-100、HPD-80大孔樹脂 滄州寶恩化工有限公司;AB-8、D-101大孔樹脂 天津市海光化工有限公司。具體型號及物理參數(shù)見表1。

    NaOH、HCl、乙醇等均為國產(chǎn)分析純。

    TDL-4A型離心機(jī) 上海菲恰爾分析儀器有限公司;JA3003A型電子天平 上海精天電子儀器有限公司;RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠;TU-1810型紫外-可見分光光度計 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

    1.2 方法

    1.2.1 紅心蘿卜花色苷提取液的制備

    1.2.1.1 供試液的制備

    新鮮紅心蘿卜洗凈,去皮,蘿卜果肉破碎。加入3倍體積60%乙醇溶液,用2mol/L鹽酸調(diào)其pH值至3.5,在60℃浸提3h后過濾,收集濾液,于50℃下減壓濃縮,冷藏備用。

    1.2.1.2 紅心蘿卜花色苷提取液吸收光譜的測定

    紅心蘿卜花色苷溶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋,用2mol/L鹽酸調(diào)其pH值至3.5,用紫外-可見分光光度計對其在200~800nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描,確定蘿卜花色苷的最大吸收峰。

    1.2.2 樹脂類型的篩選

    1.2.2.1 樹脂預(yù)處理

    6種大孔樹脂用蒸餾水洗凈,分別在燒杯內(nèi)加入高于樹脂層10cm無水乙醇浸泡24h,充分溶脹,用無水乙醇淋洗直至洗出液加適量水無白色渾濁現(xiàn)象為止,再用蒸餾水洗至無醇,濾出樹脂。

    1.2.2.2 樹脂吸附率和解析率的測定

    準(zhǔn)確稱取6種預(yù)處理過的樹脂各1g,置于250mL具塞磨口三角瓶中。準(zhǔn)確量取pH3.5花色苷溶液100mL,于508nm波長處測其吸光度(A1)。然后將其分別加入到三角瓶中,置恒溫振蕩器上于30℃振蕩24h,充分吸附后,過濾,測濾液的吸光度(A2)。將濾出的樹脂加入到100mL、70%乙醇溶液中,置振蕩器上于60℃振蕩24h,充分解吸后過濾,測濾液的吸光度(Ak),將Ak轉(zhuǎn)化成同質(zhì)量濃度時水溶液對應(yīng)的吸光度(A3),計算各樹脂的吸附率(α)和解吸率(β)。

    1.2.3 大孔樹脂對蘿卜花色苷的吸附性能

    1.2.3.1 溫度對大孔樹脂吸附效果的影響

    準(zhǔn)確稱取0.5g經(jīng)過預(yù)處理的大孔樹脂,置于帶塞錐形瓶中,各加入50mL、pH3.0花色苷溶液(A508nm=0.910),于不同溫度下100r/min振蕩吸附,測定上清液508nm處的吸光度,作吸光度隨時間的變化曲線,確定溫度對樹脂吸附性能的影響。

    1.2.3.2 紅心蘿卜花色苷在AB-8上的吸附平衡時間

    準(zhǔn)確稱量0.5g經(jīng)過預(yù)處理的大孔樹脂,置于帶塞錐形瓶中,各加入50mL、pH3.0花色苷溶液(A508nm=0.910),于20℃恒溫振蕩吸附,每隔1h取上清液測定吸光度A508nm,連續(xù)測定6h,作吸光度隨時間的變化曲線,確定紅心蘿卜花色苷在AB-8上吸附平衡時間。

    1.2.3.3 pH值對大孔樹脂吸附效果的影響

    用2mol/L鹽酸將蘿卜花色苷溶液調(diào)配至不同pH值,加入一定量經(jīng)活化的樹脂于室溫下靜置吸附4h后,測上清液吸光度,并計算樹脂的吸附率,確定吸附最佳pH值。

    1.2.4 洗脫劑體積分?jǐn)?shù)的確定

    稱取1g已飽和吸附花色苷的樹脂置于三角瓶中,分別加入pH3.0不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液50mL,恒溫振蕩器100r/min振蕩1h后,于508nm波長處測定各溶液的吸光度,以吸光度表示花色苷的解吸量。

    1.2.5 AB-8對紅心蘿卜花色苷的純化

    將處理好的AB-8大孔樹脂濕法裝柱(1.5cm× 30cm),將已制備的花色苷的粗提液用蒸餾水稀釋3倍,以10mL/min的流速通過層析柱至吸附達(dá)飽和,再以蒸餾水洗脫樹脂至流出液無混濁現(xiàn)象,然后以75%乙醇溶液洗脫,收集洗脫液,于50℃下減壓濃縮得深紫紅色漿狀物質(zhì),干燥得到粉末狀固體。

    1.2.6 紅心蘿卜花色苷的色價測定[13]

    精確稱取0.10g花色苷提取物,用pH3.0檸檬酸緩沖液定容至100mL,稀釋一定倍數(shù),在508nm處測定其吸光度,并計算色價

    式中:A為樣品溶液的吸光度;r為測定吸光度時所吸樣品的稀釋倍數(shù);W為樣品的質(zhì)量/g。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 紅心蘿卜花色苷提取液光譜掃描曲線

    在200~800nm波長范圍內(nèi)對紅心蘿卜花色苷提取液進(jìn)行掃描,光譜掃描曲線如圖1所示。

    圖1 紅心蘿卜花色苷吸收光譜圖Fig.1 Absorption spectrum of anthocyanins from red-core radish

    從圖1可以看出,在紫外吸收光區(qū)有多個吸收峰,這可能是由于提取液中含有其他雜質(zhì)所致;在可見光區(qū)508nm波長處有一個非常明顯的吸收峰出現(xiàn),這與資料基本相符[14],所以本實驗采用508nm作為檢測波長。

    2.2 最佳吸附樹脂的確定

    表2 大孔樹脂對紅心蘿卜花色苷的吸附及解吸性能Table 2 Adsorption and desorption properties of macroporous resin towards anthocyanins from red-core radish

    本研究選用色素純化常用的6種大孔樹脂對蘿卜花色苷進(jìn)行純化,數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計采用DPS v6.55軟件包進(jìn)行處理,結(jié)果以(x±s)表示(表2)。數(shù)據(jù)經(jīng)單因素方差分析,各型號樹脂間的兩兩比較采用LSD法。結(jié)果表明,6種樹脂的吸附率除HPD-722和D-101之間不顯著外,其余各樹脂間均達(dá)到極顯著差異(P<0.01)。而解吸率除HPD-100與D-101差異不顯著外,其他各組間差異也均達(dá)到極顯著差異(P<0.01)。由表2可知,不同型號的樹脂對花色苷的吸附程度不同,吸附率最大的是HPD-100,其次為AB-8,HPD-700的吸附率最低。解吸附率最大為HPD-700,其次為AB-8。這可能是由于花色苷類物質(zhì)屬弱極性化合物,但又有一定的極性和親水性,因而有利于弱極性或非極性樹脂的吸附。此外,其吸附能力大小還與比表面積等關(guān)系密切。同時,解吸率也是衡量大孔樹脂分離天然產(chǎn)物的重要技術(shù)參數(shù)之一。綜合吸附率和解吸率兩個參數(shù),認(rèn)為AB-8型大孔吸附樹脂對蘿卜花色苷具有較好的吸附效果,故確定AB-8為本實驗的最佳樹脂。

    2.3 溫度對AB-8樹脂吸附效果的影響

    花色苷類物質(zhì)在低溫下的穩(wěn)定性較好,故本實驗只研究了20~60℃之間溫度對AB-8樹脂吸附效果的影響。

    圖2 溫度對AB-8樹脂吸附效果的影響Fig.2 Effect of temperature on adsorption efficiency of resin AB-8

    由圖2可知,溫度越高,紅心蘿卜花色苷的吸光度下降越快。這可能由于紅心蘿卜花色苷在AB-8大孔吸附樹脂上的吸附是靠分子間作用力,屬于物理吸附。溫度升高,有效成分在樹脂上的吸附作用降低,在溶液中的溶解度增大,致使花色苷在大孔吸附樹脂上的吸附速度和吸附量降低,因此,在吸附階段,以20℃作為吸附溫度較合適。

    2.4 紅心蘿卜花色苷在AB-8上吸附平衡時間

    圖3 AB-8大孔樹脂對紅心蘿卜花色苷隨時間的吸附趨勢線Fig.3 Adsorption curve of resin AB-8 towards anthocyanins from red-core radish

    圖3 為AB-8樹脂對花色苷吸附過程中花色苷溶液的吸光度隨時間的變化規(guī)律。從圖3可以看出,在吸附起始階段花色苷溶液的吸光度下降迅速,2h后下降速度趨于緩慢,4h后吸光度基本不變。這說明在起始階段AB-8樹脂對花色苷的吸附率增加較快,但隨著時間的延長大孔樹脂在單位時間內(nèi)的吸附量逐漸減小,吸附逐漸趨于飽和,在4h時吸附基本達(dá)到平衡,吸附率不再增加。

    2.5 pH值對AB-8樹脂吸附效果的影響

    圖4 不同pH值條件下AB-8大孔樹脂對花色苷的吸附效果Fig.4 Adsorption capacity of resin AB-8 towards anthocyanin from red-core radish under various pH conditions

    溶液pH值對花色苷的結(jié)構(gòu)與顏色影響很大,由于花色苷類物質(zhì)在酸性條件下比較穩(wěn)定,故本實驗只測定pH2.0~6.0時AB-8樹脂的吸附能力。由圖4可知,當(dāng)pH3.0時吸附率最高,之后隨pH值的增加吸附率逐漸下降。這可能是由于花色苷在酸性條件下主要以穩(wěn)定的黃烊鹽形式存在,而隨著pH值的逐漸增加花色苷存在的4種結(jié)構(gòu)形式的比例不同[15-16]而造成極性的差異,從而影響了吸附量。所以調(diào)pH3.0進(jìn)行吸附,效果較佳。2.6乙醇體積分?jǐn)?shù)對AB-8樹脂解吸率的影響

    洗脫劑具有使大孔樹脂溶脹、減弱被吸附物質(zhì)與樹脂之間吸附力的作用,并可溶解被吸附物質(zhì)。乙醇體積分?jǐn)?shù)對樹脂吸附花色苷的洗脫效果影響較大,本研究進(jìn)行不同體積分?jǐn)?shù)乙醇的洗脫效果實驗。當(dāng)樹脂吸附紅心蘿卜花色苷溶液至上清液吸光度不變時,認(rèn)為樹脂已吸附飽和。用蒸餾水分別清洗吸附飽和的樹脂后,用不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇進(jìn)行靜態(tài)洗脫,結(jié)果如圖5所示。在測定前將各洗脫液調(diào)整至相同乙醇體積分?jǐn)?shù)和pH值,以減少因花色苷在不同乙醇體積分?jǐn)?shù)和酸堿度條件下的吸收誤差。

    圖5 乙醇體積分?jǐn)?shù)對解吸效果的影響Fig.5 Effect of ethanol concentration on desorption efficiency

    由圖5可知,隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)上升,溶液的吸光度也隨著增加,當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)75%時,吸光度達(dá)到最高,但當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)超過75%時,溶液的吸光度又逐漸變小。乙醇體積分?jǐn)?shù)過高或過低,解吸效果都會下降。溶液的吸光度越高,說明解吸效果越好。因此選用75%乙醇作為洗脫劑。

    2.7 純化前后紅心蘿卜花色苷的色價比較

    表3 純化前后花色苷色價的比較Table 3 Comparison on color value of anthocyanins before and after purification

    按1.2.1.1節(jié)方法,紅心蘿卜花色苷提取液經(jīng)減壓濃縮、干燥后得到的花色苷粗提物為紫黑色膏狀物,由于含有較多的單糖及其他脂溶性雜質(zhì),純度較低且容易吸潮。而經(jīng)AB-8大孔樹脂純化后的蘿卜花色苷為紫黑色粉末,按1.2.6節(jié)方法測定其色價,其值為47.8,是純化前的12倍,說明采用AB-8大孔樹脂能有效純化紅心蘿卜花色苷。

    3 結(jié) 論

    AB-8型大孔樹脂是分離純化蘿卜花色苷較為適宜的樹脂類型。其對蘿卜花色苷吸附平衡時間為4h,吸附最適溫度20℃,最適吸附pH3.0,解吸時宜選用75%乙醇溶液。經(jīng)純化后的蘿卜花色苷為紫黑色粉末,其色價為47.8,是純化前的12倍。

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    Purification of Anthocyanins from Red-core Radish by Macroporous Resin

    DONG Zhou-yong1,A Ga1,ZHAO Guo-jian2,WANG Xiao-dan1,YAN Lin-na1
    (1. College of Biological and Agricultural Engineering, Jilin University, Changchun 130022, China;2. Department of Food Science and Engineering, Shanxi Normal University, Linfen 041000, China)

    The adsorption and desorption effects of 6 kinds of macroporous resins on anthocyanins from red-core radish were compared. The adsorption and desorption properties of resin AB-8 on anthocyanins from red-core radish were further investigated. Results indicated that the adsorption equilibrium time of anthocyanins on resin AB-8 was 4 h. The highest adsorption capacity of resin AB-8 towards anthocyanins from red-core radish was achieved under the conditions of pH 3 and 20 ℃. In addition, 75% ethanol could provide the best desorption effect on anthocyanins from resin AB-8. The purified anthocyanins obtained under the optimal conditions were purple dark powder with color value of 47.8, which exhibited 12-fold enhancement compared with the color value of anthocyanins before purification.

    red-core radish;anthocyanins;purification;macroporous resin

    TS209

    A

    1002-6630(2011)04-0021-04

    2010-04-19

    吉林大學(xué)青年教師科研啟動基金項目(450080011100)

    董周永(1982—),男,講師,博士,主要從事農(nóng)產(chǎn)品深加工及其功能性成分研究。

    E-mail:dongzhouyong3421@163.com

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