玫瑰膠囊的微乳薄層鑒別及吸濕特性研究

郎軼詠， 王 強， 梅麗娜， 朱曉紅， 姜同英

(1.中國人民解放軍第202醫(yī)院，遼寧沈陽 110003;2.沈陽藥科大學藥學院，遼寧沈陽 110016)

玫瑰膠囊為中國人民解放軍第二〇二醫(yī)院院內(nèi)制劑，由當歸、夏枯草、杜仲、天麻、紅花幾味中藥經(jīng)過提取加工制成，具有化瘀止痙、養(yǎng)血安神的功效，主要用于各種昡暈，心腦缺血性疾病以及高血壓的治療。玫瑰膠囊成分復雜，吸濕性較強，原標準采用薄層色譜法分別對夏枯草、杜仲進行鑒別，操作涉及提取、萃取、過柱分離、濃縮、干燥等過程，程序復雜且重現(xiàn)性差。為簡化鑒別方法，以含微乳液展開劑作為流動相，聚酰胺薄膜為固定相，研究了玫瑰膠囊的微乳薄層色譜行為，對玫瑰膠囊的有效成分(夏枯草、杜仲、紅花)進行了分離和鑒定，取得了較好的效果［1-3］。為提高藥物的穩(wěn)定性，本實驗以玫瑰膠囊內(nèi)容物吸濕時間曲線、吸濕等溫線、平衡吸濕量和臨界相對濕度作為判斷指標，采用二項式回歸的方法［4］，直觀表征了內(nèi)容物吸濕特性，歸納了內(nèi)容物吸濕性的規(guī)律，為尋找適宜的防潮方法提供實驗依據(jù)及理論支持。

1 儀器與試劑

2F-1三用紫外分析儀(上海精科實業(yè)有限公司);FA2004電子分析天平(上海天平儀器廠);電熱恒溫培養(yǎng)干燥用箱(廈門醫(yī)療電子儀器廠);玫瑰膠囊(中國人民解放軍第202醫(yī)院制劑室，批號:20081103);對照藥材:當歸、夏枯草、杜仲、天麻、紅花由202制劑室提供;十二烷基硫酸鈉(SDS)(湖南爾康制藥有限公司);司盤(SP)80(國藥集團化學試劑限公司);其它試劑均為分析純;

2 實驗方法

2.1 溶液的制備

2.1.1 微乳層析液制備［2-3］取SDS，精密稱定，溶解于適量水中，分別加入表面活性劑、油相，加水至足量，磁力恒溫攪拌器攪拌混勻，放置24 h即得澄清透明的微乳液。將各種改性劑加至組成不同的微乳液中，即得組成不同的微乳層析液。

2.1.2 供試品溶液的制備 取玫瑰膠囊內(nèi)容物3 g，加甲醇10 mL，超聲振蕩30 min，備用。

2.1.3 對照藥材溶液的制備 分別取夏枯草、杜仲、紅花對照藥材5 g，加甲醇10 mL，超聲提取30 min過濾，濾液為對照藥材溶液。

2.1.4 陰性對照溶液的配制 按處方比例，分別制備夏枯草、杜仲、紅花四味藥材的陰性對照溶液。

2.2 薄層色譜 分別吸取夏枯草、杜仲、紅花的對照藥材溶液、陰性對照溶液及玫瑰膠囊供試品溶液及陰性對照溶液各2 μL，點于聚酰胺薄膜，直徑為1～2 mm。以微乳層析液為展開劑，室溫下飽和30 min，上行法展開，展程約6 cm，取出晾干后，立即置紫外光(365 nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上夏枯草顯藍色熒光斑點，杜仲顯藍色熒光斑點;紅花顯綠色熒光斑點。

2.3 吸濕性實驗 精密稱取玫瑰膠囊內(nèi)容物1.0 g，平攤于恒重的稱量瓶中。開蓋置于干燥器中7 d使其脫濕平衡。取脫濕后的內(nèi)容物顆粒，精密稱重后置于不同濕度恒溫干燥器(25℃)，每隔一定時間精密稱重至吸濕重量不再增加，計算吸濕增重百分率及繪制吸濕曲線。

吸濕增重百分率%=(吸濕后樣品重量－吸濕前樣品重量)/吸濕前樣品重量×100%

3 實驗結(jié)果

3.1 微乳展開體系的選擇

3.1.1 SDS對展開效果的影響 分別取不同量的SDS與15.8 g正丁醇、2.5 g正辛烷及77.0 g重蒸餾水配制系列微乳液，以微乳液-甲酸(9∶1)為展開劑，對夏枯草、杜仲、紅花的對照藥材溶液薄層展開，SDS量對對照藥材主斑點Rf影響情況見圖1。夏枯草對照藥材溶液的Rf值隨十二烷基硫酸鈉(SDS)量的增加變化不明顯;紅花對照藥材溶液的Rf值與杜仲對照藥材溶液的Rf值隨十二烷基硫酸鈉(SDS)量的增加先降低后增大(見圖1)。

在W/O型微乳中，表面活性劑極性端位于其內(nèi)部，隨著SDS量的增加，表面活性劑膠團量增加，對極性物質(zhì)(紅花、杜仲)的吸附性增加，Rf值隨SDS量的增加而減小;在O/W型微乳中則相反。當SDS量為6.7 g時微乳由W/O型向O/W型轉(zhuǎn)變［5］，表現(xiàn)為極性物質(zhì)(紅花、杜仲)的增溶作用隨表面活性劑(SDS)量的逐漸增加而增強，其Rf值則隨表面活性劑(SDS)量的逐漸增加而增加;夏枯草Rf值較小，則變化不大。當SDS量為4.7 g，相鄰組分間的分離度較大，分理效果理想。

圖1 玫瑰膠囊主要成分的Rf值與SDS量的關(guān)系圖Fig.1 The relationship between Rfand the amount of SDS

3.1.2 油相對展開效果的影響 以微乳液(SDS-正丁醇-油相-水 =4.7 ∶15.8 ∶2.5 ∶77 g/g)-甲酸(9∶1)為展開劑，對夏枯草、杜仲、紅花的對照藥材溶液薄層展開，結(jié)果見圖2。

圖2 玫瑰膠囊各主要成分Rf值與油相種類的關(guān)系圖Fig.2 The relationship between Rfand the oil phase

微乳中所使用的油相應與界面膜上表面活性劑分子之間保持滲透和聯(lián)系，并易于與表面活性劑形成界面膜，這就意味著油相分子的大小對微乳的形成較為重要。一定范圍內(nèi)，油相分子體積越小，對藥物的溶解力越強，油相分子體積過大則不能形成微乳，所以一般選擇短鏈油相。正己烷、正庚烷、正辛烷為油相的微乳中，選擇正辛烷作為油相，相鄰組分間的分離度較大，分理效果理想，固選其作為油相。

3.1.3 改良劑對層析效果的影響 在保證(SDS-正丁醇-正辛烷-水 =4.7∶15.8 ∶2.5 ∶77 g/g)微乳液組分不變的情況下，考察了多種改性劑，如甲酸，乙酸，乙酸乙酯，氯仿，氨水等對夏枯草、杜仲、紅花的對照藥材分離情況的影響。結(jié)果表明乙酸乙酯，氯仿加入后不能形成微乳。選擇甲酸做為改良劑相鄰組分間的分離度較大，分離效果理想;乙酸的加入不能改善層析結(jié)果中的拖尾現(xiàn)象。固選擇甲酸作為改良劑。甲酸加入量對各組分的Rf值的影響結(jié)果見圖3。甲酸的含量大于10%時，相鄰組分間的分離度較大，分離效果理想，固選其微乳與甲酸配比為9∶2。實驗中發(fā)現(xiàn)丙酮的加入可明顯縮短展開時間且不影響展開效果，因此，選擇甲酸、丙酮同時作為改性劑，以獲得最佳層析效果。丙酮加入量對展開效果的影響見圖4。微乳-甲酸-丙酮比例達到9∶2∶1時，相鄰組分間的分離度較大，分離效果理想。

圖3 甲酸量對各主要成分Rf值的影響Fig.3 The effect of formic acid on the Rf

圖4 丙酮對玫瑰膠囊主要成分Rf值的影響Fig.4 The effect of acetone on the Rf

3.2 層析結(jié)果 以含水量77%微乳液-乙酸-丙酮(9∶2∶1)為展開系統(tǒng)，玫瑰膠囊的薄層色譜見圖5。玫瑰膠囊色譜中，供試品色譜所呈對照藥材溶液主斑點的位置和熒光顏色與對照品相同，各陰性對照液無此斑點。玫瑰膠囊中夏枯草、杜仲及紅花3種主要成分在所選擇的展開系統(tǒng)中分離效果較佳，此展開系統(tǒng)可用于玫瑰膠囊中夏枯草、杜仲及紅花3種主要成分。

圖5 玫瑰膠囊主要成分鑒別微乳薄層色譜圖Fig.5 TCL chromatograms of Meigui Capsule

3.3 吸濕時間曲線的數(shù)據(jù)化處理及結(jié)果 對玫瑰膠囊內(nèi)容物吸濕-時間曲線進行一元二次方程擬和得方程:

式中w為吸濕量，t為時間，a，b，c分別為常數(shù)。對方程(1)進行一階求導得到吸濕速率(r)方程:

由方程(2)可知當t=0時，吸濕的初始速度為r0=b;當達吸濕平衡時，吸濕速度為0，則達到吸濕平衡時間為t′=－b/2a，樣品的吸濕平衡時量為w′=at′2+bt′+c［6］。數(shù)據(jù)分析結(jié)果見表 1。玫瑰膠囊內(nèi)容物初始吸濕速率隨環(huán)境相對濕度的增加而加快，相對濕度達到62%，初始吸濕速率增大明顯，提示我們生產(chǎn)過程中相對濕度應控制在60%以下。玫瑰膠囊內(nèi)容物吸濕平衡時間與吸濕增重百分率計算值與實測值相一致。

表1各濕度吸濕數(shù)據(jù)結(jié)果Tab.1 The data of moisture absorption

3.3 相對濕度的測定 以平衡吸濕百分率對相對濕度作圖，分別對曲線兩端作切線，切線交點所對應的橫坐標即為玫瑰膠囊內(nèi)容物的臨界相對濕度為65%(見圖6)，與計算值相符。

圖6 25℃條件下吸濕平衡曲線Fig.6 Critical relative humidity curve

4 討論

中成藥的成分非常復雜，有效成分的鑒定比較困難。本課題研究了微乳薄層色譜法對玫瑰膠囊有效成分的分離鑒定。以微乳液作為展開劑與常用展開劑相比，被測組分與其它組分的分離度顯著提高，樣品中檢出的斑點明顯增多。微乳薄層色譜的原理與膠束色譜理論大致相同［7］，當以微乳為流動相時，溶質(zhì)的分配可能是在固定相、微乳液的水連續(xù)相及油核和界面膜數(shù)相之間進行。由于微乳液的富集增溶，降低界面張力作用，極性大的分子分配于微乳水連續(xù)相中，極性小的分子分配于微乳油核或穿插排列于表面活性劑與助表面活性劑組成的膜柵欄中。并且由于分配、吸附、靜電、疏水、立體等效應，使待測藥品中各組分在微乳液中展開是遷移速度不同，使其具有獨特的選擇性，可同時分離親水物質(zhì)和疏水物質(zhì)，對帶電成分和非帶電成分亦有較好的分離選擇，適用于分離結(jié)構(gòu)和性質(zhì)差別細微的復雜組分的物質(zhì)，且更有利于提高色譜效率。本研究同時對同一藥物中幾種有效成分在微乳中的色譜行為進行探討［8-10］。實驗表明，性質(zhì)差別較大的各類組分和性質(zhì)結(jié)構(gòu)差別細微的同系物可同時進行分離鑒定，克服了常用層析方法一次只能鑒定某單一成分的缺憾，為中成藥有效成分的分離鑒定提供了一種高效簡捷的新方法。

玫瑰膠囊為鋁塑包裝，具有一定的防潮性能，基本能滿足產(chǎn)品的需求，但生產(chǎn)環(huán)節(jié)中涉及到整粒結(jié)束到成品包裝前半成品儲存條件，膠囊內(nèi)容物吸濕曲線可以直觀地比較不同提取物吸濕程度的強弱，而對吸濕過程的數(shù)據(jù)處理可以為比較不同吸濕性提取物提供豐富的理論數(shù)據(jù)。新的吸濕特性參數(shù)可以比較準確的直接表征中藥提取物的吸濕能力，對指導優(yōu)化生產(chǎn)過程中防潮工藝的選擇，優(yōu)選產(chǎn)品包裝材料，優(yōu)化半成品儲存條件有重要的意義。

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