醋烘制川楝子炮制工藝的探討*

竇志英，李迎春，鄭蓓蓓

（天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193）

醋烘制川楝子炮制工藝的探討*

竇志英，李迎春，鄭蓓蓓

（天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193）

[目的]優(yōu)選醋制川楝子炮制工藝，為醋制川楝子規(guī)范化生產(chǎn)和質(zhì)量保證提供依據(jù)。[方法]以川楝素為指標(biāo)，采用高效液相色譜法（HPLC），以悶潤(rùn)時(shí)間、藥材破碎粒度及烘制溫度為考察因素，以正交實(shí)驗(yàn)法L9（34）優(yōu)選醋制川楝子的最佳炮制工藝。[結(jié)果]最佳炮制工藝為：小粒度川楝子飲片，加20%醋拌潤(rùn)，悶潤(rùn)2 h后，置烘箱中130℃下烘干。[結(jié)論]藥材破碎粒度和烘制溫度對(duì)川楝子醋制工藝有顯著性影響，優(yōu)選出的炮制工藝穩(wěn)定可行，重現(xiàn)性好。

川楝子；川楝素；炮制工藝；正交試驗(yàn)

川楝子，為楝科植物川楝（Melia toosendan Sieb.et Zucc.）的干燥成熟果實(shí)，別名金鈴子，又名楝實(shí)。性味苦寒，有小毒，歸肝、小腸、膀胱經(jīng)，具疏肝泄熱、行氣止痛、殺蟲(chóng)之功效[1]。川楝子生用有毒，炮制后能降低毒性，而且能增強(qiáng)理氣止痛作用[2]，所以常炮制后入藥。傳統(tǒng)的炮制方法有炒焦、鹽制、醋制等，中醫(yī)傳統(tǒng)理論認(rèn)為，醋制川楝子可行氣散瘀。醋性味酸、苦、微溫，入肝經(jīng)血分，具有收斂、解毒、散瘀、止痛的作用。但目前對(duì)醋制川楝子的工藝和質(zhì)量控制等方面研究較少，藥典也未對(duì)醋制川楝子做具體的規(guī)定，缺乏規(guī)范化的工藝過(guò)程和標(biāo)準(zhǔn)。由于川楝子的化學(xué)成分及其藥理研究也較少，其有效成分尚不確定，目前認(rèn)為川楝子的三萜類(lèi)成分為其主要成分，其中川楝素為其三萜類(lèi)成分的指標(biāo)性成分，既是有毒成分又是有效成分[3]，因此常作為川楝子質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)，2010版《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定以川楝素的含量限度作為川楝子藥材和炒川楝子飲片的質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)。鑒于此，本研究以川楝素為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)初步探討醋制川楝子的最佳炮制工藝。

1 儀器與藥品

美國(guó)Softa高效液相色譜（HPLC）系統(tǒng)（6000 LDI PUMP；6000 PVW UV/VLS DETECTOR）；手動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)；烘箱DHG78-1（湖北省黃石市醫(yī)療器械廠）；粉碎機(jī)（武義縣屹立工具有限公司），F(xiàn)A 1004N型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司），KQ-500E型醫(yī)用超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），HH-S型水浴鍋（鞏義市英峪予華儀器廠）。

食用醋（天津市天立獨(dú)流老醋股份有限公司），乙腈為色譜純（天津市康科德科技有限公司），其余試劑均為分析純，水為超純水。川楝素標(biāo)準(zhǔn)品（供含量測(cè)定用，HPLC≥98%，批號(hào)58812-37-6，成都曼思特生物科技有限公司）。川楝子飲片購(gòu)于天津市中藥飲片廠，產(chǎn)自四川，批號(hào)1001084；經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院生藥教研室馬琳教授鑒定為楝科植物川楝（Melia toosendanSieb.etZucc.）的成熟果實(shí)。

2 方法與結(jié)果

2.1 炮制品中川楝素的含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件 色譜柱為HypersilODS2（250mm×4.6mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-水（30∶70），流速為1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm，柱溫為35℃，進(jìn)樣量10μL。理論塔板數(shù)按川楝素峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000?？瞻兹軇┥V圖中在川楝素相應(yīng)位置上無(wú)干擾，說(shuō)明此系統(tǒng)條件無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取川楝素對(duì)照品適量，加甲醇制成0.270 g/L的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.1.3 供試品溶液的制備 精密稱量炮制品粉末（過(guò)40目篩）約1 g，置錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲提取30min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)。重復(fù)提取3次，合并濾液蒸干，甲醇溶解定容至10mL容量瓶中，搖勻即得。

2.1.4 線性關(guān)系考察 精密吸取0.270 g/L川楝素對(duì)照品溶液，以甲醇配制質(zhì)量濃度為：0.270、0.135、0.0675、0.03375、0.016875、0.0084375g/L，在上述色譜條件下測(cè)定川楝素的峰面積值，以峰面積為縱坐標(biāo)Y，濃度（mg/L）為橫坐標(biāo)X，計(jì)算回歸方程，得回歸方程Y^=2 064.7X+1 053.3，r=0.999 9。川楝素在0.084 375～2.70μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.1.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定川楝素含量，記錄其峰面積，以峰面積計(jì)算相對(duì)均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）為0.146%。

2.1.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品，分別于0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)定川楝素含量，記錄其峰面積，以峰面積計(jì)算RSD為2.641%。

2.1.7 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品，按照供試品溶液的制備方法，分別制備6份供試品溶液，測(cè)定川楝素含量，記錄其峰面積，以峰面積計(jì)算RSD為1.831%。

2.1.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱定已測(cè)知含量的樣品6份各1 g，分別精密加入一定量的川楝素對(duì)照品，按含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，計(jì)算RSD為1.069%。

2.1.9 樣品含量測(cè)定 精密稱取川楝子生品和炮制品粉末各1 g，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液，按上述含量測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定。

2.2 炮制工藝的優(yōu)選

2.2.1 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 由單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，用醋量和烘制時(shí)間對(duì)川楝子中川楝素的含量影響不大，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，故本實(shí)驗(yàn)采用L9（34）正交表對(duì)悶潤(rùn)時(shí)間（A）、藥材破碎粒度（B）、烘制溫度（C）進(jìn)行考察，用醋量則選取傳統(tǒng)用量20%，以川楝素含量為考察指標(biāo)，進(jìn)行工藝技術(shù)參數(shù)的篩選。因素水平見(jiàn)表1。

表1 因素及水平Tab.1 Factorsand Levels

2.2.2 川楝子炮制品的制備和含量測(cè)定 按正交表安排進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，取不同大小（B）的川楝子100 g，取定量的醋悶潤(rùn)不同時(shí)間（A）（醋的用量為每100 kg川楝子用20 kg米醋），置烘箱中采用不同溫度（C）烘干后取出，放冷。按2.1.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，結(jié)果和方差分析見(jiàn)表2-3。

表2和表3結(jié)果顯示：藥材粒度和烘制溫度對(duì)結(jié)果有顯著性影響，從直觀分析極差的結(jié)果可知三個(gè)因素的影響程度為C＞B＞A，即烘制溫度＞藥材破碎粒度＞悶潤(rùn)時(shí)間。醋制川楝子最佳工藝為A2B3C2，考慮到悶潤(rùn)時(shí)間對(duì)其結(jié)果影響不大，同時(shí)出于節(jié)約成本和資源的考慮，確定其最佳工藝為A1B3C2，即小粒度川楝子飲片100 g加入20mL醋，密閉悶潤(rùn)2 h后，置烘箱中130℃烘干，取出放涼。

2.2.3 驗(yàn)證 按上述A1B3C2工藝制備3批炮制品，按上述含量測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定。生川楝子中川楝素含量為1.981mg/g，三批醋川楝子中川楝素含量分別為 1.105、1.114、1.109mg/g，表明優(yōu)選的工藝條件穩(wěn)定合理可行。醋制品與生品相比，川楝素含量均有所下降，與生品比較醋制品川楝子中川楝素降低了約44%。

表2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.2 The resultsof orthogonal test

表3 方差分析表Tab.3 Analysisof variance table

3 討論

川楝子為果實(shí)類(lèi)中藥，濁臭有毒，在炒制過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生異味令人咳嗽，同時(shí)火力控制不好還影響其質(zhì)量。故本實(shí)驗(yàn)對(duì)川楝子的炮制方法進(jìn)行改進(jìn)，將川楝子用醋潤(rùn)透后，置烘箱中在一定溫度下烘制一定時(shí)間后取出放涼即可。該法制得的川楝子飲片外觀色澤均勻，且省力省時(shí)，也克服了人工操作時(shí)異味刺激鼻喉的缺點(diǎn)。該方法適用于大生產(chǎn)的要求。采用本實(shí)驗(yàn)所建立的炮制工藝技術(shù)參數(shù)來(lái)炮制醋川楝子，該醋川楝子中川楝素含量均明顯低于生品，炮制后毒性有所降低，降低毒性的同時(shí)，仍保留其部分含量以令其發(fā)揮藥效，達(dá)到毒效并存的目的。

川楝素是川楝子的主要成分之一，既為其活性成分，也是毒性成分。川楝素的結(jié)構(gòu)是半縮醛結(jié)構(gòu)，始終以互變異構(gòu)體存在，所以計(jì)算時(shí)要以兩個(gè)峰面積之和計(jì)算[3-4]。

2010版《中華人民共和國(guó)藥典》[1]要求川楝子藥材中川楝素的含量應(yīng)為0.060%～0.20%，本實(shí)驗(yàn)中生川楝子符合要求。川楝子項(xiàng)下僅收載了炒川楝子炮制品，炒川楝子飲片中川楝素的含量應(yīng)為0.040%～0.20%，但尚無(wú)醋川楝子炮制品化學(xué)成分含量限定和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本實(shí)驗(yàn)為建立醋川楝子中川楝素的含量限定和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。同時(shí)我們也將根據(jù)川楝子所含的其他成分[5-6]進(jìn)行深入研究，從多成分、多藥效的角度來(lái)探討川楝子炮制后增效減毒的機(jī)制。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010，39-40.

[2]紀(jì)青華，陸兔林.川楝子不同炮制品鎮(zhèn)痛抗炎作用研究[J].中成藥，1999，21（4）：181-183.

[3]鐘熾昌，謝晶曦，陳淑鳳，等.川楝素的化學(xué)結(jié)構(gòu)[J].化學(xué)學(xué)報(bào)，1975，33(1):35-47.

[4]舒國(guó)欣，梁曉天.關(guān)于川楝素的化學(xué)結(jié)構(gòu)的修正[J].化學(xué)學(xué)報(bào)，1980，38(2):196-198.

[5]李 豐，朱 訓(xùn)，陳 敏，等.川楝子化學(xué)成分研究[J].中藥材，2010,33（6）：910-912.

[6]周 英，王慧娟，郭東貴，等.川楝子化學(xué)成分的研究[J].中草藥，41（9）:1421-1423.

The study of the processing technology of Fructus Toosendan processed by vinegar

DOUZhi-ying,LIYing-chun,ZHENGBei-bei
(Tianjin University of TraditionalChineseMedicine,Tianjin,300193,China)

[Objective]To optimize the bestprocessing technology of Fructus Toosendan for standardization of fructus toosendanin processed by the vinegarand provideabasis forquality assurance.[Methods]Thebestprocessing techniquewasobtained through determining thecontentof toosendaninby HPLCand theorthogonal testwasadopted toexplore the influencesof three factors(thebake temperature,infiltrated timewith vinegarandmedicinalspecifications)on the content.[Results]Thebestprocessing techniquewas to infiltrate 2 hours with 20%vinegar,bake at130℃.[Conclusion]Themedicinal specifications and the bake temperature had the significance influence according to the contentof the toosendanin.The bestprocessing technique is stable,feasible and good repetion.

Fructus Toosendan;toosendanin;processing technique;orthogonalexperiment

R284.2

A

1672-1519(2011)04-0338-03

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81073053）。

竇志英（1967-），女，教授，碩士研究生導(dǎo)師，主要研究方向?yàn)橹兴巶鹘y(tǒng)制藥工藝和中藥成分研究。

2011-05-07）