泌尿生殖道沙眼衣原體臨床株體外藥物敏感性檢測(cè)及分析

吳志周 祝 新 楊日好 柯建良 黃澍杰

廣東省江門市皮膚醫(yī)院 529000

泌尿生殖道沙眼衣原體的感染是世界范圍內(nèi)最常見的性傳播疾病之一,其感染率在我國也有逐年上升的趨勢(shì)[1]。沙眼衣原體是一種嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生的病原體,相對(duì)于普通細(xì)菌和支原體,其藥敏試驗(yàn)較為復(fù)雜,給臨床監(jiān)測(cè)其耐藥性帶來困難。近年來由于抗生素的濫用和使用不規(guī)范,導(dǎo)致沙眼衣原體對(duì)多種抗生素耐藥性增加,療效下降。有關(guān)沙眼衣原體臨床株耐藥的報(bào)道日益增多[2～4],涉及的抗生素主要有大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類和喹諾酮類。為了解本地區(qū)沙眼衣原體臨床株的藥物敏感性情況,筆者進(jìn)行了本次實(shí)驗(yàn)。

1 材料

1.1 病例來源 2010年8月-2011年5月我院性病門診就診的有泌尿生殖道炎癥癥狀的患者。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)株 沙眼衣原體D型標(biāo)準(zhǔn)株和McCoy細(xì)胞株由中山醫(yī)科大學(xué)微生物教研室惠贈(zèng)。

1.3 細(xì)胞生長培養(yǎng)基 細(xì)胞生長培養(yǎng)基為RPMI 1640(美國Gibco公司)培養(yǎng)基,用前補(bǔ)充谷氨酰胺(0.1%)、HEPES(0.25%)、Na2CO3(0.2%)、小牛血清(10%)以及適量的萬古霉素、慶大霉素、兩性霉素B等。

1.4 衣原體生長培養(yǎng)基 在細(xì)胞生長培養(yǎng)基中添加放線菌酮(0.1%)、葡萄糖(0.5%)。

1.5 抗菌藥物 強(qiáng)力霉素、四環(huán)素、阿奇霉素、交沙霉素、紅霉素、克拉霉素、左氧氟沙星和司帕沙星均購自上海生物制品檢定所?？咕匕凑赵噭┱f明書溶解后,用1640培養(yǎng)基稀釋到一定濃度后分裝,-70℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.6 主要器材 96孔U型板、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、CO2培養(yǎng)箱。

2 方法

2.1 臨床菌株培養(yǎng) 將男性尿道、女性宮頸拭子,接種到McCoy單層細(xì)胞株上,培養(yǎng)篩查出陽性標(biāo)本,并增殖傳代至一定濃度(每ml約7.8×106沙眼衣原體包涵體)后保存在蔗糖谷氨酸磷酸鹽緩沖液(SPG),作為臨床待檢株。

2.2 McCoy單層細(xì)胞的培養(yǎng) 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶中已培養(yǎng)成單層的McCoy細(xì)胞消化洗脫后移種于96孔U型板中,并于各孔中加入適量的細(xì)胞生長培養(yǎng)基,置37℃、5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)24h,使之成為致密單層細(xì)胞[每孔含(1～2)×105細(xì)胞]。

2.3 藥物敏感性測(cè)定 向已培養(yǎng)成致密單層Mc-Coy的96孔U型板中接種沙眼衣原體(4×104包涵體),3 000r/min、30℃離心 1h,置 37℃、5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)2h,然后棄去上清液,加入衣原體生長培養(yǎng)基。設(shè)置第1孔為陽性對(duì)照孔(接種沙眼衣原體,但不加藥),第8孔為陰性對(duì)照孔(不接種沙眼衣原體,但加藥),從第2孔開始加入已配制好的相應(yīng)待測(cè)抗菌藥物,依次倍比稀釋至第7孔,使抗菌藥物形成6個(gè)等比稀釋濃度,D型標(biāo)準(zhǔn)株作對(duì)照,37℃、5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)48～72h。棄去96孔U型板中的維持生長培養(yǎng)基,風(fēng)干并用丙酮固定后,用碘染色,鏡下觀察未見沙眼衣原體包涵體生長的最小稀釋度即為該藥物對(duì)沙眼衣原體的MIC。

3 結(jié)果

本文將收集到的100例臨床陽性株進(jìn)行傳代,共培養(yǎng)出符合要求(McCoy細(xì)胞感染率達(dá)90%以上)沙眼衣原體陽性株73株。MIC值分別為:強(qiáng)力霉 素 0.016 ～ 0.125μ g/ml、四 環(huán) 素 0.039 ～0.625μ g/ml、阿奇霉素 0.032～ 1μ g/ml、交沙霉素0.005～ 0.16μ g/ml、紅霉素 0.125 ～ 2μ g/ml、克拉霉素 0.004～ 0.064μ g/ml、左氧氟沙星 0.063～1.0μ g/ml、司帕沙星 0.032 ～ 0.256μ g/ml。 詳細(xì)結(jié)果見表1。

表1 73株沙眼衣原體臨床標(biāo)本藥敏結(jié)果

4 討論

目前,國內(nèi)外尚無規(guī)范的沙眼衣原體體外藥敏結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn),臨床上針對(duì)沙眼衣原體的治療主要根據(jù)推薦方案及經(jīng)驗(yàn)用藥[5],缺乏藥敏試驗(yàn)指導(dǎo)用藥,不同地區(qū)的菌株對(duì)藥物的敏感性也不盡相同。為給臨床用藥提供理論依據(jù),并評(píng)價(jià)藥敏結(jié)果與臨床療效的關(guān)系,本試驗(yàn)選取本院用于治療沙眼衣原體感染的幾種常用抗菌藥物進(jìn)行藥敏試驗(yàn),結(jié)果顯示克拉霉素及阿奇霉素有較強(qiáng)的抗菌活性,強(qiáng)力霉素次之,紅霉素和左氧氟沙星的抗菌活性則較低。

筆者在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),沙眼衣原體臨床株對(duì)所有受試抗菌藥物均表現(xiàn)出一定的敏感性,未發(fā)現(xiàn)耐藥株。與國內(nèi)韓建德和邵麗麗的報(bào)道一致[6,7]。而在國外,筆者檢索了近幾年的文獻(xiàn),Samra在體外測(cè)定50例泌尿生殖道沙眼衣原體對(duì)四環(huán)素藥物的敏感性,發(fā)現(xiàn) 44%的菌株0.5μ g/ml時(shí)被抑制[2],表明對(duì)四環(huán)素的抵抗相當(dāng)嚴(yán)重;Misyurina對(duì)4例患者的6株沙眼衣原體標(biāo)本進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)其中4株對(duì)阿奇霉素耐藥[3];Somani報(bào)道了多重耐藥(耐多西環(huán)素、阿奇霉素及氧氟沙星)的沙眼衣原體株[4]。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明左氧氟沙星、紅霉素和司帕沙星的MIC值較高,沙眼衣原體對(duì)這些藥物的敏感性低,與韓建德報(bào)道的MIC值有明顯的提高[6],提示隨著喹喏酮類抗菌素的廣泛使用,其抗沙眼衣原體的活性明顯降低,這與筆者在臨床上觀察到的這些藥物在治療沙眼衣原體感染時(shí)失敗的病例日益增多相符合。阿奇霉素是推薦方案中的首選藥物,本文檢測(cè)結(jié)果與尚淑賢的報(bào)道相一致[8],均有較強(qiáng)的抗菌活性。阿奇霉素、克拉霉素是新的大環(huán)內(nèi)酯類,對(duì)沙眼衣原體具有較低的抑菌和殺菌濃度,有效的血藥濃度為0.400～ 0.450μ g/ml。本實(shí)驗(yàn)顯示,沙眼衣原體對(duì)阿奇霉素及克拉霉素具有高度敏感性,兩者的MIC均低于常規(guī)用藥時(shí)的血藥濃度,有較強(qiáng)的抗菌活性和殺菌作用,與臨床上用這些藥物在治療沙眼衣原體感染成功率相一致。因此,筆者認(rèn)為阿奇霉素及克拉霉素是臨床上治療泌尿生殖道沙眼衣原體感染的首選藥物。

[1] 徐麗玲,顧偉鳴,楊陽,等.1996～2003年上海市某醫(yī)院泌尿生殖道分泌物標(biāo)本性病檢測(cè)結(jié)果分析〔J〕.中國艾滋病性病,2005,11(2):121-124.

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[8] 尚淑賢,鐘銘英,張津萍,等.沙眼衣原體臨床株體外藥物敏感性檢測(cè)〔J〕.中華皮膚科雜志,2007,40(12):759-760.