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    MCM5在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義

    2011-05-03 00:27:12班媛媛李道勝李曉梅
    實(shí)用癌癥雜志 2011年4期
    關(guān)鍵詞:細(xì)胞周期食管癌陽(yáng)性率

    班媛媛 李道勝 李曉梅 龐 宇 葉 紅

    肺癌為當(dāng)前世界病死率最高的惡性腫瘤,其中非小細(xì)胞肺癌所占比例高達(dá)85%。微小染色體維持蛋白(minichromosomemaintenance proteins,MCM)家族,是一組與DNA復(fù)制和細(xì)胞增生密切相關(guān)的蛋白家族,許多研究發(fā)現(xiàn)它的mRNA水平在細(xì)胞周期中呈周期性變化,只在增殖細(xì)胞中表達(dá),在靜止細(xì)胞中不表達(dá),而且每個(gè)細(xì)胞周期只表達(dá)一次。它的檢測(cè)水平的增高不但標(biāo)志著惡性細(xì)胞的增殖,而且標(biāo)志著非典型細(xì)胞的增生和潛在癌性細(xì)胞的增生。因此,MCM可以作為腫瘤有效標(biāo)志物的候選因子。我們應(yīng)用免疫組化方法,對(duì)非小細(xì)胞肺癌石蠟包埋組織標(biāo)本中的MCM5進(jìn)行檢測(cè),觀察其在病變組織中的表達(dá),探討了其與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系。

    1 材料與方法

    1.1 標(biāo)本收集

    收集泰安市中心醫(yī)院2008年~2010年收治的、經(jīng)病理檢查確診的非小細(xì)胞肺癌石蠟包埋存檔組織78例,其中男性50例,女性28例。年齡36~80歲。組織學(xué)分類:鱗狀細(xì)胞癌46例,腺癌32例,其中高分化19例,中分化39例,低分化20例。78例中無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者29例,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者49例;根據(jù)2002年國(guó)際抗癌聯(lián)盟TNM分期:Ⅰ期20例,Ⅱ期27例,Ⅲ期31例。所有患者術(shù)前均未經(jīng)放療及化療,癌旁正常肺組織標(biāo)本40例。

    1.2 免疫組化法

    每一病例蠟塊連續(xù)切片1張,厚5μm。MCM5購(gòu)自北京中杉金橋生物公司,染色均采用免疫組化SP法,用微波修復(fù)抗原。MCM5染色用從生物公司購(gòu)買的陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照,以封閉血清代替一抗作為陰性對(duì)照。

    1.3 結(jié)果判定

    MCM5免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞核,陽(yáng)性物質(zhì)呈黃色顆粒狀,染色強(qiáng)時(shí)可呈棕褐色。采用Greenspan半定量法[1]對(duì)細(xì)胞染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞百分率進(jìn)行評(píng)分。①根據(jù)每張切片中細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分:細(xì)胞內(nèi)無染色為0分;淺黃色為1分;棕黃色為2分;棕褐色為3分。②按組織切片中的陽(yáng)性染色細(xì)胞數(shù)占全部腫瘤細(xì)胞百分比記分(隨機(jī)取10個(gè)高倍鏡視野的平均數(shù)):陽(yáng)性細(xì)胞率為0,記0分,<10%為1分,10% ~50%為2分,>50%為3分。③按上述兩項(xiàng)指標(biāo)的分?jǐn)?shù)乘積分為:0分為陰性(-),1~2分為弱陽(yáng)性(+),3~4分為中度陽(yáng)性(++),>4分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    采用 SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。MCM5蛋白陽(yáng)性率的分析比較采用卡方檢驗(yàn)和Fisher's精確概率檢驗(yàn),以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 非小細(xì)胞肺癌組及正常肺組織組中的MCM5蛋白表達(dá)情況(表1)

    MCM5蛋白在正常肺組織組和非小細(xì)胞肺癌組中陽(yáng)性率分別為12.50%和59.97%,兩組比較有顯著性差異(χ2=23.27 ,P=0.000)。

    2.2 MCM5表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系(表2)

    MCM5陽(yáng)性表達(dá)與NSCLC組織學(xué)類型及分化程度無關(guān);淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性組與陰性組陽(yáng)性表達(dá)率比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.907,P=0.015);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期間比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.657,P=0.031)。

    3 討論

    在腫瘤發(fā)生過程中,細(xì)胞周期調(diào)控異常是其內(nèi)在原因,細(xì)胞增殖調(diào)控異常與腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切,而腫瘤細(xì)胞增殖活性與腫瘤生物學(xué)行為更是密切相關(guān),是用于反映腫瘤良惡性及惡性程度的重要指征。研究發(fā)現(xiàn),MCM蛋白與細(xì)胞周期密切相關(guān),是啟動(dòng)細(xì)胞DNA復(fù)制并調(diào)控細(xì)胞由G1期進(jìn)入S期的關(guān)鍵性蛋白,其本質(zhì)是1種核蛋白復(fù)合物。目前發(fā)現(xiàn)在靜止/分化細(xì)胞中MCM蛋白不表達(dá),而在增殖/腫瘤細(xì)胞中呈高表達(dá),是近年來發(fā)現(xiàn)的1種較好地反映細(xì)胞增殖活性的新指標(biāo)。大量研究表明[2,3]MCM蛋白能夠敏感而特異地反映細(xì)胞的增殖狀況,在判斷腫瘤的惡性度及評(píng)估預(yù)后方面有著較重要的意義。MCM 5是MCM蛋白復(fù)合物之一,是1種與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的因子,它的檢測(cè)可直接反映MCM蛋白的表達(dá)水平[4]。Sirieix等[5]檢測(cè)食管標(biāo)本發(fā)現(xiàn)在食管癌中呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。而在大多研究表明,MCM5與惡性腫瘤的發(fā)生、腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移及惡性程度關(guān)系密切,可以作為預(yù)測(cè)惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展和判斷預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo),為惡性腫瘤的臨床治療提供可靠的理論依據(jù)。國(guó)內(nèi)以往對(duì)乳腺癌[6]、食管癌[7]等進(jìn)行過研究,取得了一些進(jìn)展,但對(duì)非小細(xì)胞肺癌的研究甚少,其檢測(cè)在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)可能具有更重要臨床意義。

    表1 非小細(xì)胞肺癌及正常肺組織中MCM5蛋白表達(dá)情況(例,%)

    表2 MCM5表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例,%)

    本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,MCM5在正常肺組織、非小細(xì)胞肺癌組織中均存在不同程度的表達(dá),且陽(yáng)性率呈上升趨勢(shì),正常肺組織、非小細(xì)胞肺癌組織中其表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,這與段智[6]、趙銘等[7]在乳腺癌及食管癌中的結(jié)果基本一致。Sirieix等[6]檢測(cè)食管標(biāo)本發(fā)現(xiàn)MCM5在食管癌中呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),而在大多數(shù)正常食管黏膜中為陰性,與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致,提示MCM5能較好地反映腫瘤細(xì)胞的增殖特性,對(duì)腫瘤的診斷有一定意義,說明MCM5可能參與了非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生和進(jìn)展;在非小細(xì)胞肺癌中,MCM5陽(yáng)性率與腫瘤分化程度無關(guān)。MCM5陽(yáng)性率與TNM分期及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移均有相關(guān)性。說明MCM5作為強(qiáng)有力的增殖指標(biāo),它的高表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)。與 Cinzia的試驗(yàn)結(jié)果一致[8],本文結(jié)果提示,MCM5可能是區(qū)分非小細(xì)胞肺癌不同病理分期的有價(jià)值的分子標(biāo)志物,對(duì)治療選擇及預(yù)后評(píng)估有參考意義,但有待于后繼更大樣本驗(yàn)證。本研究表明,MCM5表達(dá),對(duì)非小細(xì)胞肺癌的輔助診斷也具有一定的價(jià)值。

    總之,MCM5蛋白可能與非小細(xì)胞肺癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),可能促進(jìn)癌組織的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移,其陽(yáng)性表達(dá)可能反映了非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖活性,并能估計(jì)非小細(xì)胞肺癌發(fā)生浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的潛能。

    [1] Greenspan DL,Connolly DC,Wu R,et al.Loss of FHIT expression in cervical carcinoma cell lines and primary tumors〔J〕.Cancer Res,1997,57:4692.

    [2] Bailis JM,F(xiàn)orsburg SL.MCM protein:DNA damage,mutagenesis and repair〔J〕.Curropin in Genet Dev,2005,14:17.

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