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    殼聚糖對大腸桿菌攻毒仔豬生長性能和免疫力的影響

    2011-04-17 00:43:32肖定福唐志如印遇龍馮澤猛冉茂良
    動物營養(yǎng)學(xué)報 2011年10期
    關(guān)鍵詞:金霉素飼糧殼聚糖

    肖定福 唐志如 印遇龍 張 彬 馮澤猛 冉茂良

    (1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,長沙 410128;2.中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所,長沙 410125;3.西南大學(xué)動物科技學(xué)院,重慶 400715)

    殼聚糖對大腸桿菌攻毒仔豬生長性能和免疫力的影響

    肖定福1,2唐志如2,3*印遇龍2張 彬1馮澤猛2冉茂良1

    (1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,長沙 410128;2.中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所,長沙 410125;3.西南大學(xué)動物科技學(xué)院,重慶 400715)

    本試驗旨在探討飼糧中添加殼聚糖對早期斷奶仔豬生長、腹瀉和免疫力的影響。試驗選擇50頭21日齡、平均體重(6.62±0.59)kg的斷奶仔豬,隨機(jī)分為5組,每組10個重復(fù),每個重復(fù)1頭豬。預(yù)試期采用大腸桿菌攻毒(1×109個細(xì)胞/頭),對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧,試驗組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加50 mg/kg金霉素和200、300、400 mg/kg殼聚糖。試驗期21 d。結(jié)果表明:1)與對照組相比,各試驗組平均日采食量提高(P>0.05),料重比和腹瀉率降低,平均日增重分別提高了 15.8%、9.2%、16.8%和21.1%(P>0.05)。2)與對照組相比,各殼聚糖組血清免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白M(IgM)水平以及回腸黏膜白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)mRNA相對表達(dá)量均升高,金霉素組均下降,其中300和400 mg/kg殼聚糖組的血清IgG和IgM水平與金霉素組差異顯著(P<0.05),400 mg/kg殼聚糖組血清IgG水平還與對照組差異顯著(P<0.05),殼聚糖組IL-1β和TNF-αmRNA相對表達(dá)量與金霉素組差異顯著(P<0.05),300和400 mg/kg殼聚糖組IL-6 mRNA表達(dá)量與金霉素組差異顯著(P<0.05)。結(jié)果提示,飼糧中添加殼聚糖能促進(jìn)仔豬生長,降低腹瀉率,提高非特異性免疫力,且作用效果隨飼糧中殼聚糖濃度的增加有增強(qiáng)的趨勢。

    殼聚糖;仔豬;生長性能;免疫力;細(xì)胞因子

    畜產(chǎn)品安全性己受到全球范圍日益廣泛的關(guān)注,禁止使用抗生素添加劑成為一種必然的趨勢,研究和開發(fā)無污染、無公害、無殘留的新型綠色添加劑來替代飼用抗生素已成為當(dāng)今動物營養(yǎng)領(lǐng)域研究的熱點之一。殼聚糖帶正電荷,具有良好的生物相容性、無毒、無免疫抗原性、無刺激性及可降解性等特點[1]。殼聚糖的溶解性與其分子量和脫乙酰度有關(guān),適當(dāng)?shù)头肿恿亢透呙撘阴6鹊臍ぞ厶窃跈C(jī)體內(nèi)可被胃酸、溶菌酶、卵磷脂分解酶等降解,降解過程中產(chǎn)生的低分子寡聚糖大部分能被機(jī)體吸收[2]。因殼聚糖具有抗菌[3-4]、增強(qiáng)免疫[5]、抗氧化[6]及促生長[7-8]等作用,在生物學(xué)領(lǐng)域被廣闊的研究應(yīng)用。殼聚糖以豐富的資源及優(yōu)良的性質(zhì)為其在飼料中的運(yùn)用創(chuàng)造了良好的條件。在我國,殼聚糖作為豬飼料添加劑的研究還處于探索階段。本研究就飼糧中添加不同水平殼聚糖對21日齡斷奶仔豬平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、料重比(F/G)、腹瀉率、血清免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白M(IgM)水平以及回腸黏膜白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)mRNA表達(dá)量的影響進(jìn)行研究,以探討飼糧中添加殼聚糖對早期斷奶仔豬生長性能和免疫力的調(diào)控效果。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料

    殼聚糖,由中科院大連化學(xué)物理研究所提供,經(jīng)本實驗室純化,用酸堿滴定法[9]測得其脫乙酰度(D.D)為91.25%,分子量22 ku,外觀為淡黃色粉末。

    試驗用攻毒大腸桿菌(E.coli)菌株為3種導(dǎo)致仔豬下痢的大腸桿菌典型病原菌株,其血清型分別為E.coli09、0141、064,從中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所選購。每種菌株在LB培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)12 h,以適應(yīng)環(huán)境達(dá)到生長平臺期,按1∶1∶1混合后,于預(yù)試期第4天按每頭豬總大腸桿菌1×109個細(xì)胞給服,分早晚2次給服。

    1.2 試驗動物及試驗設(shè)計

    選購胎次相近,平均體重(6.62±0.59)kg的21日齡健康“杜×長×大”三元雜交去勢斷奶仔豬50頭,隨機(jī)分為5組,每組10個重復(fù),每個重復(fù)1頭豬,單欄飼養(yǎng)。

    試驗采用單因素完全隨機(jī)分組試驗設(shè)計,分為5個組,對照組(A組)飼喂基礎(chǔ)飼糧,試驗組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加50 mg/kg金霉素(B組)和200、300、400 mg/kg殼聚糖(C 組、D 組、E 組)。預(yù)試期7 d,正試期21 d。

    基礎(chǔ)飼糧參照NRC(1998)斷奶仔豬營養(yǎng)需要配制,基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

    1.3 飼養(yǎng)管理

    試驗在全封閉高床豬舍進(jìn)行,每日于08:00、12:00和18:00共投料3次,自由飲水,次日清晨稱剩余料重。

    1.4 樣品采集

    飼養(yǎng)試驗結(jié)束后50頭仔豬清晨空腹用前腔靜脈采血10 m L于真空采血管中,編號后分離血清,每個血樣用1.5 m L Eppendorf管分裝成5份,置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆茫糜跍y定血清生化指標(biāo)。

    飼養(yǎng)試驗結(jié)束后,5個組各隨機(jī)取6頭仔豬準(zhǔn)備待宰,將待宰的30頭仔豬剖殺前12 h禁食,采用頸靜脈放血的方法處死,打開腹腔,取出回腸,用冰浴的PBS溶液沖洗外壁和內(nèi)容物。取回腸中段50 cm,沿縱軸剪開腸道,用玻片刮下黏膜,編號后用錫箔紙包裹,迅速浸入液氮中,轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存?zhèn)溆?,用于測定回腸黏膜 IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA相對表達(dá)量。

    表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet(DM basis) %

    1.5 指標(biāo)測定

    1.5.1 生長指標(biāo)

    正試期第1天08:00空腹稱重并記錄(始重),正試期第22天08:00空腹稱重并記錄(末重)。記錄正試期所耗飼糧重,計算ADG、ADFI及F/G,正試期每次喂料時觀察糞便,稀軟糞判為腹瀉。

    腹瀉率(%)=100×腹瀉仔豬頭次/仔豬總頭次。

    1.5.2 血清生化指標(biāo)

    采用免疫投射比濁法檢測血清中IgM和IgG水平,試劑盒購自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司。

    1.5.3 回腸黏膜 IL-1β、IL-6 和 TNF-α mRNA相對表達(dá)量

    熒光定量PCR(Real-time PCR)法檢測回腸黏膜IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA相對表達(dá)量。

    將-80℃保存的仔豬空腸和回腸黏膜樣品置于盛有液氮的研缽中研成粉末,分裝到1.5 m L的Eppendorf管中,每管50 mg左右,加1 m L Trizol(Invitrogen公司),凍存于-80℃冰箱備用。根據(jù)豬3-磷酸甘油醛脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogease,GAPDH)、IL-1β、IL-6 和 TNF-αmRNA的基因序列,用 Primer Prem ier 5.0引物設(shè)計軟件設(shè)計引物。并用NCBI中Blast初步檢測引物的特異性。引物由寶生物(大連)工程有限公司合成。各引物序列見表2。

    表2 仔豬IL-1β、IL-6、TNF-α和GAPDH m RNA引物序列Table 2 Primer Sequences of IL-1β,IL-6,TNF-α and GAPDH genes

    RNA提取:按照 Trizol說明提取組織總RNA,并用核酸測定儀測量OD值,OD260/280在1.8~2.2的樣品用于下一步試驗,并將RNA稀釋到1μg/μL,分裝 -80℃保存?zhèn)溆?。cDNA合成按Promega反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明操作,反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    每個樣品做2個重復(fù),Real-time PCR反應(yīng)體系(10μL):cDNA 1 μL,SYBR(2×)5 μL,ROX 0.2 μL,Primer S(10 μmol)0.2 μL,Primer A(10 μmol)0.2 μL,DEPC-H2O 3.4 μL。反應(yīng)程序:95℃,30 s;95℃,5 s;60℃,30 s;40個循環(huán)。

    1.6 數(shù)據(jù)處理

    采用SAS 9.1統(tǒng)計軟件GLM程序進(jìn)行方差分析,差異顯著性分析用Duncan氏法進(jìn)行多重比較,數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示;基因表達(dá)量分析以內(nèi)參為對照,采用2-△△Ct法進(jìn)行比較。

    2 結(jié)果

    2.1 殼聚糖對仔豬生長性能及腹瀉率的影響

    由表3可見,各組ADG和ADFI平均值高低順序都為E組>D組>B組>C組>A組,各組間差異不顯著(P>0.05),其中ADG平均值E組、D組、B組和C組分別比A組提高21.1%、16.8%、15.8%和9.2%;各組F/G平均值高低順序為 A組>C組>D組>B組>E組,其中A組與B組、D組、E組差異顯著(P<0.05),其余各組間無顯著性差異(P>0.05)。這說明飼糧中添加殼聚糖能促進(jìn)仔豬生長,提高采食量,降低F/G,作用效果與殼聚糖添加劑量的增大有增強(qiáng)的趨勢,添加400 mg/kg殼聚糖組促生長效果優(yōu)于金霉素組。

    各組仔豬試驗開始前腹瀉率為0,大腸桿菌攻毒后腹瀉率為100%。試驗期間各組仔豬腹瀉情況如圖1所示,A組仔豬腹瀉率下降緩慢,到飼養(yǎng)試驗結(jié)束時仍有4頭仔豬處于腹瀉狀態(tài),B組仔豬腹瀉率前期下降速率高于3個殼聚糖組,但8 d后比E組下降慢,10 d后比D組下降慢,14 d后一直有2頭仔豬處于腹瀉狀態(tài),而C組17 d后僅1頭豬腹瀉,D組和 E組分別于16、14 d后無腹瀉仔豬。

    表3 仔豬生長性能Table 3 The growth performance of weanling pigs

    圖1 仔豬腹瀉率Fig.1 The diarrhea ratio of weanling pigs

    2.2 仔豬血清IgM和IgG水平測定結(jié)果

    由表4可見,金霉素組IgM和IgG水平與對照組相比有所下降,殼聚糖組IgM和IgG水平與對照組相比均有不同程度的提高,D組和E組IgM 水平與B組差異顯著(P<0.05),E組IgG水平與A組和B組均差異顯著(P<0.05),D組IgG水平與B組差異顯著(P<0.05)。

    2.3 仔豬回腸黏膜IL-1β、IL-6和TNF-αm RNA相對表達(dá)量

    如圖2所示,仔豬回腸黏膜 IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA相對表達(dá)量C組、D組、E組與對照組相比均有不同程度的升高,B組比對照組有所下降。其中IL-1βmRNA相對表達(dá)量B組與其他4組差異顯著(P<0.05);IL-6 mRNA相對表達(dá)量D組、E組與 B組差異顯著(P<0.05);TNF-α mRNA相對表達(dá)量C組、D組、E組與B組差異顯著(P<0.05)。結(jié)果說明,與對照組相比,仔豬飼糧中添加殼聚糖引起回腸黏膜中 IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表達(dá)量增加,但未引起大量增加。

    表4 仔豬血清IgM和IgG水平Table 4 The serum IgMand IgG levels of weanling pigs

    3 討論

    3.1 殼聚糖對仔豬機(jī)體免疫力的影響

    在體液免疫中,IgG、IgM和免疫球蛋白 A(IgA)濃度的大小代表體液免疫功能的水平,濃度大時代表體液免疫功能強(qiáng)。IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白抗體,約占血清免疫球蛋白總量的85%,在動物體內(nèi)不僅含量高,而且持續(xù)時間長,是介導(dǎo)體液免疫的主要抗體,也是動物機(jī)體抗感染免疫的主力。本研究表明,飼糧中添加200、300和400 mg/kg殼聚糖均可提高21日齡斷奶仔豬血清中IgG和IgM水平,而金霉素組IgG和IgM水平降低,添加300和400 mg/kg殼聚糖組與金霉素組還存在顯著性差異,說明隨仔豬飼糧中殼聚糖添加濃度增大血清中IgG和IgM水平有上升趨勢。

    圖2 仔豬回腸黏膜IL-1β、IL-6、TNF-a mRNA相對表達(dá)量Fig.2 The relative expression levels of IL-1β,IL-6 and TNF-αmRNA in the ileum mucosa of weanling pigs

    消化道黏膜免疫系統(tǒng)在抵御病原菌的入侵,維護(hù)機(jī)體的健康方面起著非常重要的作用。在細(xì)胞免疫中,白介素1(IL-1)主要由巨噬細(xì)胞和上皮細(xì)胞產(chǎn)生,具有活化血管內(nèi)皮、組織損傷、發(fā)熱、淋巴細(xì)胞活化和誘導(dǎo)急性期蛋白質(zhì)合成等活性。IL-6和TNF-α是被激活的巨噬細(xì)胞分泌的2種重要的細(xì)胞因子,IL-6可以促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖并參與T淋巴細(xì)胞、細(xì)胞毒T細(xì)胞(CTL)、自然殺傷(NK)細(xì)胞和淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(LAK)的活化。IL-1、IL-6和TNF-α在提高機(jī)體免疫機(jī)能的同時,可促進(jìn)炎癥反應(yīng),是具有抗炎和促炎雙重作用的細(xì)胞因子,但其過量釋放導(dǎo)致機(jī)體過度的炎癥反應(yīng),從而引起多器官損害,因此也是應(yīng)激性損傷的直接介導(dǎo)物,血清中IL-6和IL-1β水平是應(yīng)激時炎癥反應(yīng)最具代表性的指示物[10]。殼聚糖分子結(jié)構(gòu)中胺基可被機(jī)體免疫系統(tǒng)識別,激活巨噬細(xì)胞,趨化白細(xì)胞,刺激其產(chǎn)生淋巴因子和炎性介質(zhì)[2,11]。Tang 等[7]報道,飼糧中添加250 mg/kg殼寡糖可通過啟動腸相關(guān)淋巴免疫系統(tǒng)促進(jìn)細(xì)胞因子IL-1基因表達(dá),提高血液中IL-1、白介素2(IL-2)、IL-6及IgA、IgM、IgG濃度。本研究表明,殼聚糖可提高21日齡斷奶仔豬回腸黏膜中IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表達(dá)量,還得出其與殼聚糖添加濃度呈一定的遞增關(guān)系,但3個殼聚糖組只與金霉素組差異顯著,與對照組無顯著性差異,更未見引起極顯著差異,提示添加殼聚糖未引起細(xì)胞因子大量釋放,在抗炎癥和提高免疫力的同時不會造成組織損傷。因此,可以認(rèn)為殼聚糖能增強(qiáng)仔豬非特異性免疫力。

    3.2 殼聚糖對仔豬生長性能的影響

    肉仔雞飼糧中分別添加 0.02%、0.05%、0.10%、0.30% 、0.50% 的殼聚糖,飼喂小劑量殼聚糖(0.02% ~0.30%)飼糧時,均呈現(xiàn)不同程度的促生長作用,尤以添加0.05%時促生長作用最明顯,添加更高水平時,免疫功能有所增強(qiáng),但生長性能卻有下降趨勢,添加3%的殼聚糖對肉仔雞的生產(chǎn)性能有負(fù)效應(yīng)[12],飼糧中添加不同水平(50、100、150 mg/kg)殼聚糖均能提高肉仔雞ADG和免疫器官重量,以添加100 mg/kg殼聚糖效果最好[13]。在斷奶仔豬飼糧中分別添加0.01%、0.02%、0.04%、0.06% 的殼聚糖,進(jìn)行21 d飼養(yǎng)試驗,得出殼聚糖能提高仔豬ADG和ADFI,降低仔豬 F/G[14]。Tang 等[7]認(rèn)為殼聚糖促生長機(jī)理為促進(jìn)垂體分泌生長激素(GH),提高肝臟生長激素釋放激素(GRH)特異結(jié)合活性,從而促進(jìn)胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因表達(dá),提高血液中IGF-Ⅰ濃度,并通過介導(dǎo)而起促生長作用。本研究表明,飼糧中添加 200、300、400 mg/kg殼聚糖能促進(jìn)仔豬生長,提高采食量,降低料重比,且隨殼聚糖添加劑量的增加對生長性能的作用效果增強(qiáng),其中添加400 mg/kg殼聚糖組促生長效果優(yōu)于金霉素組。

    仔豬早期斷奶后,一方面由于母源抗體的逐漸減少,以及斷奶應(yīng)激降低了仔豬自身循環(huán)抗體水平并抑制了細(xì)胞免疫力和免疫水平,使仔豬抗病能力減弱而易感染病原微生物;另一方面由于斷奶后消化酶活力下降,胃酸分泌不足及胃腸道上皮組織萎縮,使斷奶仔豬消化道發(fā)生紊亂,容易發(fā)生腹瀉。殼聚糖對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌(St.aureus)具有很好的抑制作用,目前關(guān)于殼聚糖抑菌機(jī)理主要有以下2種觀點:一種是根據(jù)殼聚糖的聚陽離子性質(zhì)提出的以細(xì)菌帶負(fù)電荷的細(xì)胞膜為靶位的機(jī)制,殼聚糖有正電荷的質(zhì)子化銨,通過吸附在細(xì)胞表面,形成一層高分子膜,阻止?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)向細(xì)胞內(nèi)的運(yùn)輸,同時使其發(fā)生凹陷、變形和泄漏,從而起到抑菌殺菌作用;另外一種是以細(xì)菌分子中的DNA為靶位的抗菌機(jī)制,分子量小的殼聚糖通過滲透進(jìn)入細(xì)胞體內(nèi),吸附細(xì)胞體內(nèi)帶有陰離子的細(xì)胞質(zhì),并發(fā)生絮凝作用,擾亂細(xì)菌DNA分子的轉(zhuǎn)錄,使之由內(nèi)部瓦解衰亡,從而殺滅細(xì)菌[15]。本試驗所用仔豬是經(jīng)大腸桿菌攻毒引起腹瀉的,200、300和400 mg/kg殼聚糖均能降低仔豬腹瀉率,且隨殼聚糖濃度的遞增降低腹瀉率效果增強(qiáng),證實了殼聚糖的抑菌作用,其作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

    4 結(jié)論

    ①殼聚糖能促進(jìn)仔豬生長,提高采食量,降低F/G和腹瀉率,且隨濃度的增大有增強(qiáng)的趨勢,添加300和400 mg/kg殼聚糖作用效果無明顯差異,添加400 mg/kg殼聚糖促生長效果優(yōu)于50 mg/kg金霉素。

    ②殼聚糖能提高仔豬血清中IgG和IgM水平,對回腸黏膜中 IL-1β、IL-6和 TNF-αmRNA相對表達(dá)量有一定的提高,且隨殼聚糖添加濃度的增大有升高的趨勢,并可提高仔豬非特異性免疫力。

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    *Corresponding author,professor,E-mail:tangzhiru2326@yahoo.com.cn

    (編輯 武海龍)

    Effect of Chitosan on G row th Perform ance and Imm unity in Weanling Pigs Challenged withEscherichia coli

    XIAO Dingfu1,2TANG Zhiru2,3*YIN Yulong2ZHANG Bin1FENG Zemeng2RAN Maoliang1
    (1.College of Animal Science and Technology,Hunan Agricultural University,Changsha410128,China;2.Subtropical Agriculture Ecological Research Institute,Chinese Academy of Sciences,Changsha410125,
    China;3.College of Animal Science and Technology,Southwest University,Chongqing400715,China)

    The experimentwas conducted to study effects of chitosan on growth performance and immunity in weanling piglets.Fifty pigletswith an average body weight of(6.62 ±0.59)kg were challenged with enterotoxigenicEscherichia coli(1×109cell per head)during adaptation period and random ly assigned to 5 groups with 10 replicates per group and 1 piglet in each replicate.The piglets in control group were fed basal diet,and the others in experimental groups were fed the basal diet supplemented with 50 mg/kg chlortetracycline,200,300 or 400 mg/kg chitosan,respectively.The experiment lasted for 21 days.The results showed as follows:1)compared with the control group,in every experimental group,average daily feed intake was improved(P>0.05),the ratio of feed to gain and diarrhea ratio were decreased,and the average daily gain was increased by 15.8%,9.2%,16.8%and 21.1%(P> 0.05),respectively.2)Compared with the control group,the serum immunoglobulin G(IgG)and immunoglobulin M(IgM)levels,relative expression levels of interleukin-1β (IL-1β),interleukin-6(IL-6)and tumor necrosis factor-α (TNF-α)mRNA in ileum mucosa were improved in the chitosan groups,but decreased in the chlortetracycline group.The IgG and IgM levels in the 300 and 400 mg/kg chitosan groups were significant higher than those in the chlortetracycline group(P<0.05),and the IgG level in the 400 mg/kg chitosan group was significant higher than that in the control group(P<0.05).The relative expression level of IL-1β and TNF-α mRNA in the three chitosan groupswas significant higher than those in the chlortetracycline group(P<0.05),and the relative expression levels of IL-6 mRNA in the 300 and 400 mg/kg chitosan groups were significant higher than that in the chlortetracycline group(P<0.05).These results indicate that supplemented with 200,300 and 400 mg/kg chitosan in diets can improve growth performance,decrease diarrhea ratio and enhance non-specific immunity of weanling piglets,furthermore,those effects have enhancing trend with increasing the concentration of chitosan in diets.[Chinese Journal of Animal Nutrition,2011,23(10):1783-1789]

    chitosan;weanling pigs;growth performance;immunity;cytokine

    S828

    A

    1006-267X(2011)10-1783-07

    10.3969/j.issn.1006-267x.2011.10.019

    2011-04-25

    湖南省自然科學(xué)基金青年項目(10JJ4013);西南大學(xué)博士基金(SWU111002);國家863項目(2008AA10Z316)

    肖定福(1977—),女,湖南婁底人,博士研究生,從事動物營養(yǎng)生理研究。E-mail:xiaodingfu2001@yahoo.com.cn

    *通訊作者:唐志如,教授,碩士生導(dǎo)師,E-mail:tangzhiru2326@yahoo.com.cn

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