奶牛流產的微生物學因素及其診治

張青麗，梁方印，陳學敏，尹利香

（濮陽縣畜牧局，河南濮陽 457000）

引起孕牛流產的病因有很多，如孕期營養(yǎng)不良、泌乳過度、飼喂發(fā)霉變質飼料、內分泌紊亂、實質性病變、懷孕后誤配、環(huán)境應激、年齡過大、遺傳性疾病及染色體畸變等。但臨床上最常見的還是因微生物感染而導致的流產，這類流產癥狀復雜，不易確診。在此將可能引發(fā)奶牛流產的微生物學原因及其診療研究現狀列舉如下，并對其防治進行初步探討，以期為防治奶牛流產帶來幫助。

一、病毒性流產

1.牛傳染性鼻氣管炎 (IBR)，是由牛皰疹病毒I型（BHV-1）引起的一種接觸性傳染病，可引起陰道炎、乳房炎、流產等。病牛和帶毒牛為主要傳染源，常通過空氣傳播，交配也可傳染，病毒也可通過胎盤侵入胎兒引起流產。確診此病要做病毒分離培養(yǎng)，再用中和試驗或熒光抗體法進行鑒定。間接血凝試驗、酶聯免疫吸附試驗 (ELISA)、聚合酶鏈式反應(PCR)等均可作為本病的診斷。唐泰山等(2009)建立了擴增牛傳染性鼻氣管炎病毒gB和gE基因的熒光PCR。

防治本病必須實行嚴格檢疫，防止引入傳染源和帶入病毒。采用敏感的檢測方法檢出陽性牛并予以撲殺可能是目前根除本病的唯一有效途徑。

2.牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)可引發(fā)牛的繁殖障礙以及使犢牛產生免疫抑制。妊娠頭120 d的母牛發(fā)生感染，病毒可穿過胎盤屏障感染胎兒并可能發(fā)生流產、干尸化或先天性畸形。還可引起卵巢炎和精子畸形，成為不育癥的可能原因。檢測BVDV的方法主要有病毒的細胞培養(yǎng)法、免疫學檢測、電子顯微鏡檢測病毒粒子(EM)、核酸探針檢測以及RT-PCR檢測。Carrie等人(2002)建立了采用RT-PCR反應檢測牛病毒性腹瀉病毒病的方法。

目前本病無特效療法，應用收斂劑及補液可挽救一部分患牛，繼發(fā)感染可給予抗生素和磺胺類藥物。滅活疫苗和弱毒疫苗可在某些發(fā)病地區(qū)推廣使用。最好的控制方法就是免疫所有可生產的母畜并根除所有永久性感染動物。

3.牛副流感3型病毒也可引發(fā)子宮感染，孕牛流產。常見于晚秋及冬季。Melanie等人(2004)建立了一種檢測在呼吸道樣本中包括副流感3型病毒在內的7種常見呼吸道病毒的多重逆轉錄PCR的方法。Horwood等(2008)識別了兩個不同的牛副流感病毒3型基因型。

4.牛流行熱是由病毒引起的熱性傳染病，可導致妊娠母牛流產、死胎。本病的流行具明顯的周期性和季節(jié)性。傳染力強，傳播迅速，發(fā)病率高，死亡率低。吸血昆蟲是重要的傳染源。用特異性血清做中和試驗或免疫熒光試驗鑒定病毒。尚無特效藥。早發(fā)現、早隔離、早治療，合理用藥，護理得當是治療本病的重要原則。

5.赤羽病(AKA)又稱阿卡斑病，是由赤羽病病毒引起的傳染病。其特征為流產、早產、死產以及產出先天性關節(jié)彎曲-積水性無腦綜合征胎兒。赤羽病毒S RNA可裂解感染反芻動物的腦。Yehuda等(2004)建立了檢測赤羽病毒的多重實時RTPCR反應。

6.牛瘟是由牛瘟病毒引起的急性高度接觸性傳染病，可導致孕牛流產。我國已經絕跡，但仍應高度警惕防止本病由國外傳入。

7.牛細小病毒?。˙PV）是由牛細小病毒引起的一種接觸性傳染病。特征是引起妊娠母牛流產、死胎，小牛感染則表現腦炎腹瀉?？贵w檢查常用血凝抑制試驗及血清中和試驗。BPV與本屬其它成員不呈現交叉血清反應。PCR檢測方法有很好的特異性和有較強的敏感性。

二、細菌性流產

1.布氏桿菌病的病原體為布氏桿菌，可致受胎率下降，孕畜流產。潛伏期2周至6個月，多為隱性感染。牛流產常發(fā)生在妊娠第6～8個月齡，多數患畜只流產1次，亦有流產后長期不孕病例，流產后多伴發(fā)胎衣不下、子宮炎，有的母畜產死胎、弱胎，胎衣呈黃色膠凍樣浸潤。多為散發(fā)，一年四季都可發(fā)生，但隨著母畜產仔季節(jié)變化較明顯。

病菌主要存在于患畜的體內，隨乳汁、膿汁、流產胎兒、生殖道分泌物等排出體外，污染飼料、飲水及周圍環(huán)境，經消化道、呼吸道、皮膚黏膜等傳染給其他家畜。

給牛預防接種，提高機體免疫水平是我國現階段控制或消滅布魯氏菌病的主要措施，常用疫苗有布病2號（S2）弱毒苗，布病5號（M5）弱毒苗及S19號菌苗。但最好的辦法是淘汰病牛和疫苗接種相結合。Hinic 等建立的即可常規(guī)操作又可Real-Time PCR 的新方法,特異性強,可鑒別6個種的布魯氏菌。不受布病威脅和已經控制的地區(qū)主張不接種疫苗。

2.產單核細胞李斯特菌(LM)是一種重要的人獸共患食源性病原菌，可引起妊娠奶牛的菌血癥、死胎或流產。

主要檢測手段是細菌分離、血清學檢測、ELISA技術、基因探針技術、PCR方法等。Ingianni A等(2001)建立了用PCR和DNA探針相結合快速檢測食品中李斯特菌的方法。青霉素和磺胺-三甲氧芐胺嘧啶是治療李斯特菌病的首選藥物。治療時應注意病畜脫水和代謝酸中毒癥狀。預防措施主要是確保制作和儲存高質量的青貯飼料。

3.結核病的病原是結核分枝桿菌，可引起多組織器官形成結核性肉芽腫。其中生殖器官結核，可見性機能紊亂，發(fā)情頻繁，性欲亢進，幕雄狂與不孕，孕牛流產，公牛副睪丸腫大，陰莖前部發(fā)生結節(jié)糜爛等。主要經呼吸道、消化道感染。

可通過細菌學檢查、牛型結核分支桿菌皮內變態(tài)反應及動物實驗判 定。Shah(2002)、Bakshi(2005)各自建立了檢測牛分枝桿菌和結核分枝桿菌的多重聚合酶鏈反應方法。Pinsky(2008)利用多重實時PCR快速將結核分枝桿菌鑒定到種的水平。發(fā)現疑似病牛應立即隔離，確診后一般不予治療，應嚴格按照農業(yè)部有關規(guī)范處理，撲殺病牛及陽性牛。

4.牛支原體可導致生殖道炎癥、流產與不孕等多種疾病。國內、外牛支原體病的確診方法主要集中在病原體的分離鑒定、血清學檢測、基因診斷三個方面。支原體菌落應具有“煎蛋樣”典型特征，液體培養(yǎng)基由紅色變?yōu)辄S色且透亮，通過配套的生化試驗可以對牛支原體進行鑒定。

血清學檢測被認為是診斷牛支原體感染的手段之一，尤其對慢性感染或應用過抗生素的病例更加適合，包括間接血凝試驗、生長抑制試驗及間接酶聯免疫吸附試驗等方法。用處理過的牛支原體全菌蛋白作包被抗原的間接 ELISA 是當今最主要的血清學檢測方法。Patrizia(2005)利用牛支原體表面脂蛋白P48 體外表達產物建立了診斷方法。

Nicholas(2002)研制了牛支原體滅活疫苗,可以有效降低犢牛肺臟的損傷。目前治療本病可用新胂凡納明靜注，土霉素與鏈霉素聯合治療也有效果，臨床治愈的?？砷L期帶菌而成為傳染源，故仍以淘汰病牛為宜。

5.牛沙門氏病又稱副傷寒，是由沙門氏菌屬細菌引起的疾病的總稱，犢牛多表現為敗血癥和腸炎，也可使懷孕母牛發(fā)生流產。動物在腸炎或敗血癥后引起流產，通常會發(fā)展成為膿毒敗血性子宮內膜炎和腹膜炎，并通常引起死亡。此病一年四季均可發(fā)生。

因病原體有抗藥性，使用抗生素治療應做體外藥敏試驗。新霉素和弗氏絲菌素常常有效，氯霉素和慶大霉素的抗藥性很少見，二甲氧二氨基嘧啶和磺胺二甲醚定的聯合用藥也經常使用。脫水時應補液。預防應注意加強飼養(yǎng)管理，消除發(fā)病誘因，保持飼料和飲水的清潔衛(wèi)生。目前國內已研制出牛的副傷寒疫苗，必要時可選擇使用。

6.彎曲桿菌病原名弧菌病，現認為自然交配引起的彎曲桿菌病是牛發(fā)生不育的重要原因，可引起牛散發(fā)性流產。病菌可定植于陰道前庭，然后進入子宮，引起溫和性子宮內膜炎和輸卵管炎。后果是胚胎早期死亡并被吸收，從而不斷表現假發(fā)情，不少牛發(fā)情周期不規(guī)則和特別延長。有些胎兒死亡較遲，則發(fā)生流產。動物感染后可從糞便中排菌，也可通過牛奶和其他分泌物排出，污染飲水、食物或飼料。

確診需進行病菌亞種的分離鑒定，采取流產牛血清或子宮頸、陰道粘液以試管凝集反應檢查其中抗體有助于本病診斷。Yang C等(2003)建立了應用實時PCR技術定量檢測在家禽，牛奶和水環(huán)境中的空腸彎曲菌的方法。淘汰有病種公牛，選用健康公牛進行交配或人工受精是控制本病的重要措施。治療可選用四環(huán)素族抗生素、鏈霉素或喹諾酮，同時應進行對癥治療。

7.地衣芽孢桿菌病導致的流產常發(fā)生于懷孕晚期，表現為壞死性胎盤炎，胎盤子葉間隙肥厚和胎位不正。目前無血清學檢測方法。抗生素治療效果差。對其他混合感染的病原菌進行檢測和對青貯飼料及飲水進行細菌計數很重要。

8.萊姆病病原為伯氏疏螺旋體，早期懷孕母牛感染后可發(fā)生流產。在蜱叮咬動物時，隨蜱唾液進入皮膚感染。防治本病應避免動物被蜱叮咬并采取有效措施滅蜱。治療藥物有青霉素、四環(huán)素、紅霉素、強力霉素等，大劑量使用并進行對癥治療，可收到良好效果。

9.鉤端螺旋體病的病原體一般是哈特焦鉤端螺旋體，常引起奶牛不孕和流產。寄生在尿道和生殖道，母牛發(fā)生亞臨床癥狀感染12周后，如果與其他菌混合感染，通常會出現慢性流產。長期以來顯微凝集試驗是一種標準的檢測技術，主要檢測IgM抗體。常用的酶聯免疫吸附試驗試劑盒通常檢驗含量較多的IgG。PCR技術也是可選方法。Djadid(2009)建立了一個簡單而快速的巢式聚合酶鏈反應以區(qū)分致病性和非病原性鉤端螺旋體菌。Lin X等(2009)應用環(huán)介導恒溫擴增方法檢測致病性鉤端螺旋體。

其他細菌?。阂鹕l(fā)性流產的病原菌大致可分為2類：從正常牛的前生殖道能分離到的細菌和不能分離到的細菌。正常情況下能分離到的細菌有：睡眼嗜血桿菌、化膿隱秘桿菌、停乳鏈球菌和相異脲原體。這些病原菌會通過子宮頸進入子宮內，引起胎兒的其他疾病。第二類細菌包括假結核耶爾森氏菌、溶血性曼氏桿菌、紅斑丹毒絲菌和金黃色葡萄球菌。母牛發(fā)生菌血癥時，可以發(fā)胎兒感染。通過這種方式，化膿隱秘桿菌也會侵入胎兒體內，通過靜脈途徑感染母?？梢鹆鳟a。

另外還有原蟲性流產、衣原體和立克次氏體以及真菌性流產。

三、防治

牛群暴發(fā)流產沒有規(guī)律性。單個的流產可能是暴發(fā)的前兆，但數周內可能不明顯。對牛場檢查時，需要從病史、牛的臨床檢查、胎牛尸檢、血清學、基因學等方面綜合進行結果分析。防治微生物性流產應注意。

1.改善牛場的環(huán)境與工藝，以降低牛群發(fā)生疾病的機會。

2.引種時應嚴格檢疫，引進后應隔離至少1個月，無傳染病發(fā)生者才能并群飼養(yǎng)。

3.免疫接種與疫病檢疫，應根據《中華人民共和國動物防疫法》及配套法規(guī)的要求，結合當地實際情況有選擇的進行疾病的預防接種工作。

4.使用獸藥時應嚴格執(zhí)行休藥期。

5.重視牛群的健康管理，充分應用現代化的信息技術對牛場進行管理。

（略）