鮑曼菌素對梨輪紋病病菌的毒力及其藥效評價

藺經(jīng)，楊青松，李曉剛，王中華

（江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 園藝研究所，江蘇 南京 210014）

梨輪紋病菌（Botryosphaeria berengerianade. Not. f. sp.Piricola（Nose） Koganecawa et. Sokwwwa）侵染引起梨果實(shí)腐爛，影響果實(shí)的外觀和品質(zhì)[1-3]，防治該病害主要采用代森錳鋅、多菌靈等化學(xué)藥劑，但長期使用極易使病原產(chǎn)生抗藥性并造成環(huán)境污染[2-7]，運(yùn)用生物農(nóng)藥防治該病是當(dāng)前發(fā)展無公害水果的首選途徑[8-9]。

有研究表明，從樟樹中已發(fā)現(xiàn)1株鮑曼不動桿菌（Acinetobacter baumannii）CH0606菌株，提取得到具有抗真菌活性的植物內(nèi)生代謝物鮑曼菌素，其活性成分主要為Iturin A，對大豆炭疽病菌、辣椒疫霉病菌、灰葡萄孢菌和禾谷鐮刀菌等致病菌都有顯著的抑制作用[10-12]。為明確鮑曼菌素對梨輪紋病害生物防治的實(shí)用價值，筆者探討了鮑曼菌素及其分別與鈣、鎂、錳3種金屬離子混用對輪紋病病菌抑制的效果，并進(jìn)行了田間試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 材 料

鮑曼菌素（用1 L CH0606代謝物，經(jīng)離心、大孔樹脂得到500 mg/L活性粗浸膏），由南京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院醫(yī)藥技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供；梨輪紋病病菌由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植保研究所提供；Mg2+、Ca2+和 Mn2+標(biāo)準(zhǔn)溶液由天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心生產(chǎn)。

1.2 方 法

1.2.1 鮑曼菌素對梨輪紋病菌菌絲生長和孢子萌發(fā)抑制作用的測定

采用菌絲生長速率法測定。在預(yù)備試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇將鮑曼菌素活性粗浸膏對輪紋病病菌菌絲生長抑制率為10%～90 %的5個質(zhì)量濃度，即0.263 5、0.105 3、0.026 3、0.010 5、0.005 8 mg/L，加入到已融化并冷卻至50 ℃左右的 PSA培養(yǎng)基中，經(jīng)充分混勻后，分別倒入3個滅菌的培養(yǎng)皿中，制成含藥PSA平板，以不加藥劑但含等量無菌水的PSA平板為對照。用直徑為5 mm的打孔器在預(yù)培養(yǎng)的菌落邊緣的同一圓周上打取菌餅，菌絲面朝下接種到含藥培養(yǎng)基平板中央，置于28 ℃下黑暗培養(yǎng)，待對照的菌落邊緣接近皿壁時，用十字交叉法測量各處理的菌落直徑，并求出3次重復(fù)的平均值，得出各處理的平均菌落增長直徑（平均菌落直徑為5 mm），計算各藥劑處理對病菌菌絲生長抑制率。抑制率（%）＝（對照菌餅直徑（mm）－處理菌餅直徑（mm））／（對照菌餅直徑（mm））×100 %。

以設(shè)定的質(zhì)量濃度對數(shù)為自變量（x），以相應(yīng)處理對病原菌菌絲生長抑制率的等值偏差為變量（y），應(yīng)用統(tǒng)計回歸方法，擬合出質(zhì)量濃度對數(shù)－抑制百分率機(jī)率值的毒力方程，并以y=5（抑制率為50%的等值偏差）代入各毒力方程，求出x，再轉(zhuǎn)換成抑菌中濃度EC50，以EC50值來衡量殺菌劑對病原菌菌絲毒力的大小，求出毒力方程和相關(guān)系數(shù)。

1.2.2 金屬離子與鮑曼菌素混用對梨輪紋病的抑制作用

將1% Mg2+、Ca2+和 Mn2+與0.105 3 mg/L鮑曼菌素活性粗浸膏溶液混配，以無菌水溶液作為對照，接種和調(diào)查計算方法同上。

1.2.3 田間藥效試驗(yàn)

在江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所梨園進(jìn)行。設(shè)5個處理，其中3個處理鮑曼菌素質(zhì)量濃度分別為226、333、500 mg/L，對照農(nóng)藥組為80 %多菌靈可濕性粉劑配制溶液，其有效成分質(zhì)量濃度為 938 mg/L，空白對照組為清水。每2棵樹為1小區(qū)，重復(fù)3次，隨機(jī)區(qū)組排列。每小區(qū)用水量為3.5 kg，施藥器械為新加坡利農(nóng)HD-400型背負(fù)式手動高壓噴霧器。首次用藥在果實(shí)采前40 d進(jìn)行，隔20 d噴1次，共噴施2次。分別于采收期和貯藏25 d后調(diào)查藥效。采收期每處理隨機(jī)調(diào)查100個果實(shí)，記錄總果數(shù)、病果數(shù)。采收當(dāng)日，每個處理剔除蟲害及機(jī)械傷果裝筐，每個處理不少于 80個果，置于自然室溫下貯藏25 d，調(diào)查藥效。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用 DPS軟件鄧肯氏新復(fù)極差對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 鮑曼菌素對梨輪紋病菌菌絲生長的抑制作用

鮑曼菌素對梨輪紋病菌毒力回歸方程為y= 7.374 9+0.608 2x（r=0.98），EC50為0.022 mg/L。鮑曼菌素對梨輪紋病菌抑制EC50值比文獻(xiàn)[5]報道的25%吡唑醚菌酯乳油、80%戊唑醇可濕性粉劑和20%戊唑醇-烯肟菌胺水懸浮劑對輪紋病菌菌絲的EC500.071、0.085和0.219 mg/L，分別降低了69.01 %、74.12 %和89.95 %，說明鮑曼菌素對梨輪紋病菌菌絲生長具有較強(qiáng)的抑制作用。

2.2 金屬離子與鮑曼菌素混用對梨輪紋病菌的抑制效果

Mg2+、Ca2+和Mn2+與鮑曼菌素混用對梨輪紋病菌抑制率分別為89.82 %、92.25 %和87.04 %，比鮑曼菌素單用提高了5.10%、7.59%和2.07%，Ca2+增效的作用最大。經(jīng)方差分析，Ca2+、Mg2+的增效作用顯著高于Mn2+，且Ca2+顯著高于Mg2+。

2.3 鮑曼菌素的田間藥效

由表1可知，果實(shí)采收時，高、中、低劑量鮑曼菌素對梨果實(shí)輪紋病的防效分別為 80.67%、77.92%、74.56%，對照藥劑80%多菌靈可濕性粉劑防效為73.68 %；在果實(shí)貯藏期，高、中、低劑量鮑曼菌素對梨果實(shí)輪紋病的防效分別為 75.72%、 72.81%、69.51%，對照藥劑 80 %多菌靈可濕性粉劑防效為70.61%，采收期與貯藏期對果實(shí)輪紋病防效基本一致。

在田間試驗(yàn)過程中，特別觀察了不同質(zhì)量濃度鮑曼菌素對梨葉片及果實(shí)的影響，結(jié)果無藥害發(fā)生，說明鮑曼菌素對梨樹生長安全。

表1 鮑曼菌素對梨輪紋病的防效Table 1 Effects of Acinetobacter baumannii active of crude against pear perennial canker during harvesting and storage time

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英文編輯：易來賓