針刺上巨虛穴對腸易激綜合征大鼠血清一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性的影響※

王 威 呂恩基 張 燕 趙金茹

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院針灸臨床教研室，遼寧 沈陽 110032)

腸易激綜合征(irritable bowel syndrome，IBS)是臨床上一種常見病，是以慢性或反復(fù)出現(xiàn)的腹痛并伴有腹瀉、排便習(xí)慣和大便性狀異常為主要癥狀而又缺乏胃腸道結(jié)構(gòu)和生化異常的綜合征［1-2］，屬于一種慢性內(nèi)臟痛敏。IBS的局部腸道雖然沒有明顯器質(zhì)性病變，但研究表明IBS患者對閾下腸道刺激感覺過敏，這也是形成慢性內(nèi)臟痛敏的基礎(chǔ)［3］。文獻報道表明，針刺上巨虛穴治療IBS可獲得較好療效［4］。本研究通過動物實驗探討針刺上巨虛穴對IBS大鼠血清一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性的影響及其可能作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 清潔級雄性 SD大鼠30只，體質(zhì)量(110±30)g，3周齡，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，動物合格證號:SCXK(京)-2008-0004。每10只大鼠飼養(yǎng)在1個塑料籠內(nèi)，自由飲食，飼養(yǎng)于12 h光照和12 h黑暗的環(huán)境中，在空調(diào)恒溫室內(nèi)，室溫維持在18～24℃，濕度控制在50% ～70%。

1.2 方法

1.2.1 動物分組 將30只SD大鼠隨機分為空白對照組、模型對照組和電針組，每組10只。

1.2.2 模型制備 參照用Al-Chaer ED內(nèi)臟敏感動物模型［1］為基礎(chǔ)，稍改進。模型對照組和電針組使用自制的刺激球囊［5-6］，蘸少許醫(yī)用石蠟油，自大鼠肛門輕柔插入4～5 cm。每次氣囊打氣，維持腸道壓力 7.98 kPa(60 mm Hg)，保留1 min，然后撤氣。每次刺激之前，檢查球囊的密閉性。給予擴張刺激前，可預(yù)先刺激大鼠肛門部，使其排盡大便，以減少糞團對擴張程度的影響。每日操作1次，共持續(xù)刺激15 d。

1.2.3 治療方法 電針組治療時取大鼠雙側(cè)上巨虛穴，使用華佗牌28號、25 mm毫針，通過G6805-1A型電針治療儀(上海華誼醫(yī)用儀器廠)，采用疏密波，密波100 Hz/3 s，疏波4 Hz/3 s交替，刺激強度1～3 mA，以大鼠后肢輕輕抖動但不產(chǎn)生嘶叫為度，持續(xù)20 min。隔日針刺1次，持續(xù)10 d。空白對照組和模型對照組每日陪同電針組抓取、固定，不做任何治療。

1.3 檢測指標(biāo)及方法

1.3.1 標(biāo)本采集 將大鼠麻醉后，先用剪刀沿恥骨聯(lián)合上緣橫向剪開，再沿腹白線向上剪開至劍突處使其翻開，進而暴露整個腹腔，把大小腸推出腹腔，放于大鼠左側(cè)，充分暴露大鼠的腹腔右側(cè)，用干棉球擦試，于腹主動脈抽取5 mL血液放入離心管中靜置2～3 h，待血凝后以3 500 r/min離心10 min，分離血清500 μL，放入EP管中，置于-80℃冰箱貯藏備用?？瞻讓φ战M、模型對照組在模型制備結(jié)束后進行血液采集，電針組從造模完成后隔日針刺1次，10 d后進行血液采集。

1.3.2 檢測指標(biāo)及試劑盒 采用分光光度計比色法檢測NO含量和NOS活性。NO、NOS試劑盒由武漢博士德生物工程有限公司提供，嚴格按照試劑盒說明的操作程序測定大鼠血清NO含量和NOS活性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學(xué)分析，數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，組間計量資料采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

各組大鼠血清NO含量、NOS活性比較見表1。

表1 各組大鼠血清NO含量、NOS活性比較pmol/L，

表1 各組大鼠血清NO含量、NOS活性比較pmol/L，

與空白對照組比較，*P ＜0.01;與模型對照組比較，△P ＜0.05

組 別 n NO NOS空白對照組10 57.81 ±10.31 25.82 ±9.71模型對照組 10 91.19 ±9.11* 51.85 ±10.01*電針組 10 64.12±12.01△ 29.22 ±8.38△

由表1可見，模型對照組血清NO、NOS水平均較空白對照組顯著升高(P ＜0.01)，電針組血清 NO、NOS水平均較模型對照組有不同程度降低(P＜0.05)。

3 討論

上巨虛穴屬足陽明胃經(jīng)，是手陽明大腸經(jīng)的下合穴。根據(jù)“合治內(nèi)腑”的理論，大量的文獻和臨床研究表明，上巨虛穴具有清熱利濕、調(diào)理腸腑的功能。IBS是腸道功能紊亂的功能性疾病，病因及發(fā)病機制尚未清楚，但與胃腸激素關(guān)系密切。Al-Chaer ED等［1］開發(fā)的模擬慢性內(nèi)臟痛動物模型中，痛覺過敏伴隨著動力紊亂，類似于IBS患者的動力失調(diào)。

NOS廣泛分布于消化道，存在3種同工酶，其主要功能是催化L-精氨酸生成NO。NO是非腎上腺素能非膽堿能(NANC)抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，可介導(dǎo)平滑肌松弛，在胃腸道蠕動反射中產(chǎn)生下行性抑制作用，對胃腸黏膜具有保護和損傷雙重效應(yīng)，也對胃腸運動和內(nèi)臟感覺起重要調(diào)節(jié)作用［5-7］。實驗證實［8］，NO 在生理劑量水平對消化系統(tǒng)起重要的保護作用，合成的NO過少可松弛腸道平滑肌，NO產(chǎn)生過多則可使胃腸道平滑肌對其敏感性增強。因此，NOS活性提高，可導(dǎo)致NO合成增加，引起腸運動加快、內(nèi)臟感覺敏感性增加，從而出現(xiàn)IBS的一系列癥狀。

本研究發(fā)現(xiàn)，與空白對照組比較，模型對照組NO和NOS含量均明顯升高(P ＜0.01)，表明IBS大鼠模型血清NOS和NO含量可能與IBS內(nèi)臟致敏有關(guān)。與模型對照組比較，電針組NO和NOS含量均有下降趨勢(P＜0.05)，同時也說明了電針上巨虛穴對慢性內(nèi)臟痛敏IBS大鼠模型的改善作用機制可能與調(diào)節(jié)血NO和NOS水平有關(guān)。因此，降低IBS模型血清NO和NOS的水平可能是針刺調(diào)節(jié)IBS胃腸運動，進而改善慢性內(nèi)臟痛敏癥狀的機制之一。

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