木檳硝黃散的急性毒性及藥效學試驗

董 虹,吳 偉,馬 崢,呂 娟,張 濤,穆 祥,許劍琴

[1.北京農(nóng)學院 獸醫(yī)學(中醫(yī)藥）北京市重點實驗室,北京 昌平 102206;2.北京市順義區(qū)李橋獸醫(yī)衛(wèi)生防檢站,北京順義 101300;3.北京農(nóng)學院動物科學技術系,北京 昌平 102206;4.中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院,北京 海淀 100193]

木檳硝黃散是根據(jù)《傷寒論》大承氣湯的組方原則及家畜用藥特點,用木香和檳榔代替大承氣湯中的枳實和厚樸組成的。臨床上用于治療馬屬動物結(jié)癥,取得了非常理想的效果。方中木香、大黃和芒硝具有疏通腸道的作用,芒硝還可使腸道中保持大量水分,軟化糞便;檳榔促進腸管蠕動之力,推蕩積糞。四藥合力,結(jié)糞除,腹痛止,乃治結(jié)之良方。為了給臨床用藥提供參考,本試驗進行了該方的急性毒性和藥效學試驗。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康昆明系小鼠,雌雄各半,體重18～22 g,由北京大學醫(yī)學部實驗動物科學部提供,許可證編號SCSK(京）2006-008。

1.2 中藥及試劑制備 大黃、檳榔、芒硝、木香均購自北京同仁堂大藥店。按1∶1∶3∶1的藥量稱取藥物,先將檳榔和木香按10倍量加入清水浸泡1 h后,武火加熱煎煮,沸后文火20 m in,再加入大黃續(xù)煎10min,用4層紗布過濾,最后將芒硝直接溶解于煎好的過濾藥汁中。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至藥液中生藥含量為1.73 g/m L,置于4℃冰箱保存,備用,試驗時以蒸餾水稀釋至所需濃度。

復方地芬諾酯片,每片含鹽酸地芬諾酯 2.5 mg、硫酸阿托品0.025mg,由常州康普藥業(yè)有限公司生產(chǎn),臨用前配制成所需濃度的復方地芬諾酯混懸液;阿拉伯樹膠粉和活性炭(粉末）由北京奧科生物技術有限責任公司提供。

墨汁的配制:阿拉伯樹膠加水配為0.25%透明溶液,稱取活性炭粉50 g加入上述溶液中煮沸3次,待溶液涼后加水定容至500 m L,于4℃冰箱保存,臨用前搖勻,并加入等量蒸餾水,制得炭粉液供試驗用。

1.3 方法

1.3.1 動物飼養(yǎng)條件 室溫:22℃±3℃,相對濕度:55%～60%。

1.3.2 急性毒性試驗 預試驗時將適應飼養(yǎng)7日后的小鼠42只,隨機分成7組,每組6只,雌雄各半,各組按等比濃度灌胃給藥,確定實驗小鼠 0%和100%死亡的劑量范圍。根據(jù)預試驗所用劑量,按公式求出正式試驗的劑間比 r。r=log-1

正式試驗時將適應飼養(yǎng)7日后的小鼠60只,隨機分成6組,每組 10只,組間計量比值為r,按1∶K(K=1/r）等比稀釋法,配制等比濃度中藥,按0.2m L/10 g灌胃給藥,觀察記錄各組小鼠死亡數(shù)。記錄給藥后小鼠出現(xiàn)的臨床癥狀,及時剖檢死亡小鼠并記錄剖檢結(jié)果。根據(jù)改良寇氏法公式計算半數(shù)致死量(LD50）:LD50=lg-1[Xm-i(∑p-0.5）];lgLD50的標準誤:SX50=i;LD50的95%可信區(qū)間=lg-1(X50±1.96×Sx50）。式中:Xm為最大劑量組劑量的對數(shù)值;P為各組動物的死亡率;i為相鄰兩劑量組比值的對數(shù);∑P為各組死亡率之和;n為每組動物數(shù)。

1.3.3 小腸推進試驗 取實驗小鼠50只,隨機分為5組,每組10只,根據(jù)《中華人民共和國獸藥典(2005年版）》[1]推薦的臨床用藥劑量,按照體重折算系數(shù)換算成小鼠的臨床用藥量并將其作為中藥中劑量(11.28 g/kg）,2倍該劑量為中藥高劑量(22.56 g/kg）,1/2該劑量設為中藥低劑量(5.64 g/kg）,0.2 m L/10 g,對照組和模型組給予相應的蒸餾水,每天1次,連續(xù)灌胃7 d后,進行指標測定。測定前各組動物禁食16 h(其間自由飲水）。測定時,對照組給予蒸餾水,模型組和中藥組給予復方地芬諾酯10 m g/kg(0.2m L/10 g體重）復制便秘模型。30m in后,各中藥組最后一次給予木檳硝黃散,模型組和對照組給予相應的蒸餾水。30 m in后各組按0.1m L/10 g體重給予配制好的墨汁(活性炭懸液）,25 min后頸椎脫臼處死小鼠,打開腹腔分離腸系膜,剪取上端自幽門、下端至回盲部的腸管,置于托盤上,輕輕將小腸拉成直線,測量腸管長度為“小腸總長度”,從幽門至墨汁前沿為“墨汁推進長度”,計算墨汁推進率:墨汁推進率=墨汁推進長度(cm）/小腸總長度(cm）×100%。

1.3.4 小鼠排便試驗 取實驗小鼠50只,隨機分為5組,每組10只,根據(jù)《中華人民共和國獸藥典(2005年版）》[1]推薦的臨床用藥劑量,按照體重折算系數(shù)換算成小鼠的臨床用藥量并將其作為中藥中劑量(11.28 g/kg）,2倍該劑量為中藥高劑量(22.56 g/kg）,1/2該劑量設為中藥低劑量(5.64 g/kg）,0.2 m L/10 g,對照組和模型組給予相應的蒸餾水,每天1次,連續(xù)灌胃7 d后,進行指標測定。末次給藥的當天晚上各組小鼠禁食(其間自由飲水）16 h后模型組和中藥組給予10 mg/kg體重的復方地芬諾酯(0.2 m L/10 g體重）復制便秘模型,對照組給予等量的蒸餾水。造模30 m in后,各中藥組最后一次給予木檳硝黃散,模型組和對照組均給予等量的蒸餾水,30 min后各組按0.1m L/10 g體重給予配制好的墨汁(首粒糞便指示劑）,立即將小鼠放入鋪有濾紙的鼠籠內(nèi),每籠放小鼠1只,并正常供給飼料和飲水,同時開始準確計時[2]。觀察記錄每只小鼠首次排出含炭粉糞便的時間,連續(xù)觀察6 h,記錄6 h內(nèi)小鼠總排便粒數(shù),及時稱量排出糞便重量。

2 結(jié)果

2.1 木檳硝黃散對小鼠的急性毒性試驗 木檳硝黃散對小鼠急性毒性試驗的預試驗結(jié)果,初步確定0%和100%死亡劑量分別是27.70 g/kg體重、69.00 g/kg體重。根據(jù)公式計算結(jié)果 r=1.2。小鼠的急性毒性試驗正式試驗結(jié)果(見表1）。將表1數(shù)據(jù)代入改良寇氏法公式中計算得出:LD50=51.54 g/kg體重;LD50的95%可信區(qū)間為46.30～57.43 g/kg體重。

表1 木檳硝黃散對小鼠的急性毒性試驗結(jié)果

小鼠的急性毒性反應和死亡率與給藥劑量成正相關。其中高劑量組小鼠短時間內(nèi)即出現(xiàn)中毒癥狀:震顫,抽搐,呼吸急促,隨后精神沉郁,食欲減退,糞便稀薄。8 h內(nèi)出現(xiàn)死亡,18～24 h內(nèi)死亡達到高峰。未死亡的小鼠,給藥1 d后恢復正常,繼續(xù)觀察7 d未發(fā)現(xiàn)異常,采食、活動恢復正常。死亡小鼠剖檢,見胃部膨大、腸道水腫,部分可見腸道有出血點,其他臟器無肉眼可見病變。

2.2 木檳硝黃散對小鼠小腸推進運動的影響 由表1可見,模型組小腸推進率低于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01）,表示便秘模型建立成功。經(jīng)口給予小鼠木檳硝黃散7 d,中藥中劑量和高劑量組小腸推進率和模型對照組比較,差異極顯著(P＜0.01）,表明木檳硝黃散中劑量和高劑量具有促進小腸運動功效的作用。

表2 木檳硝黃散對小鼠小腸推進運動的影響(±S,n=10）

表2 木檳硝黃散對小鼠小腸推進運動的影響(±S,n=10）

注:與對照組比較,*:P＜0.05;**:P＜0.01;與模型組比較,#:P＜0.05;##:P＜0.01,以下同

組別 劑量(g/kg） 小腸總長(cm） 推進距離(cm） 推進率(%）對照組 - 51.65±0.65 21.50±1.30 41.60±1.99模型組 - 53.25±0.83 11.58±2.08 21.80±4.17**中藥低劑量組 5.79 50.22±0.61 11.90±1.11 23.70±2.01**中藥中劑量組 11.58 48.68±1.97 15.15±0.57 31.17±1.59**##中藥高劑量組 23.16 49.44±1.23 14.32±0.67 28.96±1.45**#

2.3 木檳硝黃散對小鼠排便時間和排便量的影響

肉眼觀察糞便性狀,可見模型組小鼠排出的糞便顆粒小、硬度大;而中藥組的小鼠排出的糞便顆粒大、糞質(zhì)軟、無稀糞。由表3可見,模型組小鼠的首次排便時間、糞便重量與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01,P＜0.05）,表示便秘模型建立成功。經(jīng)口給予小鼠木檳硝黃散7 d后中藥中劑量和高劑量組小鼠的首次排便時間極顯著低于模型組(P＜0.01）,糞便重量也高于模型對照組(P＜0.05）,差異有統(tǒng)計學意義,表明木檳硝黃散能加快小鼠首次排便時間,增加小鼠的排便量。

3 討論

木檳硝黃散由大黃、檳榔、芒硝和木香組成,方中大黃苦寒,善于瀉熱毒、破結(jié)滯而蕩滌胃腸,為君藥。芒硝咸寒,善于潤腸燥、軟堅結(jié)而瀉下通便,為臣藥。君臣同用,攻下之力大大增強,作用迅速且猛烈。檳榔偏于消積導滯,木香偏于溫中行氣,二者合用,相輔而行,行氣止痛,消積導滯,共為佐使藥,四藥合力,結(jié)糞除,腹痛止,乃治結(jié)之良方。

木檳硝黃散的毒性試驗還沒有相關文獻報道,有文獻[3-4]顯示檳榔煎劑和檳榔堿給小鼠灌胃的半數(shù)致死量LD50分別為120.24 g/kg和174.71 mg/kg。本試驗顯示木檳硝黃散灌服給藥LD50為51.54 g/kg,95%可信限為46.30 g/kg～57.43 g/kg。試驗過程中小鼠出現(xiàn)少動、呼吸減慢等中毒表現(xiàn),剖檢后可見腸道水腫,個別有出血點。說明木檳硝黃散具有一定的毒性,應引起臨床用藥的注意。

根據(jù)2005年版《中華人民共和國獸藥典》中[1]木檳硝黃散的推薦使用劑量進行該方療效試驗,結(jié)果顯示木檳硝黃散使用中劑量(11.58 g/kg體重）灌服小鼠可顯著的提高由復方地芬諾酯復制的小鼠便秘模型小腸墨汁推進率,縮短其排便時間,增加排便量,說明木檳硝黃散具有促進排便的功效。

表3 木檳硝黃散對小鼠排便時間和排便量的影響(±S,n=10）

表3 木檳硝黃散對小鼠排便時間和排便量的影響(±S,n=10）

組別 劑量(g/kg） 首次排便時間(min） 糞便重量(g）空白對照組 - 51.00±7.00 0.81±0.02模型組 - 89.50±30.24** 0.62±0.10*中藥低劑量組 5.79 76.89±19.69** 0.68±0.03*中藥中劑量組 11.58 55.67±21.45## 0.75±0.17#中藥高劑量組 23.16 53.13±20.02## 0.78±0.08#

[1] 中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典:二部(2005年版）[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2006:414-415.

[2] 史先振,朱圣陶,賀峰.木糖對小鼠潤腸通便作用的影響[J].食品與機械,2008,24(5）:42-44.

[3] 申放,曾正.檳榔致癌食者足戒[J].中國民間療法,1998,6:63-64.

[4] 趙成瑩,張繼瑜,周緒正,等.檳榔堿、氫溴酸檳榔堿的急性毒性研究[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志,2007,1:33-34.