前攝寧顆粒對(duì)大鼠慢性前列腺炎的治療作用

何 穎， 沈先榮， 蔣定文， 陳 偉

(海軍醫(yī)學(xué)研究所，上海200433)

慢性前列腺炎(chronic prostatitis，CP)是男性泌尿生殖系統(tǒng)最為常見(jiàn)的疾病之一，發(fā)病率高，多發(fā)于20～40歲成年男性。由于CP病因復(fù)雜，發(fā)病機(jī)制尚未完全明了，目前臨床治療還比較困難。西醫(yī)治療主要有抗生素的應(yīng)用、α受體阻滯劑的應(yīng)用和非甾體類(lèi)抗炎藥等的應(yīng)用，但療效欠佳。而中藥治療有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。CP屬于中醫(yī)“淋濁”范疇，癥狀復(fù)雜、病程遷延，容易反復(fù)發(fā)作。病位在下焦，多責(zé)之濕熱、瘀血、腎虛，病性多為本虛標(biāo)實(shí)。國(guó)內(nèi)學(xué)者報(bào)道了605例慢性前列腺炎中醫(yī)辨證分型的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)605例中濕熱型109例，氣滯血瘀型132例，腎虛型29例，混合型335例，所占比例分別為18.02%、21.85%、4.8% 和 55.46%［1］。因此有學(xué)者認(rèn)為濕熱下注、痰瘀膠結(jié)、虛實(shí)錯(cuò)雜是CP的主要病理機(jī)制特點(diǎn)。我們根據(jù)上海中醫(yī)文獻(xiàn)館老中醫(yī)周家衡教授多年的臨床經(jīng)驗(yàn)方研制了前攝寧顆粒，并對(duì)其治療大腸桿菌引起的細(xì)菌性前列腺炎和角叉菜膠引起的急性前列腺腫大(以水腫為主)進(jìn)行了報(bào)道［2］。為了進(jìn)一步探討前攝寧顆粒對(duì)慢性前列腺炎的治療效果，我們開(kāi)展了前攝寧顆粒對(duì)消痔靈致大鼠慢性前列腺炎的療效研究。

1 材料和方法

1.1 藥物 前攝寧顆粒，由上海澳博海洋生物技術(shù)有限公司提供，含生藥5.0 g/g，棕黃色顆粒，由黃芩、黃柏、牡丹皮和丹參等組成，功能:扶正固本，滋陰益腎，清熱解毒，利濕通淋、祛瘀止痛，主治慢性前列腺炎。前攝寧顆粒60 g加水配成100 mL混懸液，含前攝寧顆粒0.6 g/mL，作為大鼠大劑量組用藥，中、小劑量組再對(duì)半稀釋?zhuān)?0 mL/kg體質(zhì)量灌胃給藥，劑量分別為6、3和1.5 g前攝寧顆粒/kg(30、15和7.5 g生藥/kg);小鼠用藥則配成含前攝寧顆粒0.4 g/mL，按0.2 mL/10 g灌胃給藥，大、中、小劑量組分別為8、4和2 g前攝寧顆粒/kg(40、20和10 g生藥/kg)。

前列通片，廣州中一藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)F00047，主要由蒲公英、黃柏、車(chē)前子、兩頭尖和澤蘭等組成，功能:清熱解毒、清利濕濁，理氣活血、消炎止痛等，主治急、慢性前列腺炎。每片重約0.5 g，推薦每次6片，每天3次(共9 g)。實(shí)驗(yàn)時(shí)取40片，碾缽內(nèi)碾細(xì)后用0.5%CMC-Na溶液配成100 mL的混懸液，相當(dāng)于0.2 g/mL，大鼠按10 mL/kg灌胃給藥，劑量為2.0 g/kg。

消痔靈注射液，北京萬(wàn)輝藥業(yè)集團(tuán)第四制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)011006，臨用時(shí)用生理鹽水配制成25%的溶液。乙酸，分析純，杭州化學(xué)試劑有限公司出品。二甲苯，分析純，杭州化學(xué)試劑廠生產(chǎn)。

1.2 動(dòng)物 SD大鼠，清潔級(jí)，雄性;ICR小鼠，清潔級(jí)，雌雄兼用，均由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):浙醫(yī)動(dòng)字第2001001號(hào)。

1.3 儀器 Motic顯微數(shù)碼攝影處理系統(tǒng)(含圖像分析軟件)，電子分析天平，組織切片機(jī)等。

1.4 前列腺液白細(xì)胞計(jì)數(shù) 參照文獻(xiàn)方法［3］，取前列腺按摩液10 μL至200 μL 1%醋酸溶液中，滴管吹打均勻后充于細(xì)胞計(jì)數(shù)板中，鏡下計(jì)數(shù)四角上的4個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)，乘以50即為每1 μL前列腺液內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)。

1.5 前列腺液卵磷脂小體密度分析 參照文獻(xiàn)方法［4］，取前列腺按摩液涂片，壓上蓋玻片，鏡下觀察卵磷脂小體分布密度，根據(jù)數(shù)量多少分4、3、2和1分，進(jìn)行半定量分析。

1.6 前列腺組織形態(tài)學(xué)分析 參照文獻(xiàn)方法［5］，前列腺組織甲醛固定后，行常規(guī)石蠟切片，HE染色，在10倍物鏡下，每個(gè)標(biāo)本隨機(jī)選3個(gè)視野(每視野面積4 mm2)，在Motic圖象處理分析系統(tǒng)中，描出每個(gè)腺管(上皮外周)外周輪廓，系統(tǒng)自動(dòng)產(chǎn)生該腺管的面積和周長(zhǎng)，將數(shù)據(jù)導(dǎo)出到EXCEL進(jìn)行處理。位于視野周邊的不完整的腺管不論大小均作為0.5個(gè)腺管計(jì)，計(jì)算視野內(nèi)腺管數(shù)。根據(jù)腺管面積、腺管周長(zhǎng)、腺管數(shù)3個(gè)原始數(shù)據(jù)(每個(gè)樣品3個(gè)視野的平均值)，按下列公式計(jì)算其它指標(biāo):

間質(zhì)面積=視野總面積-腺管面積(mm2)

間質(zhì)面積比例=間質(zhì)面積/視野總面積×100(%)

每個(gè)腺管平均面積=腺管面積/腺管數(shù)(mm2)

等效直徑=2√每個(gè)腺管平均面積/π(μm)

每視野腺管總周長(zhǎng)注1=腺管總周長(zhǎng)注2-等效直徑×(不完整腺管數(shù))(μm)

每視野腺管平均周長(zhǎng)=每視野腺管總周長(zhǎng)/總腺管數(shù)(μm)

注1:對(duì)視野周?chē)煌暾俟苤兄貜?fù)計(jì)算部分進(jìn)行校正

注2:指計(jì)算機(jī)直接讀出的每視野內(nèi)所有腺管周長(zhǎng)總和

1.7 統(tǒng)計(jì)方法 所有計(jì)量數(shù)據(jù)采用學(xué)生t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)采用 χ2檢驗(yàn)，與正常對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P ＜0.01;和模型組比較，*P ＜0.05，**P ＜0.01。

1.8 試驗(yàn)方法［6］雄性SD大鼠60只，體重180～200 g，將動(dòng)物隨機(jī)分成6組，即模型組、前攝寧大劑量組、中劑量組，小劑量組、陽(yáng)性藥對(duì)照組(前列通片)和假手術(shù)組，每組10只。飼養(yǎng)1 d后造模:100 mg/kg異戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，打開(kāi)腹腔，提出膀胱及兩側(cè)精囊，暴露附于精囊的前列腺側(cè)葉，每側(cè)分別注入25%消痔靈溶液100 μL，假手術(shù)組注入相同量的生理鹽水，復(fù)位、腹腔內(nèi)滴入16萬(wàn)單位/mL青霉素1滴抗菌，縫合，傷口連續(xù)3 d碘酒消毒。造模后第2天開(kāi)始灌胃給藥，每天1次，連續(xù)給藥30 d。前攝寧顆粒大、中、小劑量組分別為30、15和7.5 g生藥/kg體質(zhì)量(6、3和1.5 g前攝寧顆粒/kg體質(zhì)量)，陽(yáng)性藥對(duì)照組給前列通片2.0 g/kg體質(zhì)量，模型組及假手術(shù)組給等量的水，灌胃體積均為1.0 mL/100 g。第30天尾靜脈取血測(cè)定白細(xì)胞數(shù)，按摩取前列腺液，鏡下觀察卵磷脂小體密度，白細(xì)胞計(jì)數(shù)。取前列腺按摩液后處死大鼠，解剖摘取前列腺，進(jìn)行解剖學(xué)觀察，稱(chēng)取前列腺濕重，計(jì)算前列腺指數(shù)，腫脹率和腫脹抑制率。10%福爾馬林溶液固定前列腺，石蠟包埋，切片，常規(guī)HE染色，進(jìn)行鏡下組織形態(tài)學(xué)觀察與分析。

前列腺重質(zhì)量指數(shù)(g/100 g)=前列腺體質(zhì)量(g)/體質(zhì)量(g)×100

腫脹率=(致炎鼠前列腺指數(shù)-假手術(shù)鼠前列腺指數(shù))/假手術(shù)鼠前列腺指數(shù)×100%

腫脹率抑率=(模型組腫脹率-用藥組腫脹率)/模型組腫脹率×100%

2 結(jié)果

2.1 前攝寧顆粒對(duì)大鼠前列腺組織增生(體質(zhì)量)的影響 前列腺組織內(nèi)注射消痔靈引起大鼠前列腺組織明顯增生，前列腺體質(zhì)量指數(shù)增加(腫脹率)41.9%。和模型組比較，前攝寧顆粒大、中和小劑量組使大鼠前列腺的腫脹度明顯降低，腫脹抑制率分別達(dá)到62.8%、54.2%和42.7%，具有明顯的劑量關(guān)系(表1)。

表1 前攝寧顆粒對(duì)消痔靈致前列腺炎大鼠前列腺重量的影響 (±s，n=10)

表1 前攝寧顆粒對(duì)消痔靈致前列腺炎大鼠前列腺重量的影響 (±s，n=10)

和假手術(shù)組比較，##P＜0.01;和模型組比較，*P＜0.05;和模型組比較，**P ＜0.01。

組別 劑量/(g/kg)前列腺體質(zhì)量/g前列腺指數(shù)/(g/100 g)體質(zhì)重腫脹率/%腫脹抑制率/%假手術(shù)組 1.58±0.29 0.396±0.067—18.4 56.1模型組 2.05±0.29##0.562±0.073## 41.9 0前攝寧組 6.0 1.66±0.11**0.458±0.041**15.6 62.8 3.0 1.75±0.31*0.472±0.070**19.2 54.2 1.5 1.85±0.13 0.492±0.039* 24.0 42.7前列通片 2.0 1.73±0.32*0.469±0.069**

2.2 前攝寧顆粒對(duì)血液和前列腺液內(nèi)白細(xì)胞數(shù)量及前列腺液卵磷脂小體密度的影響 和假手術(shù)組比較，消痔靈模型大鼠血液白細(xì)胞數(shù)量無(wú)明顯變化，但前列腺液內(nèi)白細(xì)胞數(shù)明顯增加，卵磷脂小體密度則顯著降低。前攝寧顆粒各劑量組及陽(yáng)性藥對(duì)照組血液白細(xì)胞數(shù)量無(wú)明顯變化，但明顯降低前列腺液內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)，并使前列腺液內(nèi)的卵磷脂小體密度顯著增加，有明顯的劑量關(guān)系(表2)。

表2 前攝寧顆粒對(duì)消痔靈致前列腺炎大鼠前列腺液和血液白細(xì)胞數(shù)及卵磷脂小體密度的影響 (±s，n=10)

表2 前攝寧顆粒對(duì)消痔靈致前列腺炎大鼠前列腺液和血液白細(xì)胞數(shù)及卵磷脂小體密度的影響 (±s，n=10)

和假手術(shù)組比較，##P＜0.01;*和模型組比較，P＜0.05;和模型組比較，**P ＜0.01。

卵磷脂小體密度假手術(shù)組組別 劑量//(g/kg)血液白細(xì)胞數(shù)109個(gè)/dL前列腺液白細(xì)胞108個(gè)/dL 17.2±7.3 14.5±2.9 3.67±0.50模型組 18.6±3.9 23.6±5.4## 1.30±0.48##前攝寧組 6 21.5±6.7 17.4±3.9* 2.10±0.74*3 28.1±12.2 17.6±4.2* 1.50±0.71 1.5 16.7±2.1 21.8±3.5 1.40±0.70前列通片 2.0 21.3±7.1 17.5±4.4* 2.30±0.67**

2.3 前攝寧顆粒對(duì)前列腺形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響 假手術(shù)對(duì)照組大鼠前列腺組織柔軟有光澤，彈性好，與周?chē)M織無(wú)黏連，易分離;模型組腺體稍大，部分與周?chē)M織黏連，部分組織表面可見(jiàn)纖維化;陽(yáng)性藥對(duì)照組前列腺大;中劑量組腺體相對(duì)較柔軟，表面有光澤，但腺體也有不同程度的腫脹;小劑量組前列腺組織外觀改善并不很明顯。

組織形態(tài)學(xué)分析顯示，和假手術(shù)組比較模型組大鼠前列腺組織中每一視野內(nèi)(4 mm2)間質(zhì)組織面積比例明顯增加，提示間質(zhì)組織增生，而每個(gè)腺管的平均面積和周長(zhǎng)均無(wú)明顯變化，提示模型對(duì)前列腺組織中腺管上皮細(xì)胞并無(wú)明顯促增殖作用。和模型組比較，前攝寧顆粒大、中劑量組的間質(zhì)面積均明顯降低，小劑量組則有一定的降低趨勢(shì)，提示能明顯抑制消痔靈引起的前列腺間質(zhì)組織增生，而對(duì)腺管的平均面積等均無(wú)明顯影響(表3，圖1)。

表3 前攝寧顆粒對(duì)前列腺組織間質(zhì)增生和腺體形態(tài)的影響 (n=10)

圖1 前攝寧顆粒對(duì)消痔靈致大鼠慢性前列腺炎的抑制作用

3 討論

國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，慢性前列腺炎患者的前列腺內(nèi)可以檢測(cè)出革蘭氏陰性桿菌、沙眼衣原體、支原體、人乳頭狀瘤病毒、真菌、滴蟲(chóng)等。前列腺組織因感染細(xì)菌而產(chǎn)生的黏性物質(zhì)抗吞噬和抗趨化作用，可影響白細(xì)胞浸潤(rùn)、淋巴細(xì)胞增殖。若前列腺組織中細(xì)菌對(duì)抗生素產(chǎn)生耐藥性，將導(dǎo)致前列腺感染難以治愈且易復(fù)發(fā)［7］。病理觀察表明，慢性前列腺炎的前列腺組織中炎性細(xì)胞浸潤(rùn)上皮細(xì)胞導(dǎo)致阻塞、變性，而前列腺腺體間質(zhì)發(fā)生水腫、腺管阻塞、炎性膿液。CP感染多發(fā)于間質(zhì)，并因與腺體慢性充血相互影響，導(dǎo)致CP的病理改變加重，遷延難愈。前攝寧顆粒6 g和3 g/kg明顯抑制由消痔靈誘導(dǎo)的大鼠慢性前列腺炎，使前列腺組織增生程度明顯降低，前列腺(重量)腫脹度抑制率達(dá)到43% ～63%，前列腺液內(nèi)白細(xì)胞數(shù)降低，而磷脂小體密度則明顯恢復(fù)。組織形態(tài)學(xué)分析顯示，前攝寧顆粒6 g和3 g/kg使前列腺間質(zhì)增生程度明顯減輕，1.5 g/kg也有相似的趨勢(shì)，劑量關(guān)系明確。但前攝寧顆粒不同劑量組對(duì)腺管大小無(wú)明顯影響，提示前攝寧顆粒對(duì)前列腺組織中腺管上皮細(xì)胞無(wú)明顯作用。

劉明等報(bào)道純中藥滴丸劑-飛龍前列爽滴丸能抗炎、鎮(zhèn)痛，有明顯的抗慢性前列腺炎作用，有抑制早期炎癥和晚期炎癥的作用［8-9］;李占玲等觀察了前康寧顆粒對(duì)大鼠慢性非細(xì)菌性前列腺炎模型前列腺組織病理學(xué)的影響，發(fā)現(xiàn)前康寧有抗炎、消腫作用，可改善局部血運(yùn)，使前列腺組織形態(tài)恢復(fù)正常，相關(guān)抗炎實(shí)驗(yàn)也表明前康寧顆粒具有明顯的抗炎作用，臨床療效觀察揭示該藥對(duì)慢性前列腺炎治療作用顯著［10-11］。眾多研究表明中醫(yī)藥治療CP較西醫(yī)治療效果好，因此，研制療效佳的前攝寧顆粒治療易反復(fù)發(fā)作的CP有著良好的應(yīng)用前景。

此外，我們?cè)谇捌谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)，前攝寧對(duì)大腸桿菌引起的細(xì)菌性前列腺炎大鼠模型具有與消痔靈模型類(lèi)似效應(yīng)，對(duì)角叉菜膠引起的急性前列腺腫大(以水腫為主)療效相對(duì)較弱，但也能明顯減少該模型前列腺液內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)，能夠抑制二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹和醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)，減輕大鼠異物(棉球)刺激引起的肉芽組織形成，預(yù)防和治療給藥對(duì)金黃色葡萄球菌感染引起的小鼠死亡有一定的抑制作用，但作用強(qiáng)度較弱。上述結(jié)果提示:前攝寧顆粒能明顯抑制大鼠慢性前列腺炎，抑制前列腺間質(zhì)組織的增生，并具有一定的抗炎和鎮(zhèn)痛作用。

［1］戚廣宗.中國(guó)首屆男科學(xué)術(shù)大全述要［J］.中醫(yī)雜志，1996，37(1):11-14.

［2］沈先榮，李水軍，蔣定文，等.前攝寧顆粒對(duì)SD大鼠前列腺炎的抗炎作用［J］. 中成藥，2008，30(6):808-812.

［3］趙廣明，趙連華，韓貴夫，等.前列腺液白細(xì)胞定量計(jì)數(shù)及參考值測(cè)定［J］. 中華男科學(xué)，2002，8(2):209.

［4］孫明杰，賈玉森，李 軍，等.前列腺炎栓藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究［J］. 中國(guó)中藥雜志，2000，25(4):233-238.

［5］谷現(xiàn)恩，潘柏年.現(xiàn)代前列腺疾?。跰］.北京醫(yī)科大學(xué)中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1996:17.

［6］張亞強(qiáng)，于靈惠.中藥前列腺湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性前列腺炎病理模型的影響［J］. 中西醫(yī)結(jié)合雜志，1991，11(8):480-481.

［7］陳志強(qiáng).男科專(zhuān)病中醫(yī)臨床診治［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2000:1-7.

［8］劉 明，張永萍，邱德文，等.飛龍前列爽滴丸抗前列腺炎的實(shí)驗(yàn)研究［J］.貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，28(2):58-60.

［9］劉 明，張永萍，羅春麗，等.飛龍前列爽滴丸對(duì)慢性前列腺炎的抗炎作用［J］. 中南藥學(xué)，2006，4(3):169-171.

［10］李占玲，吳春芳，李國(guó)信，等.前康寧顆粒對(duì)前列腺組織病理學(xué)的影響［J］. 中國(guó)醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2003，18(10):632-633.

［11］李占玲，李國(guó)信，吳春芳，等.前康寧治療慢性前列腺炎動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床療效觀察［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，2003，9(5):391-395.