P53在三陰性乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義

唐永紅，唐利立

中南大學(xué)湘雅醫(yī)院乳腺外科，湖南長沙 410008

三陰性乳腺癌（TNBC）是指雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）及人表皮生長因子受體（HER-2）均陰性的乳腺癌。目前，三陰性乳腺癌患者無法從內(nèi)分泌及針對HER-2陽性的靶向治療中受益，此類患者5年無病生存率低，復(fù)發(fā)風(fēng)險高，預(yù)后差。本研究收集湘雅醫(yī)院乳腺外科2006年6月～2010年10月收治的可手術(shù)患者三陰性乳腺癌85例及非三陰性乳腺癌90例，比較分析P53蛋白在二者中的表達(dá)特點，旨在探討P53蛋白在三陰性乳腺癌預(yù)后判斷中的價值，并能為尋求三陰性乳腺癌的個體化治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究收集湘雅醫(yī)院乳腺外科2006年6月～2010年10月的可手術(shù)患者三陰性乳腺癌85例及非三陰性乳腺癌90例，三陰性乳腺癌85例為三陰組，非三陰性乳腺癌90例為非三陰組，比較分析P53蛋白在二者中的臨床病理資料，包括年齡、腫瘤大小、腫瘤分期、淋巴結(jié)狀態(tài)、組織學(xué)分級和家族史。患者均為女性，中位年齡49（23～81）歲，均經(jīng)術(shù)后病理及免疫組化證實。均未行輔助化療及放療。

1.2 方法

1.2.1 組織切片 切除的標(biāo)本經(jīng)甲醛液固定，常規(guī)石蠟包埋切片，行蘇木精-伊紅（HE）染色，光鏡觀察。

1.2.2 免疫組化 采用免疫組化SP法檢測ER、PR、HER-2、P53表達(dá)變化，試劑盒均購自福建邁新生物技術(shù)有限公司。免疫組化染色用PBS代替一抗作陰性對照，以已知陽性組織作陽性對照。DAB顯色，蘇木素復(fù)染，步驟嚴(yán)格按照說明書操作。

1.3 結(jié)果判斷

判斷標(biāo)準(zhǔn)按試劑盒推薦標(biāo)準(zhǔn)，ER、PR、P53以細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性染色，HER-2以細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性染色。陽性細(xì)胞必須具備：①細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰；②陽性顆粒定位準(zhǔn)確，必須定位于細(xì)胞核（ER、PR、P53）或細(xì)胞膜（HER-2）上；③細(xì)胞核或細(xì)胞膜的著色要明顯高于背景。100個高倍視野陽性染色率＜10%為陰性，＞10%為陽性，見圖1、2。HER-2檢測根據(jù)美國臨床腫瘤協(xié)會和美國病理醫(yī)師學(xué)院2006年12月發(fā)布的HER-2檢測臨床實踐指南[1]。HER-2免疫組化染色0或1個加號者被判定為陰性，3個加號者被判定為陽性，2個加號者用熒光原位雜交（FISH）進(jìn)行驗證，如果Her-2/CSP17比值＞2.2，F(xiàn)ISH結(jié)果定為陽性，≤2.2則為陰性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 P53在三陰組及非三陰組中的臨床表達(dá)特點

P53在三陰組及非三陰組中的表達(dá)特點與患者年齡、腫瘤大小、臨床分期、淋巴結(jié)狀態(tài)、組織學(xué)分級、家族史關(guān)系見表1。由表1可見，在三陰組中，患者年齡＜50歲時，P53蛋白陽性率為74.00%（37/50），在年齡≥50歲時，P53蛋白陽性率為 48.57%（17/35），兩者之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。P53蛋白陽性率在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組中為54.39%（31/57），在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組中為82.14%（23/28），兩者之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。在組織學(xué)分級1級中占22.22%（2/9），2級中為 65.00%（39/60），3級中占 81.25%（13/16），兩者之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。P53蛋白陽性與腫瘤臨床分期、家族史之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。在腫瘤直徑≥5 cm組中，P53陽性率為76.47%（13/17），高于腫瘤直徑＜5 cm組的60.29%（41/68），差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但有增高趨勢。在非三陰組中，P53蛋白陽性在組織學(xué)分級1級中占18.18%（2/11），2級中占 47.95%（35/73），3級中占 83.33%（5/6），兩者之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），與患者年齡、腫瘤大小、臨床分期、淋巴結(jié)狀態(tài)、家族史之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。

表1 P53在三陰組及非三陰組中的臨床表達(dá)特點（例）

2.2 P53蛋白在三陰組及非三陰組中的比較分析

見表2。由表2可知，P53蛋白陽性在三陰組占63.53%（54/85），非三陰組中占 46.67%（42/90），兩者之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 P53在三陰組及非三陰組中的比較分析（例）

3 討論

正常細(xì)胞的P53基因又稱為野生型P53基因（Wt P53），是人類腫瘤中最常涉及的一個抑癌基因，但在正常細(xì)胞中，野生型P53蛋白半衰期短，只有20 min左右，難以通過常規(guī)免疫組化檢測到，但野生型P53基因突變后產(chǎn)生突變型P53蛋白，導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)化和癌變，是一種癌基因。突變的P53蛋白半衰期長，為2～12 h，免疫組化所檢測到的P53蛋白均屬于突變型P53的表達(dá)產(chǎn)物。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為其過度表達(dá)常提示該原癌基因存在擴增，并促進(jìn)癌細(xì)胞的運動 ，從而導(dǎo)致癌瘤深部浸潤和轉(zhuǎn)移，腫瘤惡性程度高，臨床預(yù)后差，5年生存率低[2]。

本研究將85例三陰性乳腺癌及90例非三陰性乳腺癌作為研究對象，病理類型均為浸潤性導(dǎo)管癌，排除了組織學(xué)類型的干擾。三陰性及非三陰性浸潤性乳腺癌分別占同期三陰性及非三陰性乳腺癌的90.85%（268/295）及78.37%（953/1 216），由此也證實三陰性乳腺癌病理類型幾乎均為浸潤性導(dǎo)管癌，與Bauer等[3]報道的三陰性乳腺癌病理類型幾乎均為浸潤性導(dǎo)管癌，腫瘤多表達(dá)P53一致。本研究中，三陰性乳腺癌占同期乳腺癌的19.52%（295/1 511），高于Bauer、Rakha 等[3-4]報道的10%～16%，與趙曉輝等[5]的報道（19.46%）基本相符，低于柴文英等[6]報道的26.60%?？偟恼f來，三陰性乳腺癌發(fā)病率有增高的趨勢，可能與檢測手段的完善、檢出率增加有關(guān)。本乳腺中心從2010年開始在本科室門診實驗室開展免疫組化HER-2 2個加號者用熒光原位雜交（FISH）進(jìn)行驗證，增加了三陰性乳腺癌的檢出率。國內(nèi)外文獻(xiàn)報道P53的陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系不一致。本研究發(fā)現(xiàn)，在三陰組中，P53陽性表達(dá)與淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（P＜0.05），與林黎娟等[7]報道的相符，可能與三陰性乳腺癌易局部復(fù)發(fā)、生存率低有關(guān)。本研究三陰組中，P53蛋白陽性在組織學(xué)2、3級高達(dá)68.42%（52/76），在非三陰組中2、3級達(dá)50.63%（40/79），兩組中P53蛋白陽性與組織學(xué)分級之間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。乳腺癌組織中P53表達(dá)與其組織學(xué)分級有關(guān)，即組織學(xué)分化越差，P53陽性率越高，表明P53蛋白可以作為乳腺癌判斷細(xì)胞分化程度的指標(biāo)[8]。與其他類型乳腺癌相比，三陰性乳腺癌細(xì)胞分化差，1級患者比率較小[9-11]，較早發(fā)生局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，內(nèi)臟轉(zhuǎn)移率高，預(yù)后差[3,12]，已成為近年的研究熱點之一。本研究中，P53蛋白陽性在三陰組及非三陰組中與組織學(xué)分級均有差異，但三陰組中P53蛋白陽性率仍高于非三陰組中P53蛋白陽性率，且由表2可知，P53蛋白陽性率在三陰組占63.53%（54/85）明顯高于非三陰組的46.67%（42/90），兩者之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），表明P53陽性的乳腺癌惡性程度高，更可以作為判斷三陰性乳腺癌預(yù)后的一個重要因素。從本研究的統(tǒng)計結(jié)果來看，尚不能認(rèn)為乳腺癌家族史對三陰性乳腺癌的發(fā)生有影響，這與文獻(xiàn)報道的不一致[13]，不過由于本研究例數(shù)不太多，乳腺癌家族史與三陰性乳腺癌之間的關(guān)系需要更大樣本量的研究證實。

乳腺癌是一類高度異質(zhì)性的惡性腫瘤，無論在組織形態(tài)、免疫表型、生物學(xué)行為還是治療反應(yīng)上都存在著極大地差異。三陰性乳腺癌是一種高危乳腺癌，具有特殊的生物學(xué)特性、病理特征和臨床病程，總體預(yù)后差，預(yù)后因素與其他類型乳腺癌有所不同，已作為一種獨立類型的乳腺癌，也成為近年研究的熱點。此類腫瘤高表達(dá)P53，而這也是乳腺癌侵襲性和預(yù)后相關(guān)的生物學(xué)指標(biāo)，P53蛋白陽性提示其惡性程度高，易轉(zhuǎn)移，預(yù)后差。臨床工作中，三陰性乳腺癌結(jié)合P53蛋白分析，可以為我們判斷其預(yù)后并制訂個體化綜合治療方案提供參考。

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