土壤有效磷檢測(cè)中改變標(biāo)準(zhǔn)溶液磷濃度和顯色劑含量的試驗(yàn)

□楚雄州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 675000 楊冬月

□楚雄州農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)中心 675000 虞繼權(quán)

按照《云南省測(cè)土配方施肥暨地力評(píng)價(jià)技術(shù)》一書檢測(cè)土壤有效磷，配制的一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液中，最高濃度是0.50ug.ml-1，此濃度相對(duì)應(yīng)的吸光度值是0.2，而依據(jù)相關(guān)資料證明，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)曲線吸光度范圍是0.2～0.8（透射比為15%～65%）時(shí)，在此范圍中測(cè)定的樣品濃度相對(duì)誤差較小。為此，可采用的方法之一是調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。根據(jù)《云南省測(cè)土配方施肥暨地力評(píng)價(jià)技術(shù)培訓(xùn)教材》、《化驗(yàn)員讀本儀器分析》，證實(shí)顯色劑的用量影響標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，而且顯色劑的用量與標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度之間的關(guān)系可通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定。鑒于此，所做的實(shí)驗(yàn)分兩步，第一步：配制一組磷含量是1.0ug.ml-1，而顯色劑含量不同的溶液，顯色劑的含量從低到高，依次增加，測(cè)定這組溶液的吸光度。根據(jù)吸光度—濃度之間的關(guān)系，在一定的濃度值之間（此處濃度值指顯色劑的濃度）吸光度出現(xiàn)穩(wěn)定值，與這個(gè)穩(wěn)定的吸光度值相對(duì)應(yīng)的顯色劑的量就是實(shí)驗(yàn)需確定的數(shù)據(jù)，它是配制標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度達(dá)1.0ug.ml-1時(shí)所需添加的顯色劑的量。第二步：為了比較在標(biāo)準(zhǔn)曲線中加入第一步試驗(yàn)得出的顯色劑的量后所檢測(cè)的樣品結(jié)果，與按照《云南省測(cè)土配方施肥暨地力評(píng)價(jià)技術(shù)培訓(xùn)教材》一書配制的標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測(cè)的樣品結(jié)果是否一致，從第一步試驗(yàn)中選定一個(gè)在范圍內(nèi)的顯色劑的用量，配制成一組磷濃度是0.0ug.ml-1到1.0ug.ml-1的標(biāo)準(zhǔn)曲線，檢測(cè)樣品，記錄吸光度值，再按照教材配制一組磷濃度是0.0ug.ml-1到0.5ug.ml-1的標(biāo)準(zhǔn)曲線，檢測(cè)同一個(gè)樣品，記錄吸光度值，判定兩個(gè)吸光度值是否一致，從而進(jìn)一步驗(yàn)證磷濃度是0.0ug.ml-1到1.0ug.ml-1的標(biāo)準(zhǔn)曲線中所添加的顯色劑的量是否正確。

1 材料與方法

1.1 材料

1）磷標(biāo)準(zhǔn)溶液[C（P）=100mg.L-1]。稱取經(jīng)105℃下烘干2h的磷酸二氫鉀（優(yōu)級(jí)純）0.4390g，用水溶解后，加入5ml濃硫酸，定容至1L。

2）5mg.L-1磷標(biāo)準(zhǔn)溶液。吸取5.00ml濃度為100mg.L-1的磷標(biāo)準(zhǔn)貯備液于100ml容量瓶中，定容。

3）鉬銻抗顯色劑。稱取1.50g抗壞血酸（分析純），溶于100ml7.5mol.L-1硫酸鉬銻貯備液中。

4）7.5mol.L-1硫酸鉬銻貯備液。取蒸餾水約400ml，燒杯浸在冷水內(nèi)，然后緩緩注入分析純濃硫酸208.3ml，并不斷攪拌，冷卻至室溫。另取分析純鉬酸銨20g溶于約60℃的200ml蒸餾水中，冷卻。然后將硫酸溶液徐徐倒入鉬酸銨溶液中，不斷攪拌再加入100ml酒石酸銻鉀溶液（濃度是0.5%），用蒸餾水稀釋至1000ml，搖勻，貯于棕色試劑瓶中。

5）分析天平。感量0.0001g。

6）分光光度計(jì)?？稍?60nm下測(cè)定吸光度，北京普析TU1901雙光束紫外分光光度計(jì)。

1.2 方法

1）磷含量是1.0ug.ml-1，顯色劑含量不同的各溶液吸光度的測(cè)定。分別吸取5mg.L-1磷標(biāo)準(zhǔn)溶液10.00ml于八個(gè)50ml的容量瓶中，依次加入釩鉬酸銨顯色劑 0ml、2ml、4ml、6ml、8ml、10ml、12ml、14ml，充分搖動(dòng)逐盡 CO2后用水定容，即為含磷是1.0ug.ml-1，含顯色劑濃度不同的一組溶液，在室溫高于20℃處放置30min后，用1cm光徑比色皿在波長(zhǎng)660nm處測(cè)定吸光度。

2）樣品的制備。吸取5mg.L-1的磷標(biāo)準(zhǔn)溶液5ml于50ml的容量瓶中，加入顯色劑5.00ml，充分搖動(dòng)逐盡CO2后用水定容，作為待測(cè)樣品。

3）濃度最高點(diǎn)1.0ug.ml-1的標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：吸取50mg.L-1磷標(biāo)準(zhǔn)溶液0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00ml于 50ml容量瓶中，各加入顯色劑10ml，充分搖動(dòng)逐盡CO2后用水定容，即為含磷 0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ug.ml-1磷標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，在室溫高于20℃處放置30min后，用1cm光徑比色皿在波長(zhǎng)660nm處比色測(cè)定經(jīng)過(guò)2）條處理的樣品濃度。

4）濃度最高點(diǎn)是0.5ug.ml-1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：按照《云南省測(cè)土配方施肥暨地力評(píng)價(jià)技術(shù)培訓(xùn)教材》操作，吸取5mg.L-1磷標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml于 50ml容量瓶中，各加入顯色劑5.00ml，充分搖動(dòng)逐盡 CO2后用水定容，即為含磷0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50ug.ml-1磷標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，在室溫高于20℃處放置30min后，用1cm光徑比色皿在波長(zhǎng)660nm處比色測(cè)定經(jīng)2）條處理的樣品濃度。

2 結(jié)果與分析

1）磷的濃度值是 1.00ug.ml-1，加入 8ml、10ml、12ml顯色劑的溶液測(cè)得的吸光度值分別是0.470、0.467、0.467，根據(jù)紫外分光光度計(jì)光度準(zhǔn)確度是±0.004Abs（0.5～1.0Abs），這三個(gè)值可以看作是相同。檢測(cè)結(jié)果見表1。所以當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的最高濃度值是1.00ug.ml-1時(shí)，加入 8ml、10ml或 12ml的顯色劑，檢測(cè)結(jié)果都相同。為了節(jié)省試劑用量，為了移液方便、快速，確定顯色劑用量是10ml。

表1 濃度是1.00ug.ml-1溶液加入不同量顯色劑的吸光度

2）按照3）條檢測(cè)樣品，結(jié)果濃度是0.466ug.ml-1，另外按照4）條檢測(cè)同一個(gè)樣品，結(jié)果濃度是0.465ug.ml-1，兩個(gè)檢測(cè)值可視為相同。所以，配制含磷濃度是0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ug.ml-1的標(biāo)準(zhǔn)曲線，各溶液加入10ml顯色劑，這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線中測(cè)定的樣品與按《云南省測(cè)土配方施肥暨地力評(píng)價(jià)技術(shù)培訓(xùn)教材》測(cè)定的同一個(gè)樣品比較，結(jié)果相同。在實(shí)際檢測(cè)中，按照3）條配制的標(biāo)準(zhǔn)曲線適用可行。

3 討論

1）由于各地方的土壤含磷量不同，不同類型的土壤含磷也不同，在檢測(cè)中，可適度調(diào)整檢測(cè)磷的標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度，繼而相應(yīng)調(diào)整顯色劑的含量。

2）在檢測(cè)過(guò)程中，如果樣品的顏色比標(biāo)準(zhǔn)曲線中1.0ug.ml-1的溶液顏色深，則可用目測(cè)法把樣品先作適當(dāng)稀釋，直到稀釋的樣品顏色淺于1.0ug.ml-1的溶液顏色時(shí)，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定。但是在稀釋過(guò)程中，建議將樣品移至容量瓶?jī)?nèi)稀釋，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確度。

3）在此實(shí)驗(yàn)中，進(jìn)行樣品處理時(shí)，為了減少誤差，采用了樣品處理與標(biāo)準(zhǔn)曲線配制相同的方法。但在實(shí)際檢測(cè)中，樣品的處理方法應(yīng)按標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

4 結(jié)論

1）土壤有效磷的檢測(cè)中，在標(biāo)準(zhǔn)曲線磷含量濃度達(dá)1.0ug.ml-1的情況下，每50ml的溶液中加入8～12ml顯色劑，各溶液檢測(cè)到的吸光度相同，即在實(shí)際檢測(cè)中可用的顯色劑的量是 8～12ml。

2）配制磷濃度最高達(dá)1.0ug.ml-1，顯色劑是每50ml的溶液加入10ml的標(biāo)準(zhǔn)曲線，在此標(biāo)準(zhǔn)曲線中檢測(cè)樣品，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制方法可在實(shí)際檢測(cè)中運(yùn)用。

[1]竇曉黎，等.云南省測(cè)土配方暨地力評(píng)價(jià)技術(shù)培訓(xùn)教材.

[2]劉珍，等.化驗(yàn)員讀本[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，1983.

[3]北京普析通用儀器有限責(zé)任公司編.Uvwin5使用指南.