蝴蝶蘭根腐病及根際真菌的種類鑒定

張學(xué)才， 章淑玲

(福建農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院園藝園林系， 福建 福州 350119)

蝴蝶蘭Phalaenopsisamabilis又名蝶蘭，為蘭科蝴蝶蘭屬常綠草本植物，有“蘭花皇后”的美稱。近年來(lái)蝴蝶蘭在福建省的種植面積在不斷擴(kuò)大，筆者發(fā)現(xiàn)蝴蝶蘭苗期根部常發(fā)生腐爛，為探明福建省蝴蝶蘭根腐病發(fā)生的原因，筆者于2010-2011年對(duì)蝴蝶蘭根部及介質(zhì)中的真菌種類進(jìn)行了分離和鑒定。

1 材料與方法

1.1 樣本采集

從福州、廈門(mén)、泉州、漳州、龍巖等地采集蝴蝶蘭根腐病的病植株及根際栽培介質(zhì)，用塑料袋密封并帶回實(shí)驗(yàn)室及時(shí)分離。

1.2 病組織中真菌的分離

洗凈蝴蝶蘭病根，切取長(zhǎng)約5 mm的病健交界處的新鮮組織數(shù)段，根段經(jīng)表面消毒后移入含氯霉素馬鈴薯蔗糖瓊脂平板(PSA)上，25 ℃培養(yǎng)，形成菌落后，及時(shí)純化[1]。栽培介質(zhì)經(jīng)表面消毒后培養(yǎng)方法同病根。

1.3 菌株鑒定

分離純化的菌株經(jīng)顯微形態(tài)特征觀察，參照文獻(xiàn)[2-5]進(jìn)行種類鑒定。

1.4 優(yōu)勢(shì)菌的致病性測(cè)定

從園藝場(chǎng)中選擇健壯無(wú)病蝴蝶蘭苗株，植入經(jīng)高壓蒸汽滅菌的栽培介質(zhì)中，待1周成活后分別將分離獲得的優(yōu)勢(shì)純菌株制成菌絲懸浮液和孢子懸浮液用以灌根接種，以無(wú)菌水作對(duì)照，每一菌株接種處理10株，其中5株經(jīng)過(guò)針刺傷根處理。接種后進(jìn)行觀察，待植株出現(xiàn)根部腐爛癥狀時(shí)，對(duì)根部病組織進(jìn)行分離培養(yǎng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 病害癥狀

受感染的蝴蝶蘭植株表現(xiàn)為生長(zhǎng)緩慢，根部成段變褐(圖1A )，隨后根系逐漸腐爛，導(dǎo)致葉片萎蔫并由綠色逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色，進(jìn)而根全部腐爛至植株枯死。根際介質(zhì)中常布滿大量黃褐色菌絲 (圖1B )。該病以蝴蝶蘭苗期最為常見(jiàn)。

A-B.病株；C.立枯絲核菌;D.茄病鐮孢;E.尖孢鐮孢;F.禾谷鐮孢; G.康氏木霉;H.長(zhǎng)枝木霉; I.哈茨木霉;J.盤(pán)多毛孢;K.多主枝孢霉;L.?，F(xiàn)青霉;M.擬青霉;N.匐枝根霉。圖1 蝴蝶蘭根腐病癥狀及病原菌Figure 1 Fungi speices of butterfly orchid root-rot disease

2.2 根際真菌的鑒定

從蝴蝶蘭根腐病的病根及栽培介質(zhì)中共分離出210株真菌菌株，經(jīng)鑒定為8個(gè)屬，12個(gè)種，見(jiàn)表1。其中立枯絲核菌、茄病鐮孢和尖孢鐮孢為優(yōu)勢(shì)菌，分別占分離物總株數(shù)的26.19%、15.71%和10.95%。立枯絲核菌為蝴蝶蘭根腐病的栽培介質(zhì)中優(yōu)勢(shì)菌群，發(fā)病重的植株介質(zhì)中均可分離到該菌。病根中則以茄病鐮孢居多，其次是尖孢鐮孢和立枯絲核菌。

表1 蝴蝶蘭根腐病中根際真菌的形態(tài)特征及分離率

續(xù)表1

病原菌種類形態(tài)特征分離數(shù)(株)病根介質(zhì)合計(jì)株數(shù)分離率%?，F(xiàn)青霉Penicillium frequentans在PSA平板上,菌落絨狀,正面灰綠色;培養(yǎng)基反面米黃色,有些具明顯的輪紋或呼吸滴。分生孢子梗短,頂端稍膨大,帚狀分枝,小梗4-6個(gè)密集;分生孢子球形或近球形(圖1L)。94136.19擬青霉Penicilomycessp.在PSA平板上,菌落生長(zhǎng)較慢,中間綠色往外迅速變淺為橙黃色,外圈為白色。菌落在培養(yǎng)基反面可見(jiàn)洋紅色輪紋。分生孢子梗和分枝比較分散,分生孢子串生,單胞,卵圓形到紡錘形,無(wú)色(圖1M)。5273.33葡枝根霉Rhizopus stolonifer在PSA平板上,菌落初期白色,老熟后灰褐色或黑色;生長(zhǎng)后期產(chǎn)生氣生菌絲,并且在基物表面形成緊貼基質(zhì)表面的匍匐絲。假根非常發(fā)達(dá),根狀,褐色;孢囊梗直立,通常2-4株成束,不分枝,光滑,灰褐色;孢子囊近球形,灰褐色,菌絲上一般不形成厚垣孢子(圖1N)。98178.11合計(jì)12288210100

2.3 致病性測(cè)定

分別接種立枯絲核菌、茄病鐮孢及尖孢鐮孢于蝴蝶蘭植株，其根部均表現(xiàn)出不同程度的腐爛癥狀。立枯絲核菌傷根接種，發(fā)病率達(dá)80%，無(wú)傷接種，發(fā)病率為30%；茄病鐮孢傷根接種，發(fā)病率為60%，無(wú)傷接種發(fā)病率為20%；尖孢鐮孢傷根接種，發(fā)病率為50%，無(wú)傷接種，發(fā)病率為0。將所有表現(xiàn)發(fā)病癥狀的根進(jìn)行再分離，均得到原接種的病原菌，回分離率達(dá)100%。無(wú)菌水對(duì)照未表現(xiàn)癥狀，也未分離到以上3種病原菌。

3 討論

蝴蝶蘭根腐病是近年來(lái)福建省蝴蝶蘭苗期發(fā)現(xiàn)的一種新病害，也是較嚴(yán)重的一種根部病害，關(guān)于該病的描述較少[6]。本研究發(fā)現(xiàn)蝴蝶蘭苗期根腐病的根際真菌有12種，分別為立枯絲核菌、茄病鐮孢、尖孢鐮孢、禾谷鐮孢、康氏木霉、長(zhǎng)枝木霉、哈茨木霉、盤(pán)多毛孢、多主枝孢霉、常現(xiàn)青霉、擬青霉和匍枝根霉。其中立枯絲核菌、茄病鐮孢和尖孢鐮孢為優(yōu)勢(shì)菌，分別占分離物總株數(shù)的26.19%、15.71%和10.95%。通過(guò)柯赫證病過(guò)程，證實(shí)以上3種優(yōu)勢(shì)菌均可致病。從病原菌分離率和致病性測(cè)定來(lái)看，立枯絲核菌是主要致病菌，茄病鐮孢次之，再次是尖孢鐮孢。從試驗(yàn)中可以看出，通過(guò)傷口侵入是病原菌侵染的主要途徑。因此，蝴蝶蘭在栽培和移栽過(guò)程中所造成的人為傷口及地下害蟲(chóng)的危害均可加重根腐病的發(fā)生。

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[2] 中國(guó)科學(xué)院微生物所.常見(jiàn)與常用真菌[M].北京:科學(xué)出版社,1978:77-250.

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