HPLC-ELSD法測定復(fù)方芪丹膠囊中黃芪甲苷的含量

何艷清 李賜恩 張俊紅

HPLC-ELSD法測定復(fù)方芪丹膠囊中黃芪甲苷的含量

何艷清 李賜恩 張俊紅

目的建立復(fù)方芪丹膠囊中黃芪甲苷的含量測定方法。方法以乙腈∶水(30∶70)為流動相，Agilent Hypersil ODSC18柱 (4.0 mm 125 mm，5μm)為固定相，流速為1.0 ml/min;漂移管溫度:45℃，氮氣流速:1.5L/min。結(jié)果黃芪甲苷在1.832～18.32μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為96.45%，RSD為1.16%。結(jié)論該方法準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、靈敏度高，可用于復(fù)方芪丹膠囊中黃芪甲苷的含量測定。

黃芪甲苷;高效液相色譜法;含量測定

復(fù)方芪丹膠囊主要由黃芪、丹參等多味藥物組成，具有益氣養(yǎng)陰，活血祛瘀的作用。制劑中成分較復(fù)雜，黃芪為方中君藥，本文采用高效液相色譜法對該制劑中黃芪的有效成分黃芪甲苷進行含量測定，探討該方的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

Agilent1200高效液相色譜儀(美國);Alltech 3300蒸發(fā)光散射檢測器(美國Grace);Mettler-Toledo XS205 dU電子分析天平(瑞士);Agilent Hypersil ODSC18(4.0 125 mm，5μm)色譜柱。乙腈為色譜純試劑(Merck)，水為雙蒸水，其他試劑均為分析純。黃芪甲苷對照品購于中國食品藥品檢定研究院，批號:110781-200613，復(fù)方芪丹膠囊及其空白制劑為本單位自制，批號:100701，100702，100703。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent Hypersil ODSC18柱(4.0 mm×125 mm，5 μm);流動相:乙腈-水(30∶70);流速:1.0 ml/min;柱溫:35℃;漂移管溫度:45℃;氮氣流速:1.5 L/min。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥24 h的黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每1 ml含黃芪甲苷分別為 0.1832，0.3664，0.5496，0.9160，1.2824，1.8320 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 膠囊內(nèi)容物研細，取約5 g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇40 ml，冷浸過夜，再加甲醇適量，加熱回流4 h，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘渣加水10 ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40 ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40 ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5 ml使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑為1.5 cm.柱高為12 cm)，以水50 m l洗脫，棄去水液，再用40%乙醇30 ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇80 ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至 5 m l量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得［1，2］。

2.4 線性范圍的考察 分別精密吸取不同濃度黃芪甲苷對照品溶液(每1 ml中含黃芪甲苷分別為0.1832，0.3664，0.5496，0.9160，1.2824，1.8320 mg)10 μL，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積(Y)的自然對數(shù)為縱坐標(biāo)，以黃芪甲苷含量(X)的自然對數(shù)為橫坐標(biāo)進行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線lnY=1.57437nX+4.8125，r=0.99992。表明黃芪甲苷在1.832～18.32μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液(0.9160 mg/ml)10 μL分別進樣6次，測得峰面積積分值RSD為0.47%(n=6)，表明方法的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液(批號:100701)10 μL 分別于0，1，2，4，6，8 h 進樣，測定峰面積，結(jié)果 RSD 為1.19%(n=6)，表明供試品在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗 取同一供試品(批號:100701)6份，分別精密稱定，按上述供試品溶液制備方法和色譜條件測定，計算含量，RSD為1.26%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品，分別精密加入一定量的黃芪甲苷對照品，按供試品溶液制備方法和色譜條件測定，測得平均回收率為96.45%，RSD為1.16%(n=6)。結(jié)果見表1。

2.9 空白干擾試驗 取空白制劑按供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10μL進樣，記錄色譜圖。從圖中可見，黃芪甲苷色譜峰峰形對稱，供試品色譜圖中黃芪甲苷峰能與其他成分很好地分離，陰性對照溶液在黃芪甲苷峰處基本無干擾。結(jié)果見圖1。

表1 黃芪甲苷回收率測定結(jié)果

圖1 黃芪甲苷色譜圖

2.10 供試品含量測定 分別對3批供試品按上述含量測定方法進行測定，分別精密吸取對照品溶液10μl、20μl供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)兩點法對數(shù)方程計算，即得。結(jié)果其黃芪甲苷含量分別為 1.24，1.20，1.19 mg/g。

3 小結(jié)

3.1 本研究以黃芪甲苷含量為指標(biāo)，對供試品溶液的制備方法進行了對比研究。比較直接提取和浸泡過夜提取，結(jié)果浸泡過夜可使提取率提高2～3倍;采用水飽和的正丁醇萃取和氨試液洗滌的方法可以減少雜質(zhì)干擾［3，4］，但過D101型大孔吸附樹脂柱后雜質(zhì)明顯減少，提高了黃芪甲苷的檢出準(zhǔn)確率。

3.2 本制劑成分較為復(fù)雜，黃芪為方中君藥。有文獻報道［5］黃芪中的主要化學(xué)成分為黃芪甲苷。因此，本文采用高效液相色譜法對制劑中黃芪甲苷的含量進行測定，結(jié)果表明方法簡單、重現(xiàn)性好、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于復(fù)方芪丹膠囊的質(zhì)量控制。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部).中國醫(yī)藥科技出版社，2010:283．

［2］李文韜，史國兵，何靜，等.HPLC-ELSD法測定參芪五味咀嚼片黃芪甲苷的含量.山西醫(yī)藥雜志，2010，39(10):902-903．

［3］宋平順，衛(wèi)玉玲，趙建邦，等.HPLC-ELSD測定黃參膠囊中黃芪甲苷的含量.中成藥，2008，30(4):49．

［4］武捷，火紅曄.RP-HPLC法測定消栓口服液中黃芪甲苷的含量.黑龍江醫(yī)藥，2007，20(5):431．

［5］余灝，楊勝華.黃芪皂甙分析方法研究近況.華西藥學(xué)雜志，1993，8(3):163．

Determ ination of the content of astragalosideⅣin Fufangqidan Capsules by HPLC-ELSD

ObjectiveTo determine the content of AstragalosideⅣ in Fufangqidan capsules by HPLC-ELSD.MethodsAgilent Hypersil ODSC18column was used with acetonitrile-water(30:70)solution as themobile phase，the flow rate was1.0 ml/min;drift tube temperaturewas45℃，nitrogen flow rate was1.5L/min.ResultsThe calibration curves were linear within1.832～18.32μg for AstragalosideⅣ.The average recovery was 96.45%with RSD 1.16%respectively.ConclusionThe experimental result shows that the method was simple，sensitive and reliable，and could be used as the quality determination of Astragaloside Ⅳ．

AstragalosideⅣ;HPLC;Quality determination

510405廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院