正交試驗優(yōu)選延胡索微波炮制工藝

容穗華，高妮

（1.廣東省中醫(yī)院藥學部，廣州市 510120；2.廣州市醫(yī)藥職業(yè)學校，廣州市 510430）

正交試驗優(yōu)選延胡索微波炮制工藝

容穗華1＊，高妮2

（1.廣東省中醫(yī)院藥學部，廣州市 510120；2.廣州市醫(yī)藥職業(yè)學校，廣州市 510430）

目的：優(yōu)選醋制延胡索的微波炮制工藝。方法：以原阿片堿、延胡索乙素和總生物堿的含量為評價指標，以醋用量、悶潤時間、微波熱力、炮制時間為考察因素，采用正交試驗優(yōu)選最佳的炮制工藝。結(jié)果：最佳炮制工藝為醋的用量30kg，悶潤2h，微波熱力60%，炮制時間5min。結(jié)論：該方法簡單、可行，易于控制，可作為延胡索的新型炮制方法。

延胡索；醋制；微波炮制；原阿片堿；延胡索乙素；總生物堿；正交設計

延胡索為罌粟科植物延胡索Corydalis yanhusuoW.T.Wang的干燥塊莖，味辛、苦，性溫，歸心、肝、脾經(jīng)，具有活血化瘀、行氣止痛功效[1]。臨床常用生延胡索、醋制延胡索、酒延胡索，生品具活血、行氣、止痛功效；醋制后增強行氣止痛作用；酒制后偏于活血化瘀[2]。2010年版《中國藥典》收載延胡索炮制方法為凈制法、醋炙法和醋煮法[1，3]。延胡索含有生物堿類成分，其中延胡索乙素和原阿片堿等成分具有明顯鎮(zhèn)痛作用。文獻報道表明，延胡索經(jīng)醋制后有效成分的水提液溶出率增加，療效增強[4，5]。筆者首次采用微波炮制法來優(yōu)化醋制延胡索的炮制工藝，試驗以延胡索乙素和原阿片堿以及總生物堿的含量為評價指標，采用正交設計法優(yōu)選微波炮制的最佳工藝，并且與傳統(tǒng)的醋制法進行比較，力求尋找出醋制延胡索的新方法。

1 儀器與試藥

1100 高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；WD800B型格蘭仕微波爐（廣東格蘭仕集團有限公司）；KQ-300VDB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）；pHS-3C精密pH計（上海嘉鵬科技有限公司）；BS210S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

延胡索乙素、原阿片堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號分別為110725-200605、120592-200608）；延胡索藥材采集于浙江東陽，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室黃海波副教授鑒定為真品；乙腈為色譜純，水為純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 傳統(tǒng)醋炙法

取大小均勻延胡索片500g，加入100g米醋攪拌，悶潤2h，待醋液被吸盡后置于炒制容器內(nèi)，用文火加熱炒干，取出晾涼，備用。

2.2 微波炮制工藝研究

選擇對延胡索炮制品質(zhì)量可能有影響的4個因素：悶潤時間（A）、醋的用量（B）、微波熱力（C）、炮制時間（D）作為考察因素，每個因素取3個水平。試驗取延胡索飲片500g，加入適量醋水，悶潤，待輔料被吸盡后按因素水平表（表1）安排試驗。

表1 因素水平Tab1 Factor and levels

試驗以原阿片堿和延胡索乙素以及總生物堿的含量為指標，采用綜合加權(quán)評分法來確定延胡索的最佳炮制工藝。試驗對各指標進行“隸屬度”的計算，以每個試驗所得含量為指標值：指標隸屬度＝（指標值－指標最小值）/（指標最大值－指標最小值）。可見，指標最大值的隸屬度為1，而最小值隸屬度為0，所以0≤指標隸屬度≤1。其具體的權(quán)重為原阿片堿含量占30%，延胡索乙素含量占30%，總生物堿含量占40%。綜合評分＝原阿片堿含量的隸屬度×30%＋延胡索乙素含量的隸屬度×30%+總生物堿含量的隸屬度×40%，滿分為1.00。正交試驗結(jié)果見表2；方差分析結(jié)果見表3。

2.3 原阿片堿和延胡索乙素的含量測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：迪馬 kromasil C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈（A）-0.2%冰乙酸（B，三乙胺調(diào)pH6.0），梯度洗脫（0～50min，B為15%～50%；50～70min，B為50%～80%；70～75min，B為80%）；流速：1.0mL·min-1；柱溫：30℃；檢測波長：280nm。色譜見圖1。

2.3.2 混合對照品溶液的制備 取原阿片堿對照品約3.52mg、延胡索乙素對照品約6.02mg，精密稱定，置于25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得混合對照品溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 取樣品藥粉1.0g（過三號篩），精密稱定，置于錐形瓶中，加入20mL蒸餾水，超聲提取30min，重復提取2次，濾過，合并濾液，減壓濃縮約為10mL，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加氨水5mL，靜置，用乙醚萃取3次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，加甲醇5mL溶解，濾過（0.45μm濾膜），取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 標準曲線的制備 分別精密吸取混合對照品溶液1、2、4、6、8、10μL，注入液相色譜儀中。以對照品進樣量（X）為橫坐標，峰面積積分值（Y）為縱坐標，制備標準曲線，得原阿片堿、延胡索乙素的回歸方程分別為Y＝8.2874X－1.3325（r＝0.9998）、Y＝6.1913X－3.0412（r＝0.9999）。結(jié)果表明，原阿片堿、延胡索乙素的進樣量分別在0.1408～1.4080、0.2408～2.4080μg范圍內(nèi)與各自峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.3.5 含量測定 按上述色譜條件，對延胡索及其炮制品中的原阿片堿和延胡索乙素進行含量測定，結(jié)果見表2。

2.4 總生物堿的含量測定

2.4.1 供試品溶液的制備 取延胡索粉末（過三號篩）10.0g，精密稱定，置于索氏提取器中，加入10%氨試液5mL濕潤，悶潤20min，加入氯仿80mL回流提取至無生物堿反應為止，提取液加入無水硫酸鈉3g，回收氯仿至小體積，轉(zhuǎn)入50mL容量瓶中，加氯仿至刻度，備用。

2.4.2 含量測定 精密吸取“2.4.1”項下供試品溶液5mL，置于干燥燒杯中，低溫水浴加熱蒸干，室溫下放冷，精確加入0.02mol·L-1硫酸滴定液20mL，搖勻，使其充分溶解，插入筆式pH計，用0.02mol·L-1氫氧化鈉滴定液進行滴定，pH 5.1為滴定終點。

2.4.3 計算方法 總生物堿含量以延胡索乙素計算，每1mL 0.02mol·L-1硫酸滴定液相當于7.1084mg延胡索乙素（C21H25NO4）?？偵飰A含量測定結(jié)果見表2。

由表2、表3可知，各因素的影響程度依次為C（微波熱力）＞D（炮制時間）＞B（醋的用量）＞A（悶潤時間），C因素對炮制工藝有顯著性影響（P＜0.05），因素A、B、D均無明顯的差異，最佳的炮制工藝為A2B2C2D3，即每100kg藥材加30kg醋，悶潤2h，60%微波熱力，炮制5min。

2.5 工藝驗證

用傳統(tǒng)醋炙法、上述最佳炮制工藝分別對延胡索進行炮制，并按“2.3”、“2.4”項下方法測定生品、傳統(tǒng)醋炙品和微波炮制品中原阿片堿、延胡索乙素、總生物堿的含量。結(jié)果表明，延胡索經(jīng)傳統(tǒng)醋炙和微波炮制后，原阿片堿和延胡索乙素含量均有不同程度升高，總生物堿含量則略有下降。微波炮制品與傳統(tǒng)醋炙炮制品比較，兩者中原阿片堿和延胡索乙素的含量無顯著的差異，以微波炮制品的含量略高，詳見表4。

表2 正交試驗結(jié)果Tab2 Results of orthogonal tests

表3 方差分析結(jié)果Tab3 Results of variance analysis

表4 延胡索生品及其炮制品的含量測定結(jié)果Tab4 Results of content determination of and processed

3 討論

本文所得延胡索最佳的炮制工藝簡單、可控，所得炮制品外觀完整，焦化、糊化現(xiàn)象較少，符合延胡索炮制品的要求。

與生品比較，微波炮制品中原阿片堿和延胡索乙素的含量大大增加，可能是兩方面的原因：醋制后可使生物堿生成鹽，在水中的溶解度增加，含量升高；延胡索經(jīng)微波炮制后，質(zhì)地變得酥松，有利于藥材有效成分溶出。

試驗比較了醋制延胡索傳統(tǒng)炮制法和微波炮制法。結(jié)果表明，兩者中原阿片堿、延胡索乙素和總生物堿的含量均無明顯的差異，炮制的飲片均達到要求。驗證試驗還表明，微波炮制法工藝穩(wěn)定、可行，因此微波炮制法可作為代替?zhèn)鹘y(tǒng)醋炙法的新方法。

[1] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：130-131.

[2] 龔千鋒主編.中藥炮制學[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2007：189-190.

[3] 竇志英，孫 巍，田麗莉，等.HPLC法比較延胡索生品與不同炮制品中3種有效成分的含量[J].中藥材，2007，30（4）：3991.

[4] 竇志英，孫 巍.不同炮制方法對延胡索中延胡索乙素含量的影響[J].天津中醫(yī)藥大學學報，2006，25（3）：186.

[5] 曹 柳，竇志英，王 萍，等.不同炮制方法對延胡索中有效成分含量的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2009，16（16）：42.

Microwave Processing Technology ofCorydalis yanhusuoby Orthogonal Test

RONG Sui-hua
（Dept.of Pharmacy，Guangdong Provincial Hospital of TCM，Guangzhou 510120，China）
GAO Ni
（Guangzhou Pharmaceutical Higher Vocational School，Guangzhou 510430，China）

OBJECTIVE：To optimize the microwave processing technology ofCorydalis yanhusuo.METHODS：The microwave processing technology ofC.yanhusuowas optimized by orthogonal test using the content of protopine，tetrahydropalmatine and total alkaloids as index and the amount of vinegar，moistening time，microwave heating and process time as factors.RESULTS：Optimized processing technology ofC.yanhusuowas follows：the amount of vinegar of 30kg，moistening times of 2h，microwave heating of 60%，process time of 5min.CONCLUSION：This method is simple，practical and easy to control，could be used as a new processing method ofC.yanhusuo.

Corydalis yanhusuo；Vinegar-processed；Microwave processed；Protopine；Tetrahydropalmatine；Total alkaloids；Orthogonal design

R284.2；R283.1

A

1001-0408（2011）19-1769-03

＊主管藥師。研究方向：中藥分析。電話：020-81887233-32004。E-mail：13688879998@163.com

2010-10-17

2011-02-06）