醒腦靜不同口服固體制劑的溶出度對(duì)比研究Δ

杜守穎，陳雯，徐冰，張倩怡

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京市 100102；2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門(mén)醫(yī)院，北京市 100053）

醒腦靜不同口服固體制劑的溶出度對(duì)比研究Δ

杜守穎1＊，陳雯2，徐冰1，張倩怡1

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京市 100102；2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門(mén)醫(yī)院，北京市 100053）

目的：對(duì)醒腦靜不同口服固體制劑進(jìn)行溶出度考察，對(duì)比其有效成分的體外溶出特點(diǎn)，為優(yōu)選醒腦靜口服劑型提供依據(jù)。方法：采用小杯法，轉(zhuǎn)速100r·min-1，以蒸餾水為溶出介質(zhì)。采用高效液相色譜法測(cè)定不同口服固體制劑中有效成分梔子苷和龍腦的溶出度，計(jì)算累積溶出度，用相似因子進(jìn)行釋放曲線(xiàn)的相似性比較，對(duì)溶出曲線(xiàn)進(jìn)行多種數(shù)學(xué)模型擬合。結(jié)果：不同口服固體制劑中，除水溶性包衣片和膠囊中梔子苷溶出曲線(xiàn)有一定相似性外，各制劑中梔子苷溶出曲線(xiàn)、龍腦溶出曲線(xiàn)均有較大差異，各劑型有效成分溶出曲線(xiàn)基本符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程。結(jié)論：醒腦靜不同口服固體制劑中有效成分溶出度15min之內(nèi)均可達(dá)到90%以上；梔子苷在膠囊中溶出最快，龍腦在水溶性包衣片中溶出最快。

醒腦靜；口服固體制劑；梔子苷；龍腦；溶出度；相似因子；高效液相色譜法

醒腦靜注射液由麝香、冰片、梔子、郁金提取精制而成，具有醒神開(kāi)竅、清熱解毒、涼血止痙的作用，常用于腦中風(fēng)急救期，作用迅速、明確[1]。但中藥注射劑存在使用不便、醫(yī)療費(fèi)用高、不適合長(zhǎng)期給藥等問(wèn)題。另外，醒腦靜注射液主要提取了方中藥物的揮發(fā)性成分，而忽視了對(duì)治療腦中風(fēng)同樣有效的非揮發(fā)性成分，藥效沒(méi)有得到充分發(fā)揮?；谥嗅t(yī)傳統(tǒng)理論，本課題組進(jìn)行處方分析后確定有效成分，對(duì)其進(jìn)行了系統(tǒng)的工藝研究，既提取了揮發(fā)性成分，又保存非揮發(fā)性成分，考察了將醒腦靜處方制成口服制劑的可行性，與其注射劑形成互補(bǔ)，為醒腦靜復(fù)方的系列化用藥打下基礎(chǔ)。

與注射劑不同，口服制劑中有效成分體外溶出的速度和程度直接影響其在體內(nèi)的吸收和利用，是評(píng)價(jià)口服固體藥物內(nèi)在質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)[2，3]。本研究以梔子苷和龍腦為指標(biāo)，對(duì)醒腦靜不同口服固體制劑進(jìn)行溶出度考察，為優(yōu)選醒腦靜口服劑型提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀、Agilent化學(xué)工作站、Agilent 6890N型氣相色譜儀、Agilent化學(xué)工作站（美國(guó)惠普公司）；RC-8DS溶出度測(cè)試儀（天津市光學(xué)儀器廠(chǎng)）；AE240型電子分析天平（日本島津公司）。

龍腦、梔子苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)分別為110881-200706、110749-200613）；醒腦靜片、滴丸、膠囊均由北京中醫(yī)藥大學(xué)制藥系自制；水為純凈水，十八烷、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 梔子苷的含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件[4]色譜柱：DiamonsilTMC18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（14∶86）；檢測(cè)波長(zhǎng)：238nm；流速：1.0mL·min-1；柱溫：室溫。色譜見(jiàn)圖1。

2.1.2 線(xiàn)性關(guān)系考察 以甲醇配制濃度為0.114mg·mL-1的梔子苷對(duì)照品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液2、4、6、8、10μL，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積。以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，梔子苷的進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程為Y＝1631X+3.995（r＝0.9999）。結(jié)果表明，梔子苷進(jìn)樣量在0.228～1.14μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線(xiàn)性關(guān)系。

圖1 高效液相色譜圖A.梔子苷對(duì)照品；B.樣品Fig1 HPLC chromatogramsA.geniposide control；B.sample

2.1.3 溶出樣品處理方法 取溶出水液，過(guò)0.45μm微孔濾膜，精密吸取濾液10μL，進(jìn)樣測(cè)定。

2.2 龍腦的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：db-wax型氣相毛細(xì)管（30m×530μm，1.00μm）；檢測(cè)器：FID；載氣：高純氮?dú)?；載氣流速：6mL·min-1；分流比：10∶1；檢測(cè)器溫度：190℃；柱溫：130℃。氣相色譜見(jiàn)圖2。

圖2 氣相色譜圖A.龍腦對(duì)照品；B.樣品；1.龍腦；2.十八烷Fig2 GC chromatogramsA.borneol control；B.sample；1.borneol；2.octadecane

2.2.2 線(xiàn)性關(guān)系考察 精密稱(chēng)取5.5mg龍腦對(duì)照品，置于25mL量瓶中，加濃度為258μg·mL-1的十八烷乙酸乙酯內(nèi)標(biāo)液定容，制成對(duì)照品貯備液。以?xún)?nèi)標(biāo)液不同程度稀釋貯備液，得到一系列濃度的龍腦對(duì)照品溶液。吸取上述溶液1μL進(jìn)樣，以龍腦檢測(cè)濃度（X）為橫坐標(biāo)，龍腦和內(nèi)標(biāo)峰面積積分值的比值（Y）為縱坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程為Y＝3.4980X+0.0005868（r＝ 0.9999）。結(jié)果表明，龍腦檢測(cè)濃度在0.0044～0.2200μg·mL-1范圍內(nèi)與其內(nèi)標(biāo)峰面積比值呈良好線(xiàn)性關(guān)系。

2.2.3 溶出樣品處理方法 取溶出水液，過(guò)0.45μm微孔濾膜，精密吸取濾液0.5mL，置于1.5mL離心管中，加入0.2mL十八烷乙酸乙酯內(nèi)標(biāo)液，渦旋混合3min，4℃離心10min，轉(zhuǎn)速為4000r·min-1，吸取上層乙酸乙酯液1μL，進(jìn)樣測(cè)定。

2.3 溶出度測(cè)定

由于醒腦靜處方每日劑量低，其口服制劑規(guī)格較小，考慮到含量測(cè)定方法的線(xiàn)性范圍和檢測(cè)靈敏度的要求，采用2005年版《中國(guó)藥典》（二部）附錄ⅩC小杯法[5]測(cè)定，減少溶出介質(zhì)的體積以增加藥物的濃度。分別取醒腦靜脂溶性包衣片、水溶性包衣片、滴丸（每杯15粒）和膠囊，以150mL（符合漏槽條件）脫氣處理后的蒸餾水為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速100r·min-1，溫度為（37±0.5）℃，依法操作。分別在不同時(shí)間點(diǎn)取樣1.8mL，0.45μm濾膜過(guò)濾，每次取樣后補(bǔ)加同體積同溫度的溶出介質(zhì)，以梔子苷和龍腦為指標(biāo)，考察4種醒腦靜制劑的溶出情況。醒腦靜不同口服固體制劑有效成分累積溶出度見(jiàn)表1；醒腦靜不同口服固體制劑中梔子苷、龍腦溶出曲線(xiàn)分別見(jiàn)圖3、圖4。

由溶出度測(cè)定結(jié)果可知，醒腦靜不同口服固體制劑中有效成分溶出度15min之內(nèi)均可達(dá)到90%以上。梔子苷水溶性較強(qiáng)，在水溶性包衣片、膠囊和滴丸中溶出迅速、完全，在脂溶性包衣片中溶出度稍低。龍腦在脂溶性包衣片、水溶性包衣片和滴丸中溶出完全，在膠囊中溶出度稍低，溶出較慢。由溶出曲線(xiàn)可看出，由于脂溶性包衣片的包衣材料在水中不會(huì)快速溶解，整體推遲了梔子苷和龍腦溶出的時(shí)間，但當(dāng)包衣膜破裂后，片劑吸水崩解，有效成分迅速溶出，且溶出曲線(xiàn)形狀與水溶性包衣片最相近。

表1 醒腦靜不同口服固體制劑有效成分累積溶出度Tab1 Accumulative dissolution of active components of different oral solid preparations of Xingnaojing

圖3 醒腦靜不同口服固體制劑中梔子苷溶出曲線(xiàn)Fig3 Dissolution curve of geniposide of different oral solid preparations of Xingnaojing

圖4 醒腦靜不同口服固體制劑中龍腦溶出曲線(xiàn)Fig4 Dissolution curve of borneol of different oral solid preparations of Xingnaojing

2.4 各指標(biāo)成分溶出曲線(xiàn)相似因子（f2）計(jì)算

為了更加準(zhǔn)確地說(shuō)明4種醒腦靜口服固體制劑中梔子苷和龍腦的溶出情況，采用f2法對(duì)溶出曲線(xiàn)進(jìn)行分析[6]。f2的數(shù)學(xué)表達(dá)式為：

式中，Rt為t時(shí)間參比制劑累積溶出百分率；Tt為t時(shí)間受試制劑累積溶出百分率；n為時(shí)間點(diǎn)數(shù)目。f2值愈接近100，相似程度就愈高；愈接近0，相似度愈低。一般認(rèn)為，當(dāng)f2值在50～100時(shí)，認(rèn)為兩制劑的溶出過(guò)程無(wú)顯著性差異。不同口服固體制劑中龍腦、梔子苷的f2計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同口服固體制劑中龍腦、梔子苷的f2計(jì)算結(jié)果Tab2 f2value of dissolution curve of borneol and geniposide in different oral solid preparations

通過(guò)預(yù)試驗(yàn)可知，不同制劑有效成分溶出度存在差異。為了更好地描述溶出過(guò)程，溶出度測(cè)定時(shí)4種制劑的取樣時(shí)間點(diǎn)并不完全一致，在進(jìn)行不同制劑比較時(shí)，均選取共同時(shí)間點(diǎn)計(jì)算f2。結(jié)果表明，除水溶性包衣片和膠囊中梔子苷溶出曲線(xiàn)有一定相似性外，各制劑中梔子苷溶出曲線(xiàn)、龍腦溶出曲線(xiàn)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2.5 溶出曲線(xiàn)數(shù)學(xué)方程擬合

制劑的溶出曲線(xiàn)常采用數(shù)學(xué)模型加以描述，本試驗(yàn)運(yùn)用SAS統(tǒng)計(jì)軟件，分別以零級(jí)動(dòng)力學(xué)方程、一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程和Higuchi方程對(duì)各制劑中不同有效成分的溶出曲線(xiàn)進(jìn)行擬合。結(jié)果根據(jù)信息量準(zhǔn)則（AIC）[7]，數(shù)據(jù)擬合既好又盡可能節(jié)省參數(shù)數(shù)目的模型才是可取模型，即當(dāng)有若干個(gè)模型可選時(shí)，AIC為最小的模型是可取模型；若可選的若干模型的獨(dú)立未知參數(shù)均相等時(shí)，殘差平方和（RSS）小的模型為可取模型。通過(guò)AIC、RSS和相關(guān)系數(shù)（r）的計(jì)算可知，各劑型的有效成分溶出曲線(xiàn)基本符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，可用其描述溶出過(guò)程，結(jié)果見(jiàn)表3。

2.6 溶出參數(shù)的計(jì)算

根據(jù)一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程擬合結(jié)果，計(jì)算各制劑中梔子苷和龍腦的釋放速率常數(shù)（K）。結(jié)果，不同口服固體制劑有效成分溶出速度不同，龍腦在水溶性包衣片中溶出最快，梔子苷在膠囊中溶出最快，詳見(jiàn)表4。

3 討論

由f2計(jì)算結(jié)果可知，除水溶性包衣片和膠囊中梔子苷的溶出過(guò)程近似外，其余兩兩劑型間均有較大差異。膠囊中梔子苷溶出速度較快，這是因?yàn)闂d子苷水溶性極佳，在膠囊殼破裂后提取物粉末快速溶解所致；水溶性片劑衣膜在水中快速溶解，片劑迅速崩解，梔子苷溶出也較快；梔子苷在滴丸的水溶性混合PEG基質(zhì)中呈固體分散狀態(tài)，但因?yàn)榈瓮铦u漸溶化，所以較膠囊和水溶性包衣片中梔子苷溶出稍緩；由于脂溶性包衣片劑的包衣材料在水中并不會(huì)快速溶解，所以整體推遲了梔子苷溶出的時(shí)間，但當(dāng)包衣膜破裂后，由于片劑中PVPP和黏合劑PVP K30的應(yīng)用，片劑迅速吸水崩解，梔子苷迅速溶出。

表3 溶出曲線(xiàn)數(shù)學(xué)模型擬合結(jié)果Tab3 Model fitting results of accumulation dissolution curve

表4 不同口服固體制劑中梔子苷和龍腦K值計(jì)算結(jié)果Tab4 Rate constant（K）of geniposide and borneol in different oral solid preparations

從龍腦溶出角度來(lái)看，2種片劑和滴丸最終的溶出度很接近，膠囊較前三者稍低。水溶性包衣片中龍腦溶出最快，滴丸其次；脂溶性包衣片中由于包衣膜的原因，龍腦溶出時(shí)間延遲，但衣膜破裂后，龍腦快速崩解溶出。

綜上所述，除水溶性包衣片和膠囊中梔子苷溶出曲線(xiàn)較相似外，其余各劑型中梔子苷和龍腦的溶出均有差異。水溶性包衣片中龍腦和梔子苷的溶出較快，溶出度高；滴丸中各成分溶出也較快，但滴丸中PEG混合基質(zhì)用量與片劑和膠囊相比較大，為藥物粉末的3倍，服用量較大；膠囊中龍腦溶出度最低；脂溶性包衣片中各成分因包衣膜的原因溶出時(shí)間整體延后，但是一旦衣膜溶解破裂，片劑迅速崩解，有效成分快速溶出。最終劑型的選擇尚需考慮水溶和脂溶性2種包衣材料對(duì)片芯的適應(yīng)性、包衣溫度、揮發(fā)性成分的損失和穩(wěn)定性等。

[1] 過(guò)海東，郝春梅，邱英茹.醒腦靜注射液臨床應(yīng)用概況[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2002，9（1）：60.

[2] 蔣 曄，田書(shū)霞.中藥溶出度的研究進(jìn)展[J].中成藥，2006，28（3）：415.

[3] 楊 青，陳 英.心腦康膠囊中葛根素和二苯乙烯苷的溶出度測(cè)定[J].中國(guó)藥房，2009，20（30）：2369.

[4] 張倩怡，杜守穎.梔子提取物中梔子苷油水分配系數(shù)及大鼠腸吸收動(dòng)力學(xué)研究[J].中國(guó)中藥雜志，2009，34（14）：1840.

[5] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄73.

[6] FDA.Guidance for industry：dissolution testing of immediate release solid oral dosage forms[S].1997.

[7] 林亞平，董 蕓.藥物釋放數(shù)學(xué)模型的評(píng)價(jià)及選擇[J].數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志，1994，7（4）：308.

Comparative Study of the Dissolution of Different Oral Solid Preparation of Xingnaojing

DU Shou-ying，XU Bing，ZHANG Qian-yi
（School of Traditional Chinese Medicine，Beijing University of Traditional Chinese Medicine，Beijing 100102，China）
CHEN Wen
（Guang’an Men Hospital of China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100053，China）

OBJECTIVE：To investigate the dissolution of different oral solid preparation of Xingnaojing and to compare the dissolution characteristics of active components of different oral solid preparation of Xingnaojing in order to provide reference for dosage form selection of Xingnaojing.METHODS：The dissolution of Xingnaojing was determined by small cup method at rotating speed of 100r·min-1using distilled water as dissolution medium.The dissolution of gardenin and borneol in Xingnaojing were determined by HPLC method.The accumulative dissolution percentages were calculated，and the resemblance of release curves were compared by similarity factors.RESULTS：The dissolution curves of different oral solid preparations were similar besides Xingnaojing water-soluble coating tablets and Xingnaojing capsules.The dissolution curves of gardenin and borneol were different significantly among different oral solid preparations.The dissolution curves of active components were up to first order kinetic equation.CONCLUSION：The accumulative dissolution of active components can be more than 90%in 15min.The dissolution of gardenin in capsule was the fastest as borneol in water-soluble coating tablet.

Xingnaojing；Oral solid preparation；Gardeninin；Borneol；Dissolution；Similarity factors；HPLC

R283.6；R944.2

A

1001-0408（2011）19-1761-04

Δ國(guó)家科技支撐計(jì)劃課題（2006BAI06A17）；國(guó)家科技重大專(zhuān)項(xiàng)課題（2009ZX09502-008）

＊教授，博士研究生導(dǎo)師，博士。研究方向：中藥新劑型與中藥制劑關(guān)鍵技術(shù)。電話(huà)：010-84738615。E-mail：dushouying@263.com

2010-06-23

2010-09-02）