生物樣本中的甲基苯丙胺和氯胺酮含量的檢測(cè)研究及其體內(nèi)分布初探

趙 蒙 劉 勇 呂俊崗 王朝虹

(最高人民檢察院檢察技術(shù)信息研究中心，北京 100040)

隨著毒品濫用形勢(shì)的日益嚴(yán)重，越來越多的新型毒品開始在社會(huì)上出現(xiàn)和濫用，其中甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)及氯胺酮(ketamine)就是近10年來最為活躍的兩種新型毒品[1,2]，在20世紀(jì)90年代開始廣泛濫用，導(dǎo)致不少濫用過量中毒致死的案件頻繁發(fā)生，成為世界各國所關(guān)注的犯罪問題。甲基苯丙胺和氯胺酮在人體內(nèi)的定量測(cè)定方法和在死后人體內(nèi)的分布在司法鑒定、毒物學(xué)行業(yè)有著重要的作用。

目前國內(nèi)關(guān)于甲基苯丙胺和氯胺酮的檢驗(yàn)方法已有報(bào)道，如文獻(xiàn)中氣相色譜法檢測(cè)飲料中的鹽酸氯胺酮[3]和微波萃取-氣相色譜法測(cè)定血液中的甲基苯丙胺[4]，用液-液萃取、微波萃取技術(shù)和氣相色譜法分別對(duì)甲基苯丙胺、氯胺酮進(jìn)行測(cè)定，但對(duì)中毒者組織中的甲基苯丙胺和氯胺酮的測(cè)定方法還不多見。筆者采用固相萃取技術(shù)和氣相色譜法對(duì)中毒者組織中的甲基苯丙胺和氯胺酮進(jìn)行了同時(shí)測(cè)定，建立了一種快速的、可用于司法辦案的檢驗(yàn)方法，并對(duì)甲基苯丙胺和氯胺酮在人體組織中的分布進(jìn)行了初步的探討。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀： Agilent 7980A型，配NPD檢測(cè)器，7693自動(dòng)進(jìn)樣器，分流不分流進(jìn)樣口，美國安捷倫公司；

甲醇：HPLC級(jí)，美國Fisher Scientific公司；

甲基苯丙胺、氯胺酮標(biāo)準(zhǔn)樣品：含量99.8%以上，公安部物證鑒定中心。

1.2 實(shí)驗(yàn)樣本選擇

為了完整研究甲基苯丙胺和氯胺酮在人中毒致死后體內(nèi)的含量測(cè)定和體內(nèi)分布情況，選擇了實(shí)際案件中所能提供的血、尿、肝、腦及胃內(nèi)容等5種檢材。

1.3 檢材前處理

平行取血、尿、胃內(nèi)容2份各1 mL；肝2份，分別為1.15、1.16 g；腦2份，分別為1.147、1.143 g。

血液樣本及胃內(nèi)容用3 mL 2%甲酸水溶液稀釋，30 μL濃磷酸，渦旋震蕩5 min； 以7 000 r/min離心10 min，取上清液。

尿液：直接進(jìn)行固相萃取。

肝腦：勻漿，用3 mL 2%甲酸水溶液，30 μL濃磷酸，渦旋震蕩5 min，超聲30 min，以7 000 r/min離心10 min，取上清液。

按上述方法同時(shí)進(jìn)行空白血加標(biāo)試驗(yàn)和基質(zhì)加標(biāo)試驗(yàn)，加標(biāo)樣濃度分別為10、20、100、200、400 μg/mL。

1.4 固相萃取提取方法

活化、平衡：3 mL甲醇、3 mL水；上樣：稀釋、離心后樣品上清液；淋洗：3 mL 2%甲酸水溶液；洗脫：3 mL 95%甲醇-5%氨水溶液。洗脫液以40℃氮?dú)獯抵两?，?00 μL甲醇定容，以1 500 r/min離心3 min。上清液轉(zhuǎn)移至2 mL自動(dòng)進(jìn)樣瓶的內(nèi)襯管中，GC/NPD檢驗(yàn)。

1.5 儀器分析參數(shù)

HP-5石英柱(30 m×0.32 mm， 0.25 μm)；半自動(dòng)固相萃取儀：Waters(20位)；固相萃取柱：Waters Oasis MCX,30 μm, 3 mL/60 mg；載氣：高純氮?dú)?，純度大?9.999 %；進(jìn)樣口溫度：250℃；流速：1.0 mL/min； 分流比15∶1；進(jìn)樣量：1 μL；升溫程序：初始溫度80℃，保持2 min，以10℃/min升至270℃；氮磷檢測(cè)器溫度為300℃。

2 案件說明

某中年男性，在審訊時(shí)吞食一包白色粉末后死亡，事后對(duì)其剩余白色粉末進(jìn)行定性分析，結(jié)論為甲基苯丙胺和氯胺酮。送檢檢材有血、尿、肝、腦及胃內(nèi)容，對(duì)送檢檢材進(jìn)行甲基苯丙胺和氯胺酮含量測(cè)定。

3 結(jié)果與討論

3.1 血液樣品中甲基苯丙胺和氯胺酮色譜圖

將血液樣品經(jīng)過氣相色譜(GC/NPD)分析，實(shí)驗(yàn)表明，被測(cè)物甲基苯丙胺及氯胺酮與檢材中雜質(zhì)互不干擾，線性范圍為0.05～400 μg/mL，相關(guān)系數(shù)大于0.999，兩種化合物色譜圖見圖1。

圖1 血中的甲基苯丙胺和氯胺酮的色譜圖

3.2 精密度試驗(yàn)

對(duì)濃度分別為200 μg/mL的甲基苯丙胺和氯胺酮的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行8次平行測(cè)定，結(jié)果列于表1。由表1可見，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于7%，表明方法具有較好的精密度。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果

3.3 空白血加標(biāo)回收試驗(yàn)

平行取15份空白血1 mL,分別加入甲基苯丙胺、氯胺酮，濃度分別為10、20、100、200、400 μg/mL(每個(gè)濃度2份)。同時(shí)做各濃度的基質(zhì)加標(biāo)回收試驗(yàn)?；厥章?[空白加標(biāo)峰面積/基質(zhì)加標(biāo)峰面積]×100，方法回收率在88%～97%之間，每級(jí)別濃度平行做兩組，結(jié)果見表2。

3.4 定量結(jié)果

用外標(biāo)工作曲線法對(duì)5種檢材進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見表3。測(cè)定結(jié)果表明，胃內(nèi)容含量最高，甲基苯丙胺含量平均值為200.52 μg/mL，氯胺酮平均值為656.16 μg/mL；其次分別為尿液，含量為90.80、37.77 μg/mL；肝19.34、25.59 μg/mL;血液8.44、14.59 μg/mL,惱13.42、10.67 μg/mL。以上結(jié)果表明，對(duì)于人體中毒者進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，應(yīng)首先對(duì)胃內(nèi)容和尿液進(jìn)行提取。

表2 加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

表3 組織中甲基苯丙胺和氯胺酮含量測(cè)定結(jié)果

3.5 體內(nèi)分布情況

根據(jù)以上5種檢材含量的測(cè)定結(jié)果可知，通過消化道方式中毒的個(gè)體，是從胃部開始通過血液循環(huán)達(dá)到其它組織中的，胃內(nèi)容中由于明顯存在殘留毒品，所以含量最高；而在其它組織中，尿、肝由于是代謝組織，含量次高；血液作為運(yùn)輸體，也具有一定的含量；腦部作為接受體，應(yīng)該是含量最低的組織，但甲基苯丙胺在血液中的含量小于在腦中的含量，說明其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中有較高的分布情況，應(yīng)該引起足夠的重視。

4 結(jié)論

用氣相色譜配氮磷檢測(cè)器對(duì)中毒者5個(gè)組織中的甲基苯丙胺及氯胺酮含量進(jìn)行了同時(shí)測(cè)定，建立了一種快速、準(zhǔn)確的定量方法，該法具有提取回收率高、步驟簡單、處理后樣本雜質(zhì)干擾少、分析速度快等優(yōu)點(diǎn)。通過實(shí)驗(yàn)考察了人體組織中甲基苯丙胺和氯胺酮的分布情況，不僅初步研究了兩種毒品在人體組織中的分布規(guī)律，而且也為相關(guān)司法案件檢材的取舍提供了科學(xué)的依據(jù)。

[1] 張高勤，王玫，張大明,等.甲基苯丙胺中毒死亡大白兔體內(nèi)分布研究[J].中國藥物依賴性, 2010，19(1):29-32.

[2] 賈娟，曹潔，王玉瑾,等.氯胺酮在急性中毒大白鼠體內(nèi)的死后再分布研究[J].中國法醫(yī)學(xué)，2009，28(3):175-177.

[3] 賀江南，劉冬嫻.氣相色譜法檢測(cè)飲料中的鹽酸氯胺酮[J].長春師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2007(4)：55-58.

[4] 孫洪鋒，谷學(xué)新，王繼芬，等.微波萃取-氣相色譜法測(cè)定血液中的甲基苯丙胺[J].色譜，2007(4):12-15.