HPLC 法測定南五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的含量

譚曉虹，田嘉銘，王治寶，楊曉媛，馬 寧

（1．河北北方學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，河北 張家口075000；2．河北北方學(xué)院藥學(xué)系2006級，河北 張家口075000）

HPLC 法測定南五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的含量

譚曉虹1，田嘉銘1，王治寶1，楊曉媛2，馬 寧2

（1．河北北方學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，河北 張家口075000；2．河北北方學(xué)院藥學(xué)系2006級，河北 張家口075000）

目的 建立快速、準(zhǔn)確的測定南五味子有效成分五味子醇甲和五味子酯甲含量的方法．方法 五味子醇甲和五味子酯甲的含量測定采用高效液相色譜法 （HPLC），色譜條件：Hypersil BDSC8柱 （4．6mm×150 mm，5μm），檢測波長254nm，柱溫30℃，流速1．0mL·min－1，流動相：甲醇－0．1%醋酸 （65∶35），進(jìn)樣量20μL．結(jié)果 HPLC測定五味子醇甲在4．950～15．43ng·μL－1（r＝0．9996）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，五味子酯甲在11．38～174．6ng·μL－1（r＝0．9999）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；南五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的平均回收率分別為98．79%、99．23%，回收率的RSD分別為1．82%、2．20% （n＝5）．結(jié)論 該方法精密度、重復(fù)性和分離效果均良好，分析快速準(zhǔn)確，可作為南五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的質(zhì)控方法．

南五味子；五味子醇甲；五味子酯甲；HPLC

南五味子為木蘭科植物華中五味子 （Schisandra sphenanthera Rehd．Et Wils．）的干燥成熟果實(shí)，具有收斂固澀、益氣生津、補(bǔ)腎寧心之功效，中國藥典2005年版一部將其與五味子 （北五味子）區(qū)別對待，并首次以南五味子為名稱收載［1］．南五味子中主要含有木脂素類及揮發(fā)油成分．南五味子木脂素類主要包括五味子甲素、五味子乙素、五味子酯甲和五味子醇甲等［2］，南五味子的有效成分具保肝、鎮(zhèn)靜催眠、抗氧化和抗衰老、抗疲勞及免疫促進(jìn)等作用［3］，對心血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)疾病的治療均有良好的效果．

對南五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的含量進(jìn)行測定，為南五味子藥材的質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)．實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本方法快速準(zhǔn)確、精密度、重復(fù)性均良好，可為南五味子質(zhì)量控制的方法，并為臨床合理用藥提供科學(xué)參考．

1 儀器和材料

1．1 儀 器

美國Agilent1100高效液相色譜儀及化學(xué)工作站；756MC型紫外可見分光光度計(jì) （上海精密科學(xué)儀器廠）；TG－328A型分析天平 （上海天平儀器廠）；JN－5200DT型超聲波清洗儀 （寧波江南儀器廠）；DHG－9070AS型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 （寧波江南儀器廠）

1．2 材料

南五味子藥材購于張家口市藥材公司，經(jīng)鑒定為四川產(chǎn)南五味子，實(shí)驗(yàn)前將南五味子用蒸餾水快速漂洗后置70℃的干燥箱中干燥，然后研磨成粉末狀，置干燥器中備用．

1．3 試劑

五味子醇甲標(biāo)準(zhǔn)品 批號：110857－200709；五味子酯甲標(biāo)準(zhǔn)品 批號：111529－200503（購于中國生物制品檢定所）；甲醇 （色譜純）；甲醇 （分析純）；水 （三重蒸餾水），所用其它試劑均為分析純．

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：Hypersil BDSC8柱 （4．6mm×150mm，5μm）；柱溫：30℃；流動相：甲醇－0．1%醋酸（65∶35）；流速：1．0mL·min－1；檢測波長：254nm；進(jìn)樣量：20μL．

2．2 對照品溶液的制備

精密稱取五味子醇甲標(biāo)準(zhǔn)品0．009 9g，五味子酯甲標(biāo)準(zhǔn)品0．009 9g，分別用甲醇溶解并定容至10 mL，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)儲備液．

2．3 供試品溶液的制備

準(zhǔn)確稱取同一批號的南五味子藥材粉末1g各5份，分別置于50mL比色管中，用甲醇定容至刻度．超聲提取30min，冷卻后，常壓過濾，在濾渣中加入甲醇50mL，再進(jìn)行超聲提取30min［4］，靜置冷卻，常壓過濾，合并兩次濾液定容至50mL，濾液經(jīng)0．45μm微孔濾膜過濾，所得濾液作為供試品溶液．

2．4 線性關(guān)系考察

用甲醇將標(biāo)準(zhǔn)儲備液稀釋成下列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液：五味子醇甲的質(zhì)量濃度為4．950、7．425、9．900、12．380和15．430ng·μL－1，五味子酯甲質(zhì)量濃度為11．38、54．72、101．30、139．30和174．60ng·μL－1．按照2．1色譜條件，分別對上述標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)樣分析測定，以含量 （C）為橫坐標(biāo)，峰面積 （A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸計(jì)算，得到了五味子醇甲標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A1＝40．33C1－5．732，r＝0．9996；結(jié)果表明五味子醇甲含量在4．950－15．430ng·μL－1范圍呈現(xiàn)良好線性關(guān)系；五味子酯甲的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A2＝24．11C2＋32．93，r＝0．9999，結(jié)果表明五味子酯甲含量在11．38－174．60ng·μL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好．

2．5 精密度試驗(yàn)

精密吸取五味子醇甲、五味子酯甲標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按照 “2．1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄色譜峰面積，計(jì)算五味子醇甲與五味子酯甲的含量，并用RSD表示．五味子醇甲的RSD為0．389% （n＝5），五味子酯甲的RSD為1．07% （n＝5）．

2．6 重復(fù)性考察

取同一批藥材粉末，按供試品溶液的制備方法平行制備5份，依法測定，結(jié)果南五味子中五味子醇甲、五味子酯甲質(zhì)量濃度的RSD分別為0．459%和0．659%．

2．7 穩(wěn)定性考察

取同一供試品溶液，分別于1、2、4、8、12、24h測定峰面積，結(jié)果表明：南五味子中五味子醇甲和五味子酯甲均在24h內(nèi)穩(wěn)定．南五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的RSD為0．730%和1．25%．

2．8 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收法，精密稱取已知含量的南五味子藥材粉末，分別定量加入五味子醇甲對照品10．0ng·μL－1，五味子酯甲對照品156ng·μL－1，按照供試品溶液的制備方法操作，在上述色譜條件下進(jìn)行測定，結(jié)果表明南五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的平均回收率分別為98．79%、99．23%，RSD分別為1．82%、2．20% （n＝5）．

2．9 樣品測定

精密吸取上述供試品溶液，在2．1項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣20μL進(jìn)行測定，記錄色譜峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求出樣品中五味子醇甲和五味子酯甲的含量．結(jié)果見表1，色譜圖見圖1、2．

表1 南五味子中五味子醇甲、五味子酯甲的含量 （，mg·g－1）（n＝5）

表1 南五味子中五味子醇甲、五味子酯甲的含量 （，mg·g－1）（n＝5）

編號 五味子醇甲 五味子酯甲1 0．5046 7．826 2 0．5055 7．862 3 0．5037 7．804 4 0．5060 7．871 5 0．5021 7．776 ／mg·g－1 0．5044±0．0015 7．828±0．0397 RSD% 0．307 0．507

圖1 五味子醇甲、酯甲標(biāo)準(zhǔn)品HPLC圖

圖2 南五味子樣品HPLC圖

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)采用超聲波提取法用甲醇提取南五味子的有效成分，提取工藝簡單，提取效率高，試劑用量少，操作簡便．利用HPLC法測定南五味子中的五味子醇甲和五味子酯甲的含量，以甲醇－0．1%醋酸（65∶35）作為流動相，檢測波長選擇254nm，在此條件下、五味子醇甲和五味子酯甲的峰形尖銳，保留時間短，分離度高．該方法簡便快速、精密度高且重復(fù)性及穩(wěn)定性均良好，回收率符合要求可用于測定南五味子藥材中五味子醇甲和五味子酯甲的含量．

五味子是臨床常用中藥，但傳統(tǒng)上認(rèn)為北五味子的質(zhì)量優(yōu)于南五味子，臨床多以北五味子用藥．現(xiàn)代研究表明五味子的主要成分木脂素具有鎮(zhèn)靜催眠等藥理作用，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，南五味子中同樣含有木脂素的主要成分五味子醇甲和五味子酯甲．這與文獻(xiàn)報道的南五味子同樣具有較強(qiáng)的藥理學(xué)活性相一致［5－6］．近年來研究表明南五味子是一種具有開發(fā)潛能的藥用植物，其在傳統(tǒng)中醫(yī)應(yīng)用中的功效逐漸受到人們的重視．同時對南五味子有效成分及其藥理作用的進(jìn)一步研究將為在親緣關(guān)系較近的植物中尋找新的藥源提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并為充分開發(fā)利用植物藥物資源奠定基礎(chǔ)．

［1］ 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典一部 ［M］．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005．169

［2］ 金鑫，辛愛學(xué)．南五味子提取工藝研究 ［J］．中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2009，3（6）：149－151

［３］ 程敏．南五味子化學(xué)成分、藥理作用及炮制方法研究進(jìn)展［Ｊ］．陜西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，（６）：26－25

［４］ 鄧翀，顏永剛，梁婷，等．多指標(biāo)綜合評價南五味子木脂素提取工藝［Ｊ］．中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（９）：４－６

［５］ 徐麗華，黃芳，孫萌，等．南北五味子鎮(zhèn)靜催眠活性部位共有成分的分析［Ｊ］．分析化學(xué)研究報告，2009，37 （６）：828－834

［６］ 王雯雯，仰榴青，李永金，等．南、北五味子提取物對小鼠鎮(zhèn)靜、催眠作用的影響［Ｊ］．江蘇大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2008，18 （２）：122－126

Determination of Schisandrin and Schisantherin A in Schisandra sphenanthera Rehd．et Wils．by HPLC

TAN Xiao－h(huán)ong1，TIAN Jia－ming1，WANG Zhi－bao1，et al
（Department of Pharmacy，Hebei North University，Zhangjiakou 075000，Hebei，China）

Objective To investigate a rapid and sensitive method for determination of schisandrin and schisantherin A in Schisandra sphenanthera Rehd．et Wils．Methods To analyse Schisandrin and Schisantherin A in Schisandra sphenanthera Rehd．et Wils．by high performance liquid chromatography（HPLC）on a Hypersil BDSC8column （4．6mm×150mm，5μm），detection wavelength was set at 254 nm and the column temperature was 30℃，The mobile phase was methanol－0．1%acetic acid（65∶35），with the flow rate of 1．0mL·min－1．Results Schisandrin showed a good linear relationship at range of 4．950～15．43ng·μL－1（r＝0．9996），and Schisantherin A showed a good linear relationship at range of 11．38～174．6ng·μL－1（r＝0．9999）．The average recovery rate schisandrin and schisantherin A in Schisandra sphenanthera Rehd．et Wils．were 98．79%and 99．23%，and RSD of the method were 1．82%and 2．20%respectively；Conclusion The method is proved to be accurate，rapid，and sensitive．It can be used for quality control of schisandrin and schisantherin A in Schisandra sphenanthera Rehd．et Wils．

Schisandra sphenanthera Rehd．et Wils．；schisandrin；schisantherin A；HPLC

R 962

A

1673－1492 （2011）06－0070－03

來稿日期：2011－08－31

譚曉虹（1969－），女，河北張家口人，醫(yī)學(xué)碩士，副教授，主要研究方向：藥物分析化學(xué)．

李薊龍 英文編輯：謝利鋒］