甲睪酮凝膠劑的制備與含量測定

趙映蘭，林 彩，鄧 莉，胡 斌（第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院藥劑科，重慶市 400038）

甲睪酮凝膠劑的制備與含量測定

趙映蘭＊，林 彩#，鄧 莉，胡 斌（第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院藥劑科，重慶市 400038）

目的：制備甲睪酮凝膠劑，并建立其含量測定方法。方法：以甲睪酮為主藥，卡波姆940、67%乙醇、肉豆蔻酸異丙酯等為基質(zhì)，制備凝膠劑；采用高效液相色譜法測定甲睪酮的含量。結(jié)果：所制制劑為澄清透明凝膠；甲睪酮檢測濃度的線性范圍為2.0～8.0μg·mL－1，平均回收率為99.84%，RSD＝0.62%（n＝5）。結(jié)論：該制劑制備工藝可行，含量測定方法具有較好的專屬性和精確度。

甲睪酮凝膠劑；制備；含量測定；高效液相色譜法

甲睪酮（Methyltestosterone，又名甲基睪丸素）在促進(jìn)男性性器官的形成、發(fā)育、成熟等方面發(fā)揮重要作用，并可以對抗雌激素，抑制子宮內(nèi)膜生長及降低卵巢垂體功能，在臨床上用于男性性腺機(jī)能減退癥、無睪癥及隱睪征的治療；其還可用于月經(jīng)過多、子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥等婦科疾病的治療[1]。目前，甲睪酮制劑的劑型主要有片劑和注射劑，前者具有口服制劑的首關(guān)效應(yīng)，后者具有注射帶來疼痛的缺點。而凝膠劑具有較好的生物相容性、生物黏附作用及生物可降解作用，故其不但可用于一般制劑的制備，還被用于緩釋、控釋及脈沖釋放等新型給藥系統(tǒng)的研制。因此，將甲睪酮制備成凝膠劑，不但可以避免上述缺點，還可以促進(jìn)藥物的吸收[2]，極大提高了藥物療效和患者的順應(yīng)性。因此，本文制備了甲睪酮凝膠劑，并初步建立了其含量測定方法，為其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的建立和臨床應(yīng)用打下基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

高效液相色譜（HPLC）儀、C-R4A型數(shù)據(jù)處理機(jī)（日本島津公司）；Surveyor PDA紫外檢測器（美國Finnigan公司）。

1.2 試藥

甲睪酮對照品（昆明科翔生物科技有限公司，批號：20071210，純度：99.53%）；甲睪酮原料藥（武漢市合中生化制造有限公司，批號：20071025，純度：97.37%）；卡波姆940（武漢海格爾公司，批號：20080629，化學(xué)純）；肉豆蔻酸異丙酯（中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司，批號：F20080410，化學(xué)純）；甲睪酮凝膠劑（自制，批號：080820、080910、080925，規(guī)格：50mg·5g－1）。

2 處方與制備

2.1 處方

甲睪酮1.0g，卡波姆9401.0g，肉豆蔻酸異丙酯1.0g，氫氧化鈉（NaOH）0.1g，67%乙醇 100g。

2.2 制備

以卡波姆940為凝膠基質(zhì)，均勻撒入67%乙醇中，加熱回流3h，使其溶脹完全，放冷后加入甲睪酮和肉豆蔻酸異丙酯，溶解完全，加入溶有NaOH的67%乙醇調(diào)節(jié)黏度，攪拌均勻后，分裝即得。制得3批本品，外觀性狀均為澄清透明凝膠，在常溫時保持膠狀，不干涸或液化。

3 含量測定

3.1 色譜條件

色譜柱：ODS-C18（15mm×4.6mm，5μm）；檢測波長：241nm；柱溫：30℃；流動相：甲醇-水（7∶3）；流速：1.0mL·min－1；AUFS：0.1。

3.2 檢測波長的選擇

取“3.3”、“3.4”項下3種溶液于200～400nm波長內(nèi)進(jìn)行紫外掃描。結(jié)果，對照品溶液在241nm波長處有最大吸收，而陰性樣品溶液在此處無吸收，故選擇241nm為測定波長。

3.3 供試品與陽性樣品溶液的制備

精密稱取樣品5g，置于50mL容量瓶中，加乙醇25mL，于80℃水浴加熱使基質(zhì)溶解，放冷至室溫，加乙醇至刻度，搖勻，靜置2h，過濾，精密量取續(xù)濾液5mL，置于25mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。同法將不含甲睪酮的空白凝膠制備得陰性樣品溶液。

3.4 對照品溶液的制備

精密量取甲睪酮對照品74.7mg，置于100mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得到濃度為747.0μg·mL－1的對照品溶液。

3.5 專屬性試驗

取“3.3”、“3.4”項下3種溶液，按“3.1”項下色譜條件分別進(jìn)行HPLC分析，色譜詳見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.對照品；B.供試品；C.陰性樣品 ；1.甲睪酮Fig 1 HPLC chromatogramsA.reference substance；B.test sample；C.negative sample；1.methyltestosterone

結(jié)果表明，供試品與對照品主峰的保留時間相同（5.6min），而陰性樣品在此未出現(xiàn)峰，提示陰性樣品不干擾供試品的測定。

3.6 線性關(guān)系考察

精密量取對照品溶液0.4、0.6、0.7、0.8、1.0mL，分別置于100mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，得1、2、3、4、5號溶液。按上述色譜條件，分別取20μL進(jìn)樣，測定峰面積。以濃度（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y＝6.0×10－5X－0.4417（r＝0.9998，n＝5）。結(jié)果表明，甲睪酮檢測濃度的線性范圍為2.0～8.0μg·mL－1。

3.7 穩(wěn)定性試驗

取“3.3”項下供試品溶液分別于0、1、2、4、8h 注入HPLC儀，記錄色譜，測定峰面積，考察本品在流動相溶液中的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，經(jīng)8h測得甲睪酮的峰面積的RSD為0.23%，即表明本品在流動相溶液中8h內(nèi)穩(wěn)定。

3.8 精密度試驗

精密量取樣品5g（批號：080820），按“3.3”項下方法制備成供試品溶液5份，每份分別進(jìn)樣10μL，按“3.1”項下色譜條件進(jìn)樣，按峰面積歸一法測定其含量。結(jié)果，RSD＝0.62%（n＝5），表明本方法精密度良好。

3.9 回收率試驗

精密稱取陰性樣品3份，各5g，每份分別精密加入一定量的甲睪酮對照品，置于50mL容量瓶中，加入乙醇25mL，于80℃水浴加熱使溶解，放冷至室溫，加乙醇至刻度，搖勻，靜置2h，過濾，精密量取續(xù)濾液5mL，置于25mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別取20μL進(jìn)樣，以峰面積測定甲睪酮含量，同種濃度平行測定3次，計算回收率，結(jié)果見表1。

3.10 樣品含量測定

精密稱取3批樣品各5g，按“3.3”項下方法制備成供試品溶液，精密吸取10μL，按“3.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定供試品的峰面積；另按“3.4”項下方法制備濃度為747.0μg·mL－1的甲睪酮對照品溶液，同法測定。計算供試品中甲睪酮的含量。結(jié)果，3批樣品中甲睪酮標(biāo)示含量分別為102.5%、103.6%、103.4%。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝9）Tab 1Results of recovery test（n＝9）

4 討論

甲睪酮口服吸收較好，但在肝臟中大部分被代謝失活，因此制成非口服給藥制劑可提高生物利用度。因肌肉注射劑和植埋劑會引起用藥者的痛苦，故經(jīng)皮膚給藥制劑是一種很好的非口服劑型，具有提高生物利用度、使用方便、無疼痛等優(yōu)點[3]。

本文將甲睪酮制備為凝膠劑，選用了卡波姆940為基質(zhì)，肉豆蔻酸異丙酯為促滲劑。前者具有良好的黏合性、膠凝性，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，無過敏反應(yīng)，且與大多數(shù)輔料相容性好[4]；后者能使制劑在皮膚上易于鋪展，無不適感，與皮膚有良好的相容性，幫助藥物擴(kuò)散和吸收[5]。本制劑的輔料中還加入了乙醇和NaOH。乙醇的作用主要是溶解藥物，并具有一定的防腐作用；而使用NaOH的目的是調(diào)節(jié)制劑的pH值和黏度。經(jīng)試驗證明，67%的乙醇和使用NaOH調(diào)節(jié)pH值為6～7時，制備的凝膠劑具有含量均勻、黏度適宜的良好性狀。

本文采用HPLC法測定甲睪酮制劑中甲睪酮的含量[6]。將檢測波長設(shè)置為241nm時，輔料對甲睪酮不存在干擾，精密度高；且試驗證明，采用甲醇-水（7∶3）為流動相，基質(zhì)與甲睪酮能得到很好分離，故選用HPLC法作為甲睪酮的含量測定方法。

綜上所述，所制制劑質(zhì)量穩(wěn)定可控，建立的含量測定方法具有很好的專屬性和精確度。

[1] 童建孫，王興海，崔毓桂，等.不同劑量的十一酸睪酮對大鼠生精功能影響[J].中華男科學(xué)，2000，6（2）：89.

[2] 沈麗琳，侯慶昌，張 繁，等.殺微生物避孕凝膠劑的抗生育和抗菌作用研究[J].中國計劃生育學(xué)雜志，2008，16（9）：533.

[3] 龐 允，王云彩.中藥經(jīng)皮給藥制劑的研究進(jìn)展[J].中國藥房，2002，13（4）：240.

[4] 連佳芳，郝 勇，張林祺.卡波姆及其在凝膠劑中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].白求恩軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2008，6（3）：162.

[5] 王 剛，杜洪光，張恩宏，等.促滲劑對司來吉蘭貼片透皮性能的影響[J].中國藥房，2008，19（7）：511.

[6] 林曉輝，張雪原，丁紅嬰，等.RP-HPLC測定甲睪酮片中甲睪酮的含量[J].廣東藥學(xué)，2005，15（6）：15.

Preparation and Content Determination of Methyltestosterone Gelatin

ZHAO Ying-lan，LIN Cai，DENG Li，HU Bin（Dept.of Pharmacy，Southwest Hospital，The Third Military Medical University，Chongqing 400038，China）

OBJECTIVE：To prepare Methyltestosterone gelatin and to establish its content determination method.METHODS：Gelatin was prepared using methyltestosterone as main component and carbomer 940，67%ethanol and isopropyl myristate as matrix.The content of methyltestosterone was determined by HPLC.RESULTS：Preparation was colorless transparent gelatin.The linear range of methyltestosterone was 2.0～8.0μg·mL－1with an average recovery of 99.84%（RSD＝0.62%，n＝5）.CONCLUSION：Preparation method is practical.The content determination method is specific and accurate.

Methyltestosterone gelatin；Preparation；Content determination；HPLC

R927.2

A

1001-0408（2010）33-3133-02

＊主管藥師，碩士研究生。研究方向：藥物制劑分析。電話：023-68765490。E-mail：zhaoyinglan＿023@sina.com

#通訊作者：副主任藥師。研究方向：藥物制劑分析。電話：023-68765489。E-mail：lincai113@163.com

2009-10-14

2009-11-27）