復(fù)方頭孢噻呋對人工誘發(fā)雞大腸桿菌病的療效試驗

王金莉,李 麗

(遼寧醫(yī)學院畜牧獸醫(yī)學院,遼寧錦州121001)

抗菌藥物在臨床治療雞大腸桿菌病中的長期應(yīng)用,使耐藥菌株不斷出現(xiàn),頭孢噻呋作為第一個動物專用的第三代頭孢類抗生素,也有產(chǎn)生耐藥性的報道,為了延長頭孢噻呋在獸醫(yī)臨床的使用時間,減少耐藥性的產(chǎn)生,增強藥效,降低用藥成本,我院動物藥學實驗室選用協(xié)同關(guān)系好的頭孢噻呋與TMP配伍,按照4∶1比例制成復(fù)方頭孢噻呋。本試驗中測定復(fù)方頭孢噻呋對雞大腸桿菌最小抑菌濃度,以及對人工誘發(fā)的雞大腸桿菌病進行試驗性治療,并與頭孢噻呋的療效進行比較,為獸醫(yī)臨床合理應(yīng)用復(fù)方頭孢噻呋,提高療效提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 試驗材料

1.1 藥品 復(fù)方頭孢噻呋,由遼寧醫(yī)學院畜牧獸醫(yī)學院動物藥學實驗室提供。頭孢噻呋,由天津市生機生物技術(shù)有限公司提供,含量98%以上。

1.2 菌種 O1、O2、O78型及本地分離株7株,共 10株雞大腸桿菌菌株,由遼寧凱為生物技術(shù)有限公司提供。

1.3 試驗動物 蛋雞雞雛300只,雌雄各半,由遼寧醫(yī)學院畜牧獸醫(yī)學院養(yǎng)雞場提供,試驗時10日齡,舍內(nèi)隔離籠養(yǎng),按常規(guī)飼喂全價飼料,自由采食及飲水,不用任何藥物或疫苗免疫。

2 試驗方法

2.1 復(fù)方頭孢噻呋的最小抑菌濃度(MIC)測定采用試管兩倍稀釋法[1]做最小抑菌濃度(MIC)抑菌試驗,相同過程重復(fù)三次,求平均值。接種菌量為9×105CFU/mL[2],測定復(fù)方頭孢噻呋對雞大腸桿菌的MIC值,和頭孢噻呋的MIC值對比。

2.2 人工誘發(fā)雞大腸桿菌病

2.2.1 試驗分組 選擇體重相近的健康雞300只隨機分成6組,分組情況見表1。

2.2.2 人工染毒 各試驗組每只雞分別按每100 g體重胸肌注射雞大腸桿菌6×109CFU/mL菌液0.25 mL,約含1.5億個菌[3]。健康對照組雞經(jīng)胸肌注射無菌生理鹽水0.25 mL。在接種前和接種后觀察雞的臨床癥狀,對死雞進行剖檢,取肝、脾及心作細菌分離培養(yǎng)及鑒定,以確定是否成功誘發(fā)疾病。

2.3 試驗性藥物治療

2.3.1 給藥治療 感染雞在接種雞大腸桿菌6 h左右開始出現(xiàn)臨床癥狀,此時按表1對各組雞進行治療。

表1 復(fù)方頭孢噻呋對人工誘發(fā)雞大腸桿菌病的試驗雞分組及給藥情況

2.3.2 療效評價 第1次給藥后15 d為觀察期,每天觀察各組雞的各種臨床表現(xiàn),記錄死亡數(shù)。對死雞進行尸體剖檢,取肝、脾及心作細菌分離培養(yǎng)及鑒定,以確定死因。計算死亡率、治愈率、有效率、相對增重率[3],在試驗開始和試驗結(jié)束時稱量每只雞的體重,并予以記錄。

2.3.3 數(shù)據(jù)分析 利用生物學統(tǒng)計方法進行顯著性檢驗,其中死亡率、有效率和治愈率用卡方檢驗,平均增重及增重率進行t檢驗。

2.4 安全性試驗 試驗是以推薦劑量的5倍(0.25 g/L)對30只健康雞飲水給藥,每天2次,連續(xù)給藥3 d,觀察期為第1次用藥后的15 d。

3 試驗結(jié)果

3.1 復(fù)方頭孢噻呋的最小抑菌濃度(MIC)測定結(jié)果 復(fù)方頭孢噻呋和頭孢噻呋對雞大腸桿菌株O1、O2、O78以及臨床分離7株雞大腸桿菌的MIC值,見表2。

表2 復(fù)方頭孢噻呋和頭孢噻呋的最小抑菌濃度(MIC)結(jié)果 (μg/m L)

由表2可見,復(fù)方頭孢噻呋的最小抑菌濃度(MIC)值為0.085μg/mL與頭孢噻呋單獨使用的最小抑菌濃度(MIC)值0.65μg/mL相比,差異極顯著(P＜0.01)。

3.2 人工誘發(fā)雞大腸桿菌病的結(jié)果 感染對照組50只雛雞有42只在接種雞大腸桿菌后1～5 d出現(xiàn)死亡。這42只雞表現(xiàn)出食欲、飲欲下降或廢絕,閉眼昏睡,拉稀糞等臨床癥狀。剖檢可見氣囊炎、肝周炎和心包炎等病變。從肝臟、脾臟及心臟均分離出大量典型的大腸桿菌,表明成功誘發(fā)疾病。

3.3 試驗性藥物治療結(jié)果 感染大腸桿菌病的雞經(jīng)不同劑量的復(fù)方頭孢噻呋或頭孢噻呋給藥后,與感染對照組比較,能較迅速地減輕臨診癥狀,一般在給藥2～3 d后,大多數(shù)雞食欲基本恢復(fù)正常。給藥后15 d內(nèi),各組雞的療效結(jié)果見表3。

表3 復(fù)方頭孢噻呋對人工誘發(fā)雞大腸桿菌病的療效

復(fù)方頭孢噻呋高、中、低劑量組和頭孢噻呋對照組死亡率分別為0%、4%、18%和16%,均顯著低于感染對照組的84%,差異極顯著(P＜0.01)。各用藥組相比較,復(fù)方頭孢噻呋高劑量組死亡率為0,復(fù)方頭孢噻呋中劑量組和頭孢噻呋對照組死亡率均較低,而復(fù)方頭孢噻呋低劑量組的死亡率高于頭孢噻呋對照組。

由表3可見,復(fù)方頭孢噻呋高劑量組、中劑量組治愈率和有效率較高,均超過90%。頭孢噻呋對照組的治愈率和有效率相對較低,復(fù)方頭孢噻呋低劑量組的治愈率和有效率最低,均低于90%。

在增重上,復(fù)方頭孢噻呋高劑量組、中劑量組最高,其次為頭孢噻呋低劑量組,3個劑量組的相對增重率均高于頭孢噻呋對照組,差異顯著(P＜0.05)。上述4個組相對增重率均顯著高于感染對照組,差異極顯著(P＜0.01)。感染對照組相對增重率顯著低于健康對照組,差異極顯著(P＜0.01)。

4 討論

通過最小抑菌濃度(MIC)測定方法,比較復(fù)方頭孢噻呋和頭孢噻呋對雞大腸桿菌O1、O2、O78,以及臨床分離的7株雞大腸桿菌抑菌效果,結(jié)果表明,復(fù)方頭孢噻呋對雞大腸桿菌的抑菌效果(MIC為0.085μg/mL)極顯著優(yōu)于頭孢噻呋(MIC為0.65μg/mL)單獨用藥。因此,TMP作為抗菌增效劑,增強了頭孢噻呋的抗菌活性,同時兩者組成復(fù)方頭孢噻呋可減少頭孢噻呋的使用量,降低生產(chǎn)成本。

對治療試驗中的死亡率、治愈率、有效率及增重幾項指標進行統(tǒng)計學分析,復(fù)方頭孢噻呋高、中、低劑量組和頭孢噻呋對照組死亡率均顯著低于感染對照組,而治愈率和有效率顯著高于感染對照組,差異均極顯著(P＜0.01),因此不同劑量組的復(fù)方頭孢噻呋和頭孢噻呋對雞大腸桿菌病均有療效。安全性試驗 用藥期間,試驗雞未觀察到任何不良反應(yīng),無雞只死亡。

復(fù)方頭孢噻呋高、中劑量組均優(yōu)于頭孢噻呋對照組,差異顯著(P＜0.05)。復(fù)方頭孢噻呋低劑量組同頭孢噻呋對照組比較,死亡率較高,治愈率和有效率較低。復(fù)方頭孢噻呋高、中劑量組的各項指標比較,差異不顯著(P＞0.05),因此,綜合上述幾項指標分析,在臨床上治療雞的大腸桿菌病,復(fù)方頭孢噻呋的給藥劑量選擇中劑量組的復(fù)方頭孢噻呋(0.05 g/L)較為合理,對雞的增重率為95.4%,同時治愈率達96%,達到較好的治療效果。

[1] 趙振升,白東英,吳朝陽,等.甲氧芐定與抗菌藥物聯(lián)合抗菌作用效果試驗[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2005(1)：60-61.

[2] 戴自英.臨床抗菌藥理學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,1985：16-19.

[3] 曾振靈,劉建新,王志強,等.單諾沙星對人工誘發(fā)雞大腸桿菌病的藥效試驗[J].畜牧與獸醫(yī),2000(3)：17-18.