消炎泌乳沖劑對隱性乳房炎奶牛血清自由基代謝的影響

金蘭梅,伍清林,金保方,徐世永,馬高民,葛繼文

(1.金陵科技學院動物科學與技術(shù)學院,江蘇南京210038;2.南京中醫(yī)藥大學第一臨床醫(yī)學院,江蘇 南京210046;3.南京衛(wèi)崗奶業(yè)集團,江蘇 南京211122)

機體在生命過程中產(chǎn)生自由基是體內(nèi)代謝氧化還原網(wǎng)絡(luò)中的重要一環(huán)。甚至衰老也與自由基有關(guān)。自由基一方面參與免疫調(diào)節(jié),以及三磷酸腺苷(ATP)、前列腺素的合成和巨噬細胞的吞噬作用等,另一方面,也能引起機體發(fā)生癌癥、誘發(fā)炎癥、病理損傷及自身免疫病等。在正常情況下,機體內(nèi)自由基的產(chǎn)生、利用、清除三者處于動態(tài)平衡,而且在很大程度上,自由基直接或間接地發(fā)揮著有益的生物學效應(yīng)。在病理狀態(tài)下,機體內(nèi)的自由基產(chǎn)生過多,清除自由基的能力減弱或二者兼而有之,結(jié)果都造成自由基過剩,從而導致機體的脂質(zhì)過氧化作用,破壞生物膜結(jié)構(gòu)[1]。在乳房炎研究中已觀察到血清和乳清中的脂質(zhì)過氧化物含量的增加。脂質(zhì)過氧化物的增加意味著自由基對機體的損傷作用增強。造成脂質(zhì)過氧化物在乳腺組織中的這種堆積是因為病原微生物在乳腺內(nèi)通過直接或間接的途徑破壞了乳腺內(nèi)自由基生成和自由基清除兩大系統(tǒng)的平衡,使自由基在體內(nèi)聚集,攻擊不飽和脂肪酸發(fā)生過氧化反應(yīng),生成脂質(zhì)過氧化物,從而使組織中脂質(zhì)過氧化物水平明顯升高[2]。所以在獸醫(yī)臨床上,測定體液或組織中脂質(zhì)過氧化物的含量,除對了解某些疾病過程是否與自由基對機體的損傷有關(guān)外,而且對病情的發(fā)展,治療效果的評價均有重要的參考價值[3]。本試驗初步探討了中藥消炎泌乳沖劑對患隱性乳房炎奶牛外周血中自由基的影響,為了解消炎泌乳沖劑對隱性乳房炎的作用機理奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗牛選擇與試驗時間 從南京某實驗牧場泌乳牛群中選擇無乳房炎臨床癥狀且乳汁檢測體細胞數(shù)大于50萬/mL、CMT(加州乳房炎檢測法)檢測陽性的奶牛12頭,依據(jù)年齡、胎次相同、泌乳日相似(產(chǎn)犢日期在5 d以內(nèi))、產(chǎn)奶量和泌乳期相近的原則進行配對分組,隨機分為2組,試驗1組用消炎泌乳沖劑治療,100 g/頭?d飲水;試驗 2組不用藥。另選擇患臨床乳房炎奶牛16頭作為乳房炎組,依據(jù)上述原則選擇健康奶牛16頭作為健康組。

試驗于2009年4月14日至5月5日進行,預試期為7 d,試驗期為21 d,12頭奶牛集中于一個雙列式牛舍中集中統(tǒng)一飼養(yǎng)管理。試驗牛在試驗期間的飼養(yǎng)管理方式與牧場其他牛群相同。

1.2 藥品與儀器 消炎泌乳沖劑由蒲公英、銀花藤、連翹、路路通、制香附、絲瓜絡(luò)、柴胡、全瓜蔞、通草、甘草、王不留行、當歸按比例混合,由金陵科技學院和南京中醫(yī)藥大學聯(lián)合研制。

丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)等試劑盒,均購自南京建成生物工程研究所。

FOSS型牛奶紅外分析掃描儀(丹麥FOSS公司生產(chǎn),型號：FOSS MiLk.soan-4000),UV-754型可見分光光度計(上海光學儀器總廠生產(chǎn))。

1.3 樣品的采集、處理 在用藥前和用藥后7、14、21 d分別對各組試驗牛尾根靜脈采血,分離血清,-20℃保存?zhèn)溆?。臨床乳房炎奶牛,在發(fā)生癥狀后3 d尾根靜脈采血,同時根據(jù)分組配對的原則選擇健康奶牛采血,分離血清,-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 測試項目及測試方法 丙二醛(MDA)測定用硫代巴比妥酸法,一氧化氮(NO)測定用硝酸氧化法,超氧化物歧化酶(SOD)采用黃嘌呤氧化酶法,過氧化氫酶(CAT)用可見光法,總抗氧化能力(TAOC)測定用比色法,各測試項目均按試劑盒說明嚴格操作。

每天電腦記錄每頭牛的產(chǎn)奶量。試驗前、后采集乳樣,在南京衛(wèi)崗乳業(yè)有限公司質(zhì)檢中心測定乳脂、乳蛋白,用丹麥FOSS公司生產(chǎn)的牛奶紅外分析掃描儀測定。

1.5 數(shù)據(jù)處理 試驗數(shù)據(jù)采用ExceL 2003和SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計處理,用S-N-K多重比較和t檢驗,計算平均數(shù)±標準差。

2 結(jié)果

2.1 消炎泌乳沖劑對隱性乳房炎奶牛產(chǎn)奶量及乳質(zhì)量的影響 使用消炎泌乳沖劑治療奶牛隱性乳房炎,在試驗前和試驗后7、14 d時,試驗2組奶牛產(chǎn)奶量比試驗前分別降低1.7 kg/頭?d、4.5 kg/頭?d,與試驗1組相比分別降低了1.6 kg/頭?d、3.9 kg/頭?d,而試驗1組則保持相對穩(wěn)定。在用藥后第21 d,試驗2組與試驗1組和試驗前比較差異顯著(P＜0.05)。結(jié)果見表1。

表1 試驗奶牛產(chǎn)奶量統(tǒng)計結(jié)果 (kg/頭)

由表2可知,在試驗前后奶牛乳汁中的乳脂率和乳蛋白沒有顯著性變化(P＞0.05),說明消炎泌乳沖劑可以提高產(chǎn)奶量,而不影響乳的質(zhì)量。

表2 奶牛乳汁中乳脂、乳蛋白含量測定結(jié)果 (%)

2.2 乳房炎奶牛血清中自由基代謝的變化 由表3可看出,乳房炎奶牛血清中MDA高于健康奶牛2.64 nmoL/mL、NO的含量高于健康奶牛 2.39 μmoL/mL(P＜0.05),SOD的活力降低27.72 U/mL、CAT的活力降低 1.52 U/mL、T-AOC降低2.74 U/mL,差異顯著(P＜0.05)。

表3 乳房炎奶牛血清中自由基代謝的變化

2.3 消炎泌乳沖劑對隱性乳房炎奶牛血清自由基代謝的影響 見表4。

由表4可知,隱性乳房炎奶牛使用消炎泌乳沖劑后MDA的含量下降,用藥后14 d比試驗前和試驗2組開始下降,21 d比試驗前和試驗2組明顯下降,差異顯著(P＜0.05),而試驗2組MDA的含量始終無明顯變化(P＞0.05)。兩組隱性乳房炎奶牛試驗前NO含量無差異,治療組用藥后7 d NO含量有所下降,但差異不顯著(P＞0.05),隨著時間的延長,用藥組NO含量顯著降低(P＜0.05)。而試驗2組奶牛NO含量無明顯變化。試驗1組用藥后TAOC、SOD開始升高,與試驗前和試驗 2組比較,差異顯著(P＜0.05)。治療組奶牛從用藥后第14天起血清中CAT升高,與試驗2組相比差異顯著(P＜0.05)。試驗2組奶牛在試驗前后無明顯變化(P＞0.05)。

表4 “消炎泌乳沖劑”對隱性乳房炎奶牛血清中自由基代謝的影響(n=6)

3 討論與小結(jié)

3.1 乳房炎奶牛血清中自由基代謝的變化 許多試驗結(jié)果[4-8]證實,炎癥期致炎因子刺激誘導型NO合酶(iNOS),合成大量的NO,促進炎癥反應(yīng)。iNOS的過度表達致NO產(chǎn)生過量時往往促發(fā)免疫病理過程而造成組織損傷。NO生成過多成為許多疾病的重要促進因素。T-AOC是機體頡頏氧自由基的主要體系,制約和清除機體產(chǎn)生過多的自由基,保護細胞正常功能,維持機體的正常代謝。SOD是廣泛存在于需氧生物細胞內(nèi)的一種金屬酶,能催化超氧陰離子自由基(O2?)產(chǎn)生歧化反應(yīng)生成H 2O2,是體內(nèi)O2?的重要清除劑。CAT進一步代謝過氧化氫促使H 2O2分解為分子O2和H 2O,從而使細胞免于遭受H2O2的毒害。本試驗結(jié)果表明,乳房炎奶牛血清中MDA、NO的含量高于健康奶牛(P＜0.05),SOD、CAT的活性、T-AOC低于健康奶牛(P＜0.05),與劉莉莉,李睿文等報道[9-10]的一致。說明活性氧和自由基生成反應(yīng)加劇,參與了乳房炎的發(fā)病過程。奶?；既榉垦讜r活性氧和自由基生成量增加,同時體內(nèi)活性氧和自由基清除能力下降,結(jié)果使機體活性氧和自由基生成與清除之間動態(tài)平衡遭到破壞,出現(xiàn)多余的活性氧和自由基,導致體內(nèi)脂質(zhì)過氧化過程加劇,進而造成乳腺組織細胞的病理損傷。

3.2 消炎泌乳沖劑對隱性乳房炎奶牛血清中血清自由基代謝的影響 本試驗所組復方制劑具有較強的活血散淤、清熱解毒、涼血等功效,有力地促進了組織細胞的新陳代謝,提高機體抗病力。試驗結(jié)果顯示,隱性乳房炎奶牛使用消炎泌乳沖劑后,MDA、NO的含量下降(P＜0.05);T-AOC、SOD和CAT活性顯著升高(P＜0.05),與對照組相比均有顯著性差異(P＜0.05),表明消炎泌乳沖劑可以減少自由基致機體組織細胞的損傷,能夠提高機體的總抗氧化能力,增強機體的免疫力,使得機體內(nèi)自由基被清除,乳房炎癥狀緩解并消失。

3.3 消炎泌乳沖劑對隱性乳房炎奶牛產(chǎn)奶量和乳質(zhì)量的影響 消炎泌乳沖劑是根據(jù)奶牛乳房炎中藥治療總的原則擬定中草藥方劑,以清熱解毒、抗菌消炎、消腫止痛、活絡(luò)通乳為主,輔以補益、理氣等藥物,以補氣壯陽、扶正祛邪。在增強奶牛抵抗力的同時,加強了奶牛的防御能力,其通絡(luò)下乳的作用也使其產(chǎn)奶量得到顯著提高,通過本試驗得到驗證。試驗期間和試驗后,試驗1組奶牛產(chǎn)奶量一直比較穩(wěn)定,在試驗后21 d,試驗2組奶牛產(chǎn)奶量比試驗1組下降了3.9 kg/d,在試驗前后奶牛乳汁中的乳脂率和乳蛋白沒有顯著性變化,說明消炎泌乳沖劑不但對奶牛隱性乳房炎有治療作用,同時可以提高產(chǎn)奶量,而不影響乳的質(zhì)量。用其治奶牛乳房炎,可以替代了抗生素的應(yīng)用,促進了優(yōu)質(zhì)奶的生產(chǎn),提高了奶牛的產(chǎn)奶量。

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