HPLC法測(cè)定清喉利咽顆粒中柚皮苷的含量

廣西梧州食品藥品檢驗(yàn)所（543002）陳江濤 林冬杰

清喉利咽顆粒是由黃芩、西青果、桔梗、竹茹、枳殼、胖大海、橘紅等13種中藥組成。我國藥典2005年版一部質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只有黃芩苷含量測(cè)定指標(biāo)，為更好地控制該藥品的質(zhì)量，本文采用HPLC法檢測(cè)清喉利咽顆粒中柚皮苷的含量。

1 儀器與試藥

Shimadzu LC-2010高效液相色譜儀 ，LCsolution 色譜工作站 ，紫外檢測(cè)器，日本AND GR-202電子分析天平。清喉利咽顆粒廠家：桂龍藥業(yè)（安徽）有限公司；柚皮苷（批號(hào)：110722-200309，供含量測(cè)定用），購于中國藥品生物制品檢定所；甲醇為色譜純；水為純化水；其他化學(xué)試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱:Phenomenex C18柱(250mm×4.6mm，4μm)；流動(dòng)相甲醇－水（40:60）；流速1.0ml/min；波長：283nm。柱溫：30℃，進(jìn)樣量10μl。

附表 柚皮苷回收率測(cè)定結(jié)果（n=6）

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取柚皮苷17.6mg置50ml量瓶中加甲醇，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，濃度（柚皮苷）：352μg.ml-1，精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液12.5ml置25ml瓶中，加甲醇稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液，濃度（柚皮苷）：176μg.ml-1。

2.3 供試品溶液的制備 精密量稱取本品2g，置50ml量瓶中，加甲醇約45ml超聲提取30min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 分別取缺枳殼、橘紅的樣品按供試品溶液制備方法制備陰性陰性對(duì)照樣品，按2.3供試品溶液的制備方法制備缺枳殼的陰性對(duì)照溶液。

2.5 專屬性試驗(yàn) 分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液和對(duì)照品溶液各10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。由色譜圖可見，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對(duì)照試驗(yàn)無干擾。

2.6 精密度試驗(yàn) 取同一份對(duì)照品溶液(柚皮苷濃度為176μg/ml)，按2.1項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值，柚皮苷RSD為0.20%（n=6）。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.7 線性關(guān)系考察 按2.1的色譜條件分別精密吸取上述對(duì)照品溶液2、5、10、15、20μl注入色譜儀，測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y），對(duì)照品進(jìn)樣量（ng）為橫坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得柚皮苷的回歸方程為：Y＝41.6X +7.6（r=0.9996）；結(jié)果表明：柚皮苷在352～3520ng范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同樣品溶液，分別在0，2，4，8，12h， 按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定峰面積積分值，柚皮苷RSD為0.73%（n=5）。結(jié)果表明12h內(nèi)待測(cè)物穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密稱取同一批(批號(hào)：090109 )樣品 6份，按2.1色譜條件和2.3項(xiàng)下方法試驗(yàn)，結(jié)果柚皮苷平均含量是3.88mg.g-1，RSD＝0.95%（n=6）。結(jié)果表明，本方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密量取已測(cè)定含量的清喉利咽顆粒（柚皮苷平均含量3.88mg.g-1）0.8、1、1.2ml置50ml量瓶中，各取樣2份，精密加入柚皮苷濃度為1.1mg.ml-1的對(duì)照品溶液3.2、4、4.8ml，按2.3項(xiàng)下的方法制備供試品溶液、按2.1色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見附表，表明本方法回收率良好，符合定量分析要求。

2.10 樣品含量測(cè)定 本品3批樣品批號(hào)為081103、090109和091046的柚皮苷含量分別為3.80、3.82和3.80。

3 討論

3.1 檢測(cè)波長的選擇 參考《中國藥典》2005年版一部枳殼中柚皮苷[1]的檢測(cè)，柚皮苷經(jīng)紫外掃描在283nm有較大吸收，因此選定283nm作為檢測(cè)波長。

3.2 流動(dòng)相的選擇 本方法考察了流動(dòng)相甲醇-水（20：80）、甲醇-水（30：70）、甲醇-水（40：60）洗脫條件下對(duì)樣品中柚皮苷分離度的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用甲醇-水（40：60）洗脫時(shí)，樣品中的柚皮苷能得到較好的分離，峰形良好，且流動(dòng)相配制簡(jiǎn)單，效率較高，故采用甲醇-水（40：60）作為流動(dòng)相。

3.4 陰性樣品的制備 由于枳殼中含柚皮苷，故陰性樣品為缺此物質(zhì)的樣品。