桂西地區(qū)幽門螺桿菌耐藥性影響因素分析＊

黃衍強(qiáng),歐 平,黃贊松,周喜漢,李曉華,韋紅玉

(1.右江民族醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)微生物學(xué)與免疫學(xué)教研室,廣西百色533000;2.賀州學(xué)院,廣西542800;3.右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院,廣西百色533000)

桂西地區(qū)幽門螺桿菌耐藥性影響因素分析＊

黃衍強(qiáng)1,歐 平2,黃贊松3△,周喜漢3,李曉華1,韋紅玉1

(1.右江民族醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)微生物學(xué)與免疫學(xué)教研室,廣西百色533000;2.賀州學(xué)院,廣西542800;3.右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院,廣西百色533000)

目的 了解桂西地區(qū)幽門螺桿菌(Hp)對(duì)甲硝唑等抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性的影響因素。方法 采集右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2006年1月至2008年12月確診為 Hp感染患者的胃竇部黏膜標(biāo)本進(jìn)行 Hp分離培養(yǎng)和鑒定,經(jīng)鑒定后選擇374株 Hp菌株,采用紙片擴(kuò)散法測定其對(duì)甲硝唑等抗菌藥物的敏感性;利用單因素分析χ2檢驗(yàn)及精確概率法分析 Hp對(duì)抗菌藥物耐藥與患者性別、民族、疾病及年齡的關(guān)系。結(jié)果 Hp對(duì)甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素的耐藥率與患者性別、民族、疾病及年齡的關(guān)系差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 Hp對(duì)甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素的耐藥與患者性別、民族、疾病及年齡無密切關(guān)系。

幽門螺桿菌;耐藥性;桂西

目前,幽門螺桿菌(helicobacter pylori,Hp)對(duì)抗菌藥物的耐藥性是影響 Hp感染根治效果的主要原因,尤其對(duì)甲硝唑、克拉霉素和阿莫西林的耐藥率逐年增加。因此,Hp耐藥菌株的研究已引起人們普遍關(guān)注[1]。為了解桂西地區(qū) Hp對(duì)甲硝唑等抗菌藥物產(chǎn)生耐藥的因素,指導(dǎo)臨床用藥,克服耐藥菌株的產(chǎn)生,提高根治率,本研究于2006年1月至2008年12月選擇右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院就診的胃潰瘍及胃炎患者,從其胃黏膜中分離培養(yǎng) Hp,并進(jìn)行了耐藥性觀察和耐藥影響因素分析,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象(1)菌株來源:選擇2006～2008年在右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院就診并經(jīng)病理診斷為胃潰瘍、胃炎患者共482例,利用胃鏡活檢鉗采集患者胃竇部黏膜,進(jìn)行 Hp培養(yǎng)鑒定。(2)培養(yǎng)基與試劑:哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基、腦心浸液培養(yǎng)基、螺桿菌添加劑(廣州迪景微生物科技有限公司產(chǎn)品);酪蛋白綿羊血(本實(shí)驗(yàn)室自制);1%鹽酸二甲基對(duì)苯二胺溶液、1%α-萘酚-乙醇溶液、3%過氧化氫溶液;Hp快速尿素酶試紙;甲硝唑(5μg/片)、阿莫西林(10μg/片)、克拉霉素(15μg/片)藥敏紙片(杭州天和微生物試劑有限公司產(chǎn)品);微需氧袋(含5%氧的小型厭氧產(chǎn)氣袋、厭氧塑料袋、厭氧塑料袋封口夾、厭氧指示劑,廣州迪景微生物科技有限公司產(chǎn)品);Hp J99標(biāo)準(zhǔn)菌株(中國 Hp保藏中心贈(zèng)送)。

1.2 Hp培養(yǎng) 把采集的胃竇部黏膜先利用 Hp快速尿素酶實(shí)驗(yàn)進(jìn)行篩選,陽性者則收集保存于腦心浸液培養(yǎng)基中,把培養(yǎng)基置保溫瓶中冷凍送回實(shí)驗(yàn)室。在無菌工作臺(tái)上把采集的胃黏膜和腦心浸液倒置在配制好的哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基中,使用手術(shù)剪刀快速把黏膜組織剪碎,然后使用L棒在哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基表面把黏膜碎粒涂布均勻,迅速放入?yún)捬跛芰洗?剪開小型厭氧產(chǎn)氣袋,放入?yún)捬踔甘緞?最后使用厭氧塑料袋封口夾封閉厭氧塑料袋,放置孵箱35℃培養(yǎng)7 d[2]。

1.3 直接涂片染色檢查 對(duì)分離培養(yǎng)出來的菌落進(jìn)行革蘭染色,染色方法按文獻(xiàn)[3],經(jīng)過染色鏡檢發(fā)現(xiàn)革蘭陰性桿菌或革蘭陰性弧菌即初步判斷為 Hp。

1.4 生化鑒定 對(duì)初步判斷是 Hp的細(xì)菌進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)、觸酶試驗(yàn)、快速尿素酶試驗(yàn)[4],3個(gè)試驗(yàn)結(jié)果均為陽性者即鑒定該細(xì)菌為 Hp[5]。

1.5 藥物敏感試驗(yàn) 采用紙片擴(kuò)散法(K-B法)觀察 Hp對(duì)甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素的耐藥性。稱取哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基38 g,加入1 000 mL蒸餾水,制備血瓊脂平板,按每個(gè)平皿(直徑9 mm)25 mL進(jìn)行分裝。將孵育4 d的 Hp接種于生理鹽水試管中,校正濃度至0.5麥?zhǔn)蠞岫?相當(dāng)于1.0×107CFU/mL)。用無菌棉簽蘸取菌液,在試管內(nèi)壁旋轉(zhuǎn)擠去多余菌液后,在哥倫比亞血瓊脂表面均勻涂布接種3次,每次旋轉(zhuǎn)平板60°,最后沿平板內(nèi)緣涂抹1周。平板在室溫下干燥3～5min后,用無菌鑷子將藥敏紙片緊貼于瓊脂表面,放入微需氧袋,置35℃孵育3～4 d,測量抑菌環(huán)大小,記錄抑菌圈直徑。抑菌環(huán)直徑大于10 mm判定為敏感,直徑為0時(shí)判定為耐藥;使用 Hp J99標(biāo)準(zhǔn)菌株作為對(duì)照。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析,使用χ2檢驗(yàn)及精確概率法。

2 結(jié) 果

2.1 Hp對(duì)甲硝唑的耐藥與患者年齡、性別、民族及疾病的關(guān)系 共分離培養(yǎng) Hp 374株,其中對(duì)甲硝唑耐藥300株,耐藥菌株與患者年齡、性別、民族及疾病的關(guān)系相比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表1。

表1 Hp對(duì)甲硝唑的耐藥與患者性別、民族、疾病及年齡的關(guān)系[n(%)]

2.2 Hp對(duì)克拉霉素的耐藥與患者年齡、性別、民族及疾病的關(guān)系 在分離培養(yǎng)的374株 Hp中,對(duì)克拉霉素耐藥95株,耐藥菌株與患者年齡、性別、民族及疾病的關(guān)系相比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表2。

2.3 Hp對(duì)阿莫西林的耐藥與患者年齡、性別、民族及疾病的關(guān)系 在分離培養(yǎng)的374株 Hp中,對(duì)阿莫西林耐藥49株,耐藥菌株與患者年齡、性別、民族及疾病的關(guān)系相比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表3。

2.4 Hp耐藥株不同地區(qū)分布 分布在百色市、田陽縣、田林縣、凌云縣者分別有 117、89、86、82 株,見表4。

表2 Hp對(duì)克拉霉素的耐藥與患者性別、民族、疾病及年齡的關(guān)系[n(%)]

表3 Hp對(duì)阿莫西林的耐藥與患者性別、民族、疾病及年齡的關(guān)系[n(%)]

表4 桂西地區(qū)4縣 Hp耐藥情況[n(%)]

3 討 論

Hp的感染率在不同國家或地區(qū)不盡相同[6～7],耐藥率也是一樣,發(fā)達(dá)國家的耐藥率比發(fā)展中國家低[8-9]。耐藥率差異可能與地理分布、民族、經(jīng)濟(jì)水平、用藥習(xí)慣、時(shí)間跨度和所采用的藥敏實(shí)驗(yàn)方法有一定的關(guān)系[10-11]。桂西地區(qū)處于滇、黔、桂3省交界處,屬于邊遠(yuǎn)山區(qū),經(jīng)濟(jì)發(fā)展比較落后;該地區(qū)有壯、漢、謠、苗等民族分布,主要以壯、漢族為主。近幾年,由于國家藥品采購制度以及抗菌藥物使用制度逐漸完善,醫(yī)師的用藥習(xí)慣也逐步規(guī)范,濫用抗菌藥物的現(xiàn)象明顯減少,迅速增長的抗菌藥物耐藥率得到了有效控制[12],但是,由于原發(fā)性和繼發(fā)性耐藥的發(fā)生,耐藥率還是逐年上升。誘導(dǎo)原發(fā)性和繼發(fā)性耐藥發(fā)生的原因是什么,是否真的與地理分布、民族、經(jīng)濟(jì)水平、用藥習(xí)慣等因素有關(guān)?本研究使用了單因素χ2分析 Hp耐藥與性別、民族、疾病及年齡的關(guān)系,尋找產(chǎn)生耐藥性的影響因子,研究結(jié)果顯示差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由此可見,桂西地區(qū)人群的性別、民族、疾病及年齡并不是 Hp耐藥產(chǎn)生的主要影響因素。

本研究結(jié)果還顯示了桂西地區(qū) Hp耐藥菌株的區(qū)域分布情況,4縣市各抗菌藥物耐藥率比較沒有超過1%。原因可能是該地區(qū)地理位置、經(jīng)濟(jì)情況、衛(wèi)生條件等因素的影響,各醫(yī)院醫(yī)師的治療方法以及用藥習(xí)慣比較一致,致使原發(fā)性耐藥和繼發(fā)性耐藥的發(fā)生差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

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Study on the affecting factors of helicobacter pylori to the drug resistance in west-Guangxi＊

HUANG Yan-qiang1,OU Ping2,HUANG Zan-song3△,et al.
(1.Department of Microbiology and Immunology of Youjiang Medical College for Nationalities,Baise,Guangxi533000,China;2.Hezhou College,Guangxi542800,China;3.Affiliated Hospital of Youjiang Medical College for Nationalities.Baise,Guangxi533000,China)

Objective To study on the affecting factors of resistance of Helicobacter pylori(Hp)to metronidazole,amoxicillin,clarithromycin in west-Guangxi.Methods Gastric mucosa biopsy specimens were taken from the patients in west-Guangxi during 2006-2008.Three hundred seventy-four strains were diagnosed.These strains resistant to metronidazole,amoxicillin and clarithromycin were determined by using K-B diffusion test.The affectting factors of resistance were determined by analyzed the sex,nationality,types of diseases,age of patient.Results The data showed that the resistance rates were no statistical significant difference in the sex,nationality,types of diseases,age of patient(P>0.05).Conclusion The data show that the resistance rates are not a close relationship with the sex,nationality,types of diseases,age of patient.

helicobacter pylori;drug resistance;west-Guangxi

10.3969/j.issn.1671-8348.2010.19.005

R378;R969.3

A

1671-8348(2010)19-2555-03

廣西自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(0499002);廣西教育廳基金資助項(xiàng)目(2004)?！?/p>

,電話:(0776)2846532;E-mail:huangzansong@hotmail.com。

2010-04-22

2010-06-08)