• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    Neurospora.crassa降解茶粕培養(yǎng)基粗纖維的發(fā)酵工藝研究

    2010-10-27 03:24:42肖玉娟鄧澤元范亞葦胡蔣寧
    食品科學(xué) 2010年23期
    關(guān)鍵詞:皂素豆渣米糠

    肖玉娟,鄧澤元*,范亞葦,李 靜,劉 蓉,胡蔣寧

    (南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實驗室,高等研究院,江西 南昌 330047)

    Neurospora.crassa降解茶粕培養(yǎng)基粗纖維的發(fā)酵工藝研究

    肖玉娟,鄧澤元*,范亞葦,李 靜,劉 蓉,胡蔣寧

    (南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實驗室,高等研究院,江西 南昌 330047)

    以提取茶皂素后的茶粕為材料,研究Neurospora.crassa(粗壯脈紋胞菌)降解茶粕培養(yǎng)基粗纖維的發(fā)酵條件。在單因素試驗的基礎(chǔ)上,選定豆渣、米糠、含水量及發(fā)酵時間進(jìn)行四因素三水平Box-Behnken實驗,建立粗纖維降解率的二次回歸方程,通過響應(yīng)面分析得到優(yōu)化組合工藝條件。結(jié)果表明:最佳的茶粕發(fā)酵條件為豆渣添加量29.38%、米糠添加量18.54%、含水量72%、發(fā)酵時間74.9h時,培養(yǎng)基粗纖維降解率達(dá)到最大值。該條件下粗纖維降解率預(yù)測值為48.65%,驗證值為48.36%。

    粗壯脈紋胞菌;茶粕;發(fā)酵條件;響應(yīng)曲面法優(yōu)化

    茶粕,又稱茶籽餅、茶麩、茶枯,呈紫褐色顆粒,是山茶科植物的果實榨油后剩下的渣,其中油茶茶籽粕和茶葉茶籽粕產(chǎn)量較大,其年均總產(chǎn)量約70萬t,是潛在的可利用茶粕資源[1]。目前,茶籽主要采用傳統(tǒng)的壓榨法榨油工藝制油, 所生產(chǎn)的茶粕中茶皂素、單寧等抗?fàn)I養(yǎng)因子含量過高,不適宜直接用于動物飼料生產(chǎn),大部分被用作清塘劑、肥料、燃料,少量用于茶皂素的提取,極少部分用于飼料資源的開發(fā)應(yīng)用[2]。茶粕如果去除了有毒物質(zhì)茶皂素,其營養(yǎng)價值可與米糠媲美,且經(jīng)過微生物發(fā)酵后,可得到較高的菌體蛋白,提高了茶粕的利用價值[3]。因此,本實驗采用提取茶皂素(本課題組的專利技術(shù))后的茶粕為主要原料,利用實驗室自行篩選的一株產(chǎn)纖維素酶能力較強(qiáng)的粗壯脈紋孢菌(Neurospora.crassa)降解茶粕培養(yǎng)基粗纖維,以期在茶粕的動物飼料開發(fā)利用方面提供一種更為有效的途徑。

    響應(yīng)面分析(response surface methodology) 法是采用多元二次回歸方法作為函數(shù)估計的工具[4],將實驗中多因素與指標(biāo)的相互關(guān)系作近似擬合,可同時對影響生物產(chǎn)量的各因素水平及其交互作用進(jìn)行評價與優(yōu)化[5]。因此它能快速有效地確定多因子系統(tǒng)中的最優(yōu)條件,該法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于各種培養(yǎng)基及發(fā)酵條件的優(yōu)化[6]。本實驗在單因素試驗的基礎(chǔ)上,選出對粗壯脈紋孢菌降解茶粕培養(yǎng)基粗纖維具有顯著作用的4個因素的3個水平進(jìn)行Box-Behnken試驗,通過響應(yīng)面分析確定其最佳值、優(yōu)化工藝參數(shù)。

    1 材料與方法

    1.1 菌種

    粗壯脈紋孢菌(Neurospora.crassa)由本實驗室篩選保存。

    1.2 儀器與設(shè)備

    高壓蒸汽滅菌鍋、超凈工作臺、移液器、恒溫恒濕培養(yǎng)箱、電子天平、干燥箱、廣口瓶、調(diào)溫電熱套等。

    1.3 培養(yǎng)基

    斜面固體培養(yǎng)基:2%蛋白胨、 4%麥芽糖、1.5%~1.8%瓊脂,pH5.5~6.0。

    種子液培養(yǎng)基:葡萄糖10g、蛋白胨5g、 MgSO4·7H2O 0.5g、KH2PO41g、pH值自然,蒸餾水定容到1 L。

    1.4 方法

    1.4.1 種子培養(yǎng)

    從新鮮菌體活化培養(yǎng)基上取1環(huán)菌接入種子液培養(yǎng)基(30mL/250mL錐形瓶),于30℃、160r/min搖瓶培養(yǎng)3 6 h,備用。

    1.4.2 發(fā)酵方法

    在茶粕培養(yǎng)基中配入相應(yīng)比例的豆渣和米糠,裝入200mL的廣口瓶中,料層厚度控制在3~4cm,按不同的料水比加入水?dāng)噭颍邏簻缇?。接?mL/100g的種子液于固體培養(yǎng)基中,將廣口瓶置于恒溫恒濕箱中,在溫度為30℃,濕度為70%的條件下進(jìn)行好氧發(fā)酵[7]。

    1.4.3 含水量的測定

    茶粕培養(yǎng)基中配入豆渣和米糠后,加水浸潤,置于廣口瓶中,并用紗布和報紙蓋上,放入高壓滅菌鍋后,121℃滅菌30min。滅菌后的培養(yǎng)基105℃烘干至質(zhì)量恒定[8],含水量的計算公式如下:

    式中:m1為滅菌后培養(yǎng)基的質(zhì)量;m2為干燥后培養(yǎng)基的質(zhì)量。

    1.4.4 粗纖維的含量測定及降解率的計算

    茶粕固態(tài)發(fā)酵樣品粉碎過篩孔尺寸為0.425mm的篩子,混勻后先用煮沸的體積分?jǐn)?shù)為1.25%的稀硫酸處理,以去除其中的糖、淀粉、果膠等酸溶性物質(zhì),再用煮沸的體積分?jǐn)?shù)為1.25%的氫氧化鈉溶液處理,以除去蛋白、脂肪等堿溶性物質(zhì)。最后用95%乙醇和無水乙醚處理除去單寧、色素以及殘余的脂肪,105℃烘干后所得殘渣即為粗纖維[9]。

    式中:m1為培養(yǎng)基發(fā)酵前粗纖維總質(zhì)量/g;m2為培養(yǎng)基發(fā)酵后粗纖維總質(zhì)量/g。

    1.5 粗壯脈紋胞菌降解茶粕培養(yǎng)基粗纖維的發(fā)酵條件優(yōu)化

    1.5.1 單因素對茶粕培養(yǎng)基粗纖維降解率的影響

    影響粗壯脈紋胞菌生長及粗纖維降解率的因素很多[10],如添加的豆渣比例、米糠比例、培養(yǎng)基含水量、初始pH值及發(fā)酵時間等。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報道[11-12],選用豆渣10%、米糠20%、初始pH值自然、含水量68%、發(fā)酵時間72h為基本參數(shù)。確定一項最優(yōu)條件后,后續(xù)試驗均按前面的優(yōu)化值來進(jìn)行試驗。

    1.5.2 Box-Benhnken中心組合試驗

    在單因素試驗的基礎(chǔ)上,確定影響粗壯脈紋胞菌降解茶粕培養(yǎng)基粗纖維的顯著因素,采用Box-Benhnken試驗設(shè)計進(jìn)行發(fā)酵條件優(yōu)化[13]。得到的數(shù)據(jù)采用SAS 8.2軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析,當(dāng)P<0.05時為顯著性水平。

    1.5.3 驗證實驗

    將優(yōu)化實驗所得的數(shù)據(jù)與響應(yīng)面模型進(jìn)行回歸擬合,確定其極值點(diǎn)及其相應(yīng)自變量的取值,并進(jìn)行驗證實驗及可靠性分析。重復(fù)3次,用平均值進(jìn)行驗證比較。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 茶粕發(fā)酵過程中單因素對粗纖維降解率的影響

    2.1.1 豆渣比例對粗纖維降解率的影響

    圖1 豆渣比例對粗纖維降解率的影響Fig.1 Effect of soybean residue on the degradation rate of crude fiber

    如圖1所示,粗纖維降解率隨豆渣比例的增加而呈上升趨勢,當(dāng)向培養(yǎng)基中添加20%以上的豆渣時,粗纖維的降解率增幅減小,上升緩慢。為了多利用茶粕,故選擇豆渣比例為20%。

    2.1.2 米糠比例對粗纖維降解率的影響

    如圖2所示,粗纖維降解率隨米糠比例的增加,呈現(xiàn)先上升再下降的總體趨勢,在添加量為20%附近出現(xiàn)最大值。

    圖2 米糠比例對粗纖維降解率的影響Fig.2 Effect of rice bran on the degradation rate of crude fiber

    2.1.3 初始pH值對粗纖維降解率的影響

    如圖3所示,培養(yǎng)基的pH值會影響微生物的生長和酶的穩(wěn)定性,粗纖維降解率在初始pH6.0左右達(dá)到最大值,此后隨著pH值上升而逐漸降低,特別是pH值為8.0時,粗纖維降解率顯著降低。由于培養(yǎng)基的自然pH值在5~6之間,故選擇自然pH值發(fā)酵。

    2.1.4 含水量對粗纖維降解率的影響

    圖4 含水量對粗纖維降解率的影響Fig.4 Effect of water content on the degradation rate of crude fiber

    如圖4所示,粗纖維降解率隨培養(yǎng)基含水量的增加,呈現(xiàn)先上升再下降的趨勢,且增減幅度明顯,在含水量為70%附近達(dá)到最大值。初步確定含水量在70%時發(fā)酵效果最佳。

    2.1.5 發(fā)酵時間對粗纖維降解率的影響

    圖5 發(fā)酵時間對粗纖維降解率的影響Fig.5 Effect of fermentation time on the degradation rate of crude fiber

    如圖5所示,發(fā)酵時間是影響發(fā)酵產(chǎn)物中粗纖維含量的一個重要參數(shù)[14],主要取決于微生物的生長和代謝速率,還取決于基質(zhì)中的營養(yǎng)成分及內(nèi)部環(huán)境[15]。發(fā)酵時間太短,微生物不能充分利用碳源來生長,達(dá)不到理想的粗纖維降解效果;發(fā)酵時間太長,則生產(chǎn)周期變大,生產(chǎn)成本變高,而且容易滋生雜菌。在發(fā)酵初期,隨著發(fā)酵時間的延長,產(chǎn)品中粗纖維的含量逐漸減少,當(dāng)發(fā)酵時間為72h后,產(chǎn)品的粗纖維降解率增幅很低,故選用發(fā)酵時間72h左右為宜。

    2.2 響應(yīng)面分析法優(yōu)化粗纖維降解率工藝條件

    根據(jù)Box-Behnken的中心組合試驗設(shè)計原理,綜合單因素試驗所得結(jié)果,確定發(fā)酵pH值為自然,選取豆渣比例、米糠比例、含水量和發(fā)酵時間4個對粗纖維降解率影響顯著的因素,分別以X1、X2、X3和X4代表,每一個自變量的低、中、高試驗水平分別以-1、0、1進(jìn)行編碼(表1)。以茶粕培養(yǎng)基粗纖維降解率為響應(yīng)值(Y),在單因素試驗的基礎(chǔ)上采用四因素三水平的響應(yīng)面分析方法,試驗因素與水平設(shè)計見表1。

    表1 響應(yīng)面試驗因素與水平Table 1 Factors and levels of response surface methodology

    對豆渣比例X1、米糠比例X2、含水量X3和發(fā)酵時間X4作變換如下:X1=(A-20)/10,X2=(B-20)/10,X3=(C-70)/10,X4=(D-72)/12。以X1、X2、X3和X4為自變量, 以3次試驗所得粗纖維降解率的平均值為響應(yīng)值(Y),得到結(jié)果見表2,其中1~24是析因試驗,25~27是中心試驗,用來估計實驗誤差。

    表2 響應(yīng)面試驗設(shè)計及結(jié)果Table 2 Design and results of response surface analysis

    從表3的回歸分析結(jié)果可以看出,用上述的回歸模型描述各因素與響應(yīng)值之間的關(guān)系時,模型4個因素的P值均小于0.01,失擬項P=0.080434>0.05,表明該模型顯著;回歸方程的相關(guān)系數(shù)R2=0.9662,表明該模型與實際實驗擬合較好,因此該模型可用于該菌對茶粕培養(yǎng)基粗纖維降解的分析和預(yù)測?;貧w方程各項的方差分析結(jié)果還表明,自變量(豆渣比例、米糠比例、含水量和發(fā)酵時間)與響應(yīng)值(粗纖維降解率)之間線性關(guān)系極顯著(P<0.01);含水量對粗纖維降解率的曲面效應(yīng)極顯著;豆渣比例與米糠比例、豆渣比例與含水量的交互作用也極顯著;而X12、X22、X42、X1X4、X2X3、X2X4、X3X4的作用不顯著。

    表3 響應(yīng)面試驗回歸分析結(jié)果Table 3 Results of regression analysis

    對茶粕培養(yǎng)基粗纖維降解率模型進(jìn)行求導(dǎo)和解逆矩陣可以得到模型的極值點(diǎn),豆渣為29.38%、米糠為18.54%、含水量為72%、發(fā)酵時間74.9h時,此時模型預(yù)測的最大響應(yīng)值為48.65%。

    2.3 驗證實驗

    為了檢驗?zāi)P皖A(yù)測的準(zhǔn)確性,在上述響應(yīng)面分析得到的最優(yōu)化條件和原始菌體生長條件下進(jìn)行發(fā)酵實驗,重復(fù)3次實驗所得茶粕培養(yǎng)基粗纖維的降解率為48.36%,與模型預(yù)測的最佳值基本吻合。說明響應(yīng)面法優(yōu)化得到的發(fā)酵條件參數(shù)準(zhǔn)確可靠。

    3 討 論

    3.1 培養(yǎng)基一定的載氧能力有利于粗壯脈紋胞菌的生長

    單因素試驗表明粗纖維降解率隨豆渣比例的增加而呈上升趨勢,當(dāng)培養(yǎng)基中豆渣比例超過20%時,粗纖維的降解率增幅減小,上升緩慢;同樣粗纖維降解率隨米糠比例的增加,呈現(xiàn)先上升再下降的趨勢,在米糠比例20%附近出現(xiàn)最大值。響應(yīng)面優(yōu)化得到豆渣為29.38%、米糠為18.54%時,粗壯脈紋胞菌生長好、粗纖維降解率最大。粗壯脈紋胞菌為需氧菌,培養(yǎng)基一定的載氧能力有利于該菌的生長和發(fā)育;而豆渣富含淀粉和纖維、米糠也富含纖維,他們的添加可以改善培養(yǎng)基的載氧能力,因此蓬松的原料有利于該菌的生長。在固態(tài)發(fā)酵中,適宜的發(fā)酵含水量,使得基質(zhì)顆粒之間膨松有空隙,疏松度合適,有助于菌體從中獲得營養(yǎng)及氧氣的傳遞。但是過高的含水量會導(dǎo)致基質(zhì)黏結(jié)成團(tuán),通氣性下降,影響氧的傳遞,導(dǎo)致酶活下降;而含水量過低,水的活度下降,不利于物質(zhì)傳遞,從而抑制粗壯脈紋胞菌對粗纖維的降解過程。

    3.2 茶粕通過粗壯脈紋胞菌發(fā)酵是一種較好的飼料資源

    我國可利用的茶粕資源十分豐富,但目前對茶粕的研究報道,大多專注于活性物質(zhì)茶皂素的提取,而把茶粕發(fā)酵成飼料的報道較少。通過脫茶皂素加工工藝生產(chǎn)的茶粕是一種良好的飼料原料。它含有多種對動物生長發(fā)育有利的必需微量元素,其中Mg、Ca、Fe、Zn、K、Cu的含量分別為:2730、1230、268.4、29.7、14790、17.28mg/kg;而據(jù)劉彥明等[16]的研究報道,茶粕中的有害元素Pb、Cd 的含量卻很低或近于零。經(jīng)粗壯脈紋胞菌發(fā)酵生產(chǎn)的茶粕發(fā)酵產(chǎn)品,粗纖維含量降低,從初始的21.52%降至14.15%,部分纖維素和木質(zhì)素成為了易消化的單糖或?qū)δc道細(xì)菌有益生作用的低聚糖,經(jīng)檢測,可溶性糖含量由初始的7.6%提高至35.97%。發(fā)酵后的粗蛋白含量提高,從初始的12.82%提高至18.34%,茶粕中的非蛋白氮轉(zhuǎn)化為菌體真蛋白,產(chǎn)品的營養(yǎng)價值得到較大的提升。另外,粗壯脈紋胞菌是一株產(chǎn)β-胡蘿卜素能力較強(qiáng)的菌,其發(fā)酵后培養(yǎng)基中β-胡蘿卜素含量可達(dá)100mg/kg以上,這使茶粕發(fā)酵產(chǎn)品同時有望成為一種良好的蛋禽天然色素飼料??傊?,在動物生產(chǎn)中科學(xué)合理地使用茶粕發(fā)酵產(chǎn)品有利于緩解我國飼料資源緊缺的局面。

    [1]楊強(qiáng), 胡海波, 張石蕊, 等. 茶粕飼料資源開發(fā)及利用技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 飼料工業(yè), 2006, 27(19): 53-55.

    [2]周薇, 吳雪輝. 油茶綜合利用開發(fā)前景[J]. 中國農(nóng)村科技, 2006(10):21-23.

    [3]鄧桂蘭, 魏強(qiáng)華. 利用茶粕生產(chǎn)菌體蛋白飼料的研究[J]. 糧食與食品工業(yè), 2008, 15(3): 31-34.

    [4]王鴻, 鄧澤元, 劉蓉, 等. 響應(yīng)面法優(yōu)化山蕗菜根多糖的提取工藝[J].食品科學(xué), 2010, 31(2): 46-50.

    [5]VOHRA A, SATYANARAYANA T. Statistical optimization of the medium components by response surface methodology to enhance phytase production byPichia anomala[J]. Process Biochemistry, 2002, 37:999-1004.

    [6]ING L S, CHIA Y K, FENG C H, et al. Use of surface response methodology to optimize culture conditions for iturinAproduction byBacillus subtilisin solid-state fermentation[J]. Journal of the Chinese Institute of Chemical Engineers, 2008, 39: 635-643.

    [7]王立梅, 杜似娟, 鄭麗雪, 等. 響應(yīng)面法優(yōu)化高產(chǎn)蝦青素菌株的發(fā)酵條件[J]. 食品科學(xué), 2009, 30(21): 312-315.

    [8]SHARMA A, VIVEKANAND V, SINGH R P. Solid-state fermentation for gluconic acid production from sugarcane molasses byAspergillus nigerARNU-4 employing tea waste as the novel solid support[J].Bioresource Technology, 2008, 99: 3444-3450.

    [9]賈才華, 鄧澤元, 范亞葦, 等. 響應(yīng)面法優(yōu)化粗壯脈紋胞菌降解啤酒糟粗纖維的培養(yǎng)基[J]. 食品科學(xué), 2009, 30(21): 195-199.

    [10]張杰, 姜月, 程大友, 等. 甜菜固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)酒精的條件優(yōu)化[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報, 2009, 25(5): 72-75.

    [11]李強(qiáng), 鄭旭煦, 殷鐘意, 等. 白腐菌固態(tài)發(fā)酵中藥廢渣生產(chǎn)蛋白飼料工藝條件[J]. 三峽環(huán)境與生態(tài), 2009, 2(2): 36-39.

    [12]PATRICK G , PAUL M. The role of water in solid-state fermentation[J].Biochemical Engineering Journal, 2003, 13(2/3): 85-101.

    [13]BAS D, BOYAC I H. Modeling and optimization ability of response surface methodology[J]. Journal of Food Engineering, 2007, 78: 836-845.

    [14]王永紅, 冉偉, 張富國, 等. 混合菌種固體發(fā)酵菜生產(chǎn)氨基酸肥料的條件研究[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué), 2009, 42(10): 3530-3540.

    [15]方傳記, 陸兆新, 孫力軍, 等. 淀粉液化芽孢桿菌抗菌脂肽發(fā)酵培養(yǎng)基及酵條件的優(yōu)化[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué), 2008, 41(2): 533-539.

    [16]劉彥明, 楊宇, 王輝. 茶餅中茶皂素的提取和微量元素的測定[J]. 信陽師范學(xué)院學(xué)報, 2000, 13 (1): 21-23.

    Fermentation Processing of Fiber Degradation from Oil-tea-cake Residue byNeurospora. crassa

    XIAO Yu-juan,DENG Ze-yuan*,F(xiàn)AN Ya-wei,LI Jing,LIU Rong,HU Jiang-ning

    (State Key Laboratory of Food Science and Technology, Institute for Advanced Study, Nanchang University,Nanchang 330047, China)

    The fermentation processing for fiber degradation from the residue of oil-tea-cake after the extraction of tea saponin was investigated. According to results of single-factor experiments, soybean residue, rice bran, water content and fermentation time were selected for the Box-Behnken design to establish a quadric regression equation for describing the degradation of fiber.The optimal fermentation conditions were achieved by response surface analysis to be soybean residue of 29.38%, rice bran of 18.54%, water content of 72% and fermentation time of 74.9 h. Under the optimal fermentation conditions, the highest degradation of fiber reached up to 48.65%, which was consistent with 48.36% of the validated value.

    Neurospora. crassa;oil-tea-cake;fermentation processing;response surface methodology

    TS201.3

    A

    1002-6630(2010)23-0243-05

    2010-07-23

    2010年江西省科技重大專項;食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實驗室目標(biāo)導(dǎo)向課題(SKLF-MB-201003)

    肖玉娟(1986—),女,碩士研究生,主要從事發(fā)酵工程研究。E-mail:xiaoyujuan0520@163.com

    *通信作者:鄧澤元(1963—),男,教授,博士,主要從事脂肪酸及天然產(chǎn)物研究。E-mail:dengzy28@yahoo.com.cn

    猜你喜歡
    皂素豆渣米糠
    豆渣憶往
    豆渣變廢為寶
    茶皂素
    油茶籽粕中茶皂素的優(yōu)化提取及抑菌活性的研究
    豆渣混合粉面團(tuán)特性及饅頭品質(zhì)的影響研究
    油茶餅中茶皂素的分離及生物活性的研究
    用針線“補(bǔ)”
    化學(xué)法米糠穩(wěn)定化技術(shù)研究
    噴霧干燥法制備直投式霉豆渣發(fā)酵劑的研究
    中國釀造(2014年9期)2014-03-11 20:21:04
    脫脂米糠蛋白酶解物的制備及抗氧化性
    免费观看av网站的网址| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 日韩中字成人| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 精品久久久久久久久亚洲| 日日撸夜夜添| 久久精品综合一区二区三区| 亚洲最大成人av| 免费看美女性在线毛片视频| 一区二区三区四区激情视频| 欧美激情在线99| 成人无遮挡网站| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 在线免费十八禁| 久久人人爽人人片av| 成年免费大片在线观看| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 成人美女网站在线观看视频| 国产伦理片在线播放av一区| 黄色配什么色好看| 欧美区成人在线视频| 我的老师免费观看完整版| 精品熟女少妇av免费看| 日韩人妻高清精品专区| 十八禁网站网址无遮挡 | 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 国产高清三级在线| 久久久久久久大尺度免费视频| 女人被狂操c到高潮| 国产精品国产三级国产专区5o| 久久久久精品性色| 亚洲欧美清纯卡通| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产黄a三级三级三级人| 成人漫画全彩无遮挡| 日日撸夜夜添| 亚洲精品国产成人久久av| 激情 狠狠 欧美| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 日韩人妻高清精品专区| av在线蜜桃| 国内精品美女久久久久久| 我的老师免费观看完整版| 欧美最新免费一区二区三区| 波多野结衣巨乳人妻| 精品人妻熟女av久视频| 麻豆国产97在线/欧美| 日韩制服骚丝袜av| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 久久精品人妻少妇| 国产一区二区三区av在线| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲精品乱久久久久久| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 只有这里有精品99| 偷拍熟女少妇极品色| 麻豆成人午夜福利视频| 国产精品久久久久久久久免| 日韩av在线大香蕉| 精品久久久久久久久久久久久| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产精品一二三区在线看| 18禁动态无遮挡网站| 国产 一区 欧美 日韩| 国产成人午夜福利电影在线观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 欧美一级a爱片免费观看看| 麻豆av噜噜一区二区三区| 水蜜桃什么品种好| 91精品伊人久久大香线蕉| 一二三四中文在线观看免费高清| 在线观看免费高清a一片| 在线观看美女被高潮喷水网站| 美女黄网站色视频| 亚洲av中文av极速乱| 人体艺术视频欧美日本| 三级经典国产精品| 亚洲成人av在线免费| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 高清日韩中文字幕在线| 99九九线精品视频在线观看视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 国产淫片久久久久久久久| 国产成人精品一,二区| 97热精品久久久久久| 如何舔出高潮| 精品国产露脸久久av麻豆 | 青春草国产在线视频| 在线播放无遮挡| av播播在线观看一区| 国国产精品蜜臀av免费| 午夜老司机福利剧场| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲精品成人久久久久久| 99热网站在线观看| 天美传媒精品一区二区| 日本免费a在线| 欧美zozozo另类| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲国产最新在线播放| 亚洲国产最新在线播放| 午夜福利视频1000在线观看| 男人爽女人下面视频在线观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久久久国产网址| 超碰97精品在线观看| 男女视频在线观看网站免费| 久久久久久久午夜电影| 久久精品国产自在天天线| 国产av在哪里看| 日本免费在线观看一区| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 大陆偷拍与自拍| av一本久久久久| 麻豆国产97在线/欧美| 精品熟女少妇av免费看| 久久精品人妻少妇| 欧美精品国产亚洲| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 精品久久久精品久久久| 人妻系列 视频| 日韩视频在线欧美| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲国产av新网站| 亚洲图色成人| 久久这里有精品视频免费| 亚洲成色77777| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 日韩大片免费观看网站| 嫩草影院新地址| 亚洲av电影不卡..在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 免费av毛片视频| 美女cb高潮喷水在线观看| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产成人freesex在线| 国产一区二区三区综合在线观看 | 一区二区三区四区激情视频| 日韩欧美精品免费久久| 亚洲高清免费不卡视频| 三级毛片av免费| 日本一本二区三区精品| 久久久久久久久久成人| 亚洲av日韩在线播放| eeuss影院久久| 99九九线精品视频在线观看视频| 中文字幕免费在线视频6| 久久久久久久久久久免费av| 午夜激情久久久久久久| 人妻系列 视频| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 精品久久久精品久久久| 中国美白少妇内射xxxbb| 黄片wwwwww| 日日干狠狠操夜夜爽| 91久久精品国产一区二区成人| .国产精品久久| 国产男女超爽视频在线观看| 国产精品久久久久久精品电影| 欧美成人a在线观看| 特大巨黑吊av在线直播| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产探花在线观看一区二区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 成人美女网站在线观看视频| 国产色婷婷99| 精品久久久噜噜| 美女被艹到高潮喷水动态| 午夜免费观看性视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 夫妻性生交免费视频一级片| 三级国产精品欧美在线观看| 婷婷色麻豆天堂久久| 2022亚洲国产成人精品| 男人舔奶头视频| 精华霜和精华液先用哪个| 1000部很黄的大片| 成人亚洲精品一区在线观看 | 少妇丰满av| 欧美人与善性xxx| 免费大片黄手机在线观看| 男人舔奶头视频| 国产黄a三级三级三级人| 国产精品嫩草影院av在线观看| 又爽又黄a免费视频| 不卡视频在线观看欧美| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 国产精品熟女久久久久浪| 国产在线男女| 男女啪啪激烈高潮av片| 一级a做视频免费观看| 在线免费观看不下载黄p国产| 伊人久久精品亚洲午夜| 欧美另类一区| 国产大屁股一区二区在线视频| 一区二区三区高清视频在线| 午夜福利视频精品| 91精品一卡2卡3卡4卡| 日本wwww免费看| 成年人午夜在线观看视频 | 国产一区亚洲一区在线观看| 国产一级毛片在线| 国产精品综合久久久久久久免费| 久久99热这里只频精品6学生| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产一区有黄有色的免费视频 | 五月天丁香电影| 99re6热这里在线精品视频| 免费电影在线观看免费观看| 成年免费大片在线观看| 两个人的视频大全免费| 国产在线一区二区三区精| 精品人妻偷拍中文字幕| 春色校园在线视频观看| 亚洲最大成人中文| 久久精品综合一区二区三区| av在线老鸭窝| 少妇被粗大猛烈的视频| 秋霞在线观看毛片| 国产午夜福利久久久久久| 免费看美女性在线毛片视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 亚洲欧美一区二区三区国产| 色网站视频免费| 综合色av麻豆| 青春草视频在线免费观看| 久久国产乱子免费精品| 秋霞在线观看毛片| 大话2 男鬼变身卡| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| kizo精华| 久久人人爽人人爽人人片va| 丝瓜视频免费看黄片| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产精品熟女久久久久浪| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产亚洲最大av| av线在线观看网站| 五月伊人婷婷丁香| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 亚洲成人av在线免费| 一级二级三级毛片免费看| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲欧美精品专区久久| 能在线免费观看的黄片| 永久网站在线| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 麻豆成人av视频| 在线免费观看的www视频| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 嫩草影院入口| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲国产欧美在线一区| 午夜久久久久精精品| av播播在线观看一区| 久久久久网色| 少妇的逼水好多| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 亚洲自偷自拍三级| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 午夜精品一区二区三区免费看| 波野结衣二区三区在线| 国产精品久久久久久精品电影| 久久国内精品自在自线图片| 日日啪夜夜爽| 黄色配什么色好看| 两个人的视频大全免费| 国产成人福利小说| 国产成人aa在线观看| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲自拍偷在线| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产单亲对白刺激| 亚洲最大成人中文| 国产精品无大码| 国产成年人精品一区二区| 在线观看免费高清a一片| 成年av动漫网址| 精品不卡国产一区二区三区| 国产成年人精品一区二区| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 精品国产三级普通话版| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲高清免费不卡视频| 国产精品.久久久| 99九九线精品视频在线观看视频| 久久久久久久久中文| 亚洲18禁久久av| 欧美高清性xxxxhd video| 午夜福利在线在线| 成人av在线播放网站| 插逼视频在线观看| 在线观看免费高清a一片| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲在线观看片| 精品国产三级普通话版| 亚洲人成网站在线播| 人人妻人人澡欧美一区二区| 国产麻豆成人av免费视频| 免费观看av网站的网址| 高清欧美精品videossex| 伦理电影大哥的女人| 青青草视频在线视频观看| 亚洲在线自拍视频| 蜜臀久久99精品久久宅男| 麻豆成人av视频| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲精品日本国产第一区| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲乱码一区二区免费版| 午夜福利视频精品| 精品一区二区三卡| 国产成人免费观看mmmm| 99久久人妻综合| 国产一区二区在线观看日韩| 国产v大片淫在线免费观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国产成人91sexporn| 91av网一区二区| 成人漫画全彩无遮挡| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 免费大片黄手机在线观看| 久久久久久久久大av| 亚洲av免费高清在线观看| 日韩视频在线欧美| 亚洲精品,欧美精品| 91在线精品国自产拍蜜月| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 成人毛片a级毛片在线播放| 午夜福利在线观看吧| 免费无遮挡裸体视频| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 色5月婷婷丁香| 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲三级黄色毛片| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 最近最新中文字幕大全电影3| 精品一区二区免费观看| 直男gayav资源| 国产不卡一卡二| 国产精品蜜桃在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 99久国产av精品| 亚洲乱码一区二区免费版| 日韩一区二区三区影片| 国产av在哪里看| 秋霞在线观看毛片| 久久99精品国语久久久| 国产乱来视频区| 2022亚洲国产成人精品| 麻豆av噜噜一区二区三区| 2022亚洲国产成人精品| 色视频www国产| 免费看a级黄色片| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产永久视频网站| 最近的中文字幕免费完整| 在线观看av片永久免费下载| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 人妻少妇偷人精品九色| 久久久亚洲精品成人影院| 国产美女午夜福利| 69人妻影院| 免费看光身美女| 久久99热这里只频精品6学生| 国产精品99久久久久久久久| 日本爱情动作片www.在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 国产黄色小视频在线观看| 特级一级黄色大片| 一二三四中文在线观看免费高清| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 精品久久久久久成人av| 国产伦精品一区二区三区视频9| 日韩视频在线欧美| 亚洲国产av新网站| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲精品乱久久久久久| 成人一区二区视频在线观看| 久久人人爽人人爽人人片va| 午夜视频国产福利| 色哟哟·www| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 激情五月婷婷亚洲| 一级毛片aaaaaa免费看小| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 99热这里只有是精品50| 精品久久国产蜜桃| 久久亚洲国产成人精品v| 免费看美女性在线毛片视频| www.av在线官网国产| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 岛国毛片在线播放| 一区二区三区乱码不卡18| 九九在线视频观看精品| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 搞女人的毛片| 亚洲国产精品成人综合色| 欧美激情久久久久久爽电影| 能在线免费看毛片的网站| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 免费大片18禁| 黄色一级大片看看| 最后的刺客免费高清国语| 国产老妇女一区| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 成年女人看的毛片在线观看| 久99久视频精品免费| 日日啪夜夜撸| 亚洲av不卡在线观看| 婷婷六月久久综合丁香| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产亚洲91精品色在线| 日韩在线高清观看一区二区三区| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 精品少妇黑人巨大在线播放| 美女内射精品一级片tv| 精品熟女少妇av免费看| 少妇人妻精品综合一区二区| 免费观看a级毛片全部| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 日日撸夜夜添| 美女被艹到高潮喷水动态| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 免费看av在线观看网站| 只有这里有精品99| 婷婷色av中文字幕| 国产精品av视频在线免费观看| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲av成人av| 99久久精品一区二区三区| 舔av片在线| 少妇熟女aⅴ在线视频| 亚洲国产精品成人综合色| 欧美区成人在线视频| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 欧美 日韩 精品 国产| 国产精品av视频在线免费观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产伦理片在线播放av一区| av卡一久久| 高清午夜精品一区二区三区| 欧美xxxx性猛交bbbb| 日本与韩国留学比较| 午夜精品国产一区二区电影 | 国产成人福利小说| 欧美激情国产日韩精品一区| videossex国产| av在线蜜桃| 三级国产精品片| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产成人a区在线观看| 久久久久久久午夜电影| 国内精品一区二区在线观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲成人av在线免费| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 网址你懂的国产日韩在线| 综合色丁香网| 波多野结衣巨乳人妻| 免费av毛片视频| 亚洲久久久久久中文字幕| 亚洲欧美日韩无卡精品| 少妇人妻精品综合一区二区| 亚洲av日韩在线播放| 精品久久久久久久末码| 精品少妇黑人巨大在线播放| 中国国产av一级| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲18禁久久av| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲自拍偷在线| 久99久视频精品免费| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 少妇裸体淫交视频免费看高清| 波多野结衣巨乳人妻| 日韩三级伦理在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 久久国产乱子免费精品| 国产精品国产三级国产专区5o| 三级国产精品欧美在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 3wmmmm亚洲av在线观看| 国产在视频线在精品| 日韩av免费高清视频| 特级一级黄色大片| 日本一二三区视频观看| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲精品一区蜜桃| a级毛片免费高清观看在线播放| 九草在线视频观看| 亚洲精品日本国产第一区| 亚洲自拍偷在线| videos熟女内射| 激情五月婷婷亚洲| h日本视频在线播放| 精品欧美国产一区二区三| 久久99精品国语久久久| 天堂影院成人在线观看| 激情 狠狠 欧美| 国产精品一区二区在线观看99 | 欧美最新免费一区二区三区| 国产成人aa在线观看| 久久精品国产自在天天线| 国产免费又黄又爽又色| 午夜亚洲福利在线播放| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 99热这里只有是精品在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 午夜免费观看性视频| 69av精品久久久久久| 亚洲精品aⅴ在线观看| 国产精品久久久久久久久免| 国产男人的电影天堂91| 天天一区二区日本电影三级| 一本久久精品| 日日啪夜夜撸| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 日韩强制内射视频| 在线a可以看的网站| 99热6这里只有精品| 深夜a级毛片| 丝袜喷水一区| 视频中文字幕在线观看| 欧美xxⅹ黑人| 91精品国产九色| 国产亚洲91精品色在线| 久久鲁丝午夜福利片| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 男人和女人高潮做爰伦理| 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲天堂国产精品一区在线| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产精品久久久久久久电影| 麻豆av噜噜一区二区三区| 日韩欧美三级三区| 亚洲无线观看免费| 国产在视频线精品| 久久久久久久久久黄片| 免费看不卡的av| 欧美成人一区二区免费高清观看| 欧美日韩综合久久久久久| 久久精品国产亚洲网站| 在线免费观看的www视频| 国产精品99久久久久久久久| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲精品成人久久久久久| 成人一区二区视频在线观看| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲精品视频女| 天堂影院成人在线观看| 99九九线精品视频在线观看视频| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 一个人观看的视频www高清免费观看| 久久久久久九九精品二区国产| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 久久久国产一区二区| 亚洲色图av天堂| 免费在线观看成人毛片| 久久久久久久久久黄片| 少妇熟女aⅴ在线视频| 乱系列少妇在线播放| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 少妇的逼水好多| 插阴视频在线观看视频| 国产 一区精品| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲高清免费不卡视频| 人人妻人人澡欧美一区二区| 精品久久久噜噜| 国产免费视频播放在线视频 | 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 在线a可以看的网站| 干丝袜人妻中文字幕| 国产av不卡久久| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲成人久久爱视频| 婷婷六月久久综合丁香| 人妻一区二区av| av女优亚洲男人天堂| 精品久久久久久电影网| 国产亚洲精品av在线| 久久久色成人| 婷婷六月久久综合丁香| 国产成人一区二区在线| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 九草在线视频观看| 三级毛片av免费| 爱豆传媒免费全集在线观看| 精品酒店卫生间| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲经典国产精华液单| 国产中年淑女户外野战色| 在线观看一区二区三区| 乱码一卡2卡4卡精品|