清瘟敗毒飲對(duì)溫病暑熱證大鼠基本生命體征的影響*

于征淼 許慶文 龐增園 周信杰 黎興鍵

靜脈注射脂多糖是一種常用的炎癥動(dòng)物模型制作方法，常用于制作全身炎癥反應(yīng)綜合征、內(nèi)毒素休克等重癥模型[1，2]。本研究采用高溫環(huán)境、醋酸鉛致敏和靜脈注射脂多糖制作大鼠溫病暑熱證模型。清瘟敗毒飲由清代溫疫學(xué)家余霖創(chuàng)立，具有清氣瀉火、泄熱保陰、涼血解毒之功，方中石膏用量極大。本研究觀察含有不同劑量生石膏的清瘟敗毒飲對(duì)暑熱證大鼠生命體征的影響?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 （1）試驗(yàn)藥物：清瘟敗毒飲，組方為生石膏小劑量15g、大劑量 100g，生地黃 7.5g，水牛角 15g，黃連 2.5g，梔子 5g，桔梗 5g，黃芩 5g，知母 5g，赤芍 5g，玄參 5g，連翹 5g，甘草 5g，丹皮5g，竹葉5g。藥材均購(gòu)自廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥房。生石膏、水牛角加入300mL水中，同時(shí)以250mL水浸泡余藥，先煎生石膏、水牛角，以武火將藥煮沸后再以文火煎40min，然后加入余藥及浸泡水，再次先武后文煎40min，約得75mL藥液（小劑量清瘟敗毒飲含生藥1.20g/mL，其中含生石膏0.20g/mL；大劑量清蘊(yùn)敗毒飲含生藥2.33g/mL，其中含生石膏1.33g/mL），置入4℃冰箱保存（≤3d），實(shí)驗(yàn)前加熱至40℃。（2）動(dòng)物：雄性SD大鼠86只（合格證號(hào)：SCXK粵2008-0020，粵監(jiān)證字：2008A002），SPF級(jí)，購(gòu)自廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，飼養(yǎng)于廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院SPF動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，恒溫（26±2）℃。實(shí)驗(yàn)前2d，每日將動(dòng)物置于人工氣候箱內(nèi)6h，設(shè)定溫度（32±0.5）℃，濕度（80±5）％，每日其余18h置于室溫（30±2）℃，濕度（70±15）％的實(shí)驗(yàn)室中飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)前8h禁止動(dòng)物進(jìn)食，實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物體質(zhì)量（325±31）g。（3）試劑：脂多糖O55：B5（Sigma公司），使用生理鹽水配置成 10mg/mL。（4）儀器：LRH-550-GSI智能型人工氣候箱（韶關(guān)市泰宏醫(yī)療器械公司），RM-6000型生理多導(dǎo)儀（日本光電公司）。

1.2 方法 將86只大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、休克對(duì)照組、小劑量清瘟敗毒飲組各21只，大劑量清瘟敗毒飲組23只?？瞻讓?duì)照組、休克對(duì)照組予以生理鹽水灌胃（13mL/kg），小劑量組、大劑量組分別予含有小、大劑量生石膏的清瘟敗毒飲灌胃（13mL/kg）。灌胃后15min腹腔注射10％水合氯醛（3.5mL/kg）麻醉，2h后追加1/3劑量以延長(zhǎng)麻醉效果。頸部正中切口，逐層分離暴露左側(cè)頸總動(dòng)脈，剝離迷走神經(jīng)，左頸總動(dòng)脈插動(dòng)脈導(dǎo)管，接肝素帽，肝素鹽水（125U/mL）抗凝，連接壓力換能器與生理多導(dǎo)儀，監(jiān)測(cè)血壓、脈搏。動(dòng)物麻醉和插管操作完畢后，尾靜脈注射25mg/mL醋酸鉛1mL/kg（空白對(duì)照組為等量生理鹽水），靜置穩(wěn)定30min后，再由尾靜脈注射10mg/mL脂多糖15mg/kg（空白對(duì)照組為等量生理鹽水）。

1.3 檢測(cè)指標(biāo) 注射脂多糖前35、5min和注射脂多糖后30min、1h分別測(cè)量大鼠的肛溫、脈搏、呼吸、收縮壓、舒張壓和脈壓差；注射脂多糖后5、10、20min分別測(cè)量大鼠的脈搏、收縮壓、舒張壓和脈壓差。實(shí)驗(yàn)完畢后處死動(dòng)物，取肺臟和肝臟標(biāo)本進(jìn)行病理檢查。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，采用方差分析。

2 結(jié)果

2.1 各組生命體征比較 見表1～表6。結(jié)果示不同組別之間肛溫差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），不同時(shí)點(diǎn)肛溫差別明顯（P＜0.01）。不同組別之間脈搏相近（P＞0.05），不同時(shí)點(diǎn)脈搏的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。不同組別之間呼吸頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），其中大劑量清瘟敗毒飲組與其余3組在不同時(shí)點(diǎn)間呼吸頻率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且以與休克對(duì)照組之間為著（P＜0.05）。不同組別之間收縮壓、舒張壓相近（P＞0.05），不同時(shí)點(diǎn)間收縮壓、舒張壓的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。不同組別之間脈壓差相近（P＞0.05）；不同時(shí)點(diǎn)間脈壓差的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表1 各組肛溫比較（℃± s）

表1 各組肛溫比較（℃± s）

與注射脂多糖前35min相比，*P＜0.01；與注射脂多糖前5min相比，△P＜0.01；與注射脂多糖后30min相比，▲P＜0.01。下同

組 別空白對(duì)照組休克對(duì)照組小劑量清瘟敗毒飲組大劑量清瘟敗毒飲組n 21 21 21 23-35min 36.6±0.5 36.7±0.6 36.6±0.6 37.1±0.7-5min 35.7±0.6*35.9±0.6*35.8±0.7*36.3±0.9*▲30min 35.3±0.7*35.5±1.1*35.1±0.8*△35.7±0.9*1h 35.1±0.7*△35.2±0.8*△35.1±0.8*△35.6±1.0*△▲

2.2 各組病理檢查結(jié)果比較 休克對(duì)照組動(dòng)物可見肺急性炎癥反應(yīng)，肺泡間隔增厚，血管充血，炎細(xì)胞及紅細(xì)胞滲出，部分肺泡擴(kuò)張，肝細(xì)胞輕度水腫，見較多脂肪空泡，肝竇及肝索結(jié)構(gòu)基本清晰；小劑量清瘟敗毒飲組可見肺泡間隔增厚，血管充血，見炎細(xì)胞及紅細(xì)胞滲出，肝組織結(jié)構(gòu)基本正常，肝竇及肝索結(jié)構(gòu)清晰，未見細(xì)胞水腫、脂肪變及壞死；大劑量清瘟敗毒飲組的肺泡大小一致，間隔均勻，肺組織結(jié)構(gòu)基本正常，肝竇及肝索結(jié)構(gòu)清晰，未見細(xì)胞水腫、脂肪變及壞死。

表2 各組脈搏比較（次/min，±s）

表2 各組脈搏比較（次/min，±s）

與注射脂多糖后5min相比，○P＜0.01；與注射脂多糖后10min相比，●P＜0.01；與注射脂多糖后20min相比，□P ＜0.01。下同

組 別空白對(duì)照組休克對(duì)照組小劑量清瘟敗毒飲組大劑量清瘟敗毒飲組n 21 21 21 23-35min 421±50 418±47 425±74 433±54-5min 411±49*421±40*420±56*435±45 5min 430±50*△432±29*△413±34*△439±35*△10min 420±39△○426±23*△○413±35*△439±36*△20min 417±43*△○●424±24*△○●415±37*△○●435±35*○●30min 420±38△○●425±30*△○415±39*△○●440±38*△□1h 424±40*△○●□▲455±19*△○●□▲433±30*△○●□▲456±32*△○●□▲

3 討論

清瘟敗毒飲是氣血兩清法的代表方劑。余霖用其治療瘟疫，“每每投之，百發(fā)百中”。該方在歷史上為王孟英、張錫純等多位醫(yī)家所推崇。近年臨床研究證明該方治療流行性出血熱、流行性腦脊髓膜炎、重癥流感及傳染性非典型肺炎等疾病效果良好[3～6]。清瘟敗毒飲可以通過(guò)拮抗血小板降低及高黏綜合征，調(diào)整cAMP、cGMP的比值，減輕臟器組織病理?yè)p害等途徑治療內(nèi)毒素所誘發(fā)的家兔氣血兩燔證[7]。

為了探明清瘟敗毒飲的作用機(jī)制，本研究對(duì)動(dòng)物模型進(jìn)行改良，通過(guò)高溫環(huán)境、醋酸鉛致敏和靜脈注射脂多糖的綜合方法制作了溫病暑熱證模型，通過(guò)頸總動(dòng)脈置入導(dǎo)管，全面系統(tǒng)地觀察了清瘟敗毒飲對(duì)模型大鼠基本生命體征的動(dòng)態(tài)影響。結(jié)果表明，大劑量清瘟敗毒飲能夠增快溫病暑熱證大鼠模型的呼吸頻率，但對(duì)肛溫、脈搏、收縮壓、舒張壓和脈壓差影響不大。各組模型大鼠不同時(shí)點(diǎn)生命體征之間差異顯著，隨著時(shí)間的推移，肛溫逐漸下降，注射脂多糖1h時(shí)脈搏較初始值增快，空白對(duì)照組的呼吸逐漸減慢，其他3組的呼吸則趨于增快，收縮壓、舒張壓和脈壓差在注射醋酸鉛（空白對(duì)照組為等量生理鹽水）后多呈增高趨勢(shì)，而在注射脂多糖（空白對(duì)照組為等量生理鹽水）后多進(jìn)一步增高。對(duì)于所有的生命體征來(lái)說(shuō)，組別與時(shí)間之間均無(wú)交互效應(yīng)。

表6 各組脈壓差比較（mmHg，± s）

表6 各組脈壓差比較（mmHg，± s）

組 別空白對(duì)照組休克對(duì)照組小劑量清瘟敗毒飲組大劑量清瘟敗毒飲組n 21 21 21 23 35min 20±7 22±7 24±11 21±7-5min 22±7*25±10*27±13*23±7*5min 23±7*24±8*27±15*21±7△10min 22±6*25±10*27±14*22±7 20min 24±6*△●25±10*26±12*24±8*○●30min 24±6*△●24±6*28±11*□25±8*△○●1h 26±6*△○●□▲27±8*△○●□▲28±10*□28±8*△○●□▲

表5 各組舒張壓的動(dòng)態(tài)影響（mmHg，±s）

表5 各組舒張壓的動(dòng)態(tài)影響（mmHg，±s）

組 別空白對(duì)照組休克對(duì)照組小劑量清瘟敗毒飲組大劑量清瘟敗毒飲組n 21 21 21 23-35min 76±19 73±14 70±12 76±15-5min 74±15*75±16*71±15 77±15 5min 77±16△78±17*△69±16△78±16*10min 78±16*△80±13*△○71±14○79±17*△20min 75±15○●77±15*△●70±12 75±17△○●30min 74±14*○●74±14○●□68±13*△●□75±16△○●1h 76±13△●▲79±15*△□▲72±14*○□▲75±15△○●

表4 各組收縮壓的動(dòng)態(tài)影響（mmHg，± s）

表4 各組收縮壓的動(dòng)態(tài)影響（mmHg，± s）

組 別空白對(duì)照組休克對(duì)照組小劑量清瘟敗毒飲組大劑量清瘟敗毒飲組n 21 21 21 23-35min 96±17 95±14 94±12 97±15-5min 96±14 101±15*98±13*100±16*5min 100±15*△102±16*96±18*△○100±15*10min 101±17*△105±15*△○99±14*100±17*20min 99±16*△○102±17*●95±12△○●99±17*30min 98±14*△○●□98±15*△○●□96±10*△○●100±16*1h 102±14*△○□▲105±20*△○□▲100±15*△○□▲103±15*△○●□▲

表3 各組呼吸頻率比較（次/min，±s）

表3 各組呼吸頻率比較（次/min，±s）

與大劑量清瘟敗毒飲組相比，◇P＜0.05，◆P＜0.01

組別空白對(duì)照組休克對(duì)照組小劑量清瘟敗毒飲組大劑量清瘟敗毒飲組n 21 21 21 23-35min 77±10◇71±10◆73±11◇79±12-5min 76±8◇72±11◆78±15*◇85±15*30min 74±7*△◇70±9△◆76±14*△◇80±11△1h 74±9*△◆74±9*△▲◆77±13*◇85±15*▲

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