玫瑰和月季總黃酮含量對(duì)比研究

王 敏，邵冬梅，李海燕，李 雙，肖 懷

（大理學(xué)院藥學(xué)院，云南大理 671000）

玫瑰和月季總黃酮含量對(duì)比研究

王 敏，邵冬梅，李海燕，李 雙，肖 懷*

（大理學(xué)院藥學(xué)院，云南大理 671000）

目的：用紫外可見分光光度法對(duì)玫瑰、月季中總黃酮含量進(jìn)行測定和比較。方法：采用75%乙醇超聲提取玫瑰、月季中總黃酮，以蘆丁為對(duì)照，AlCl3顯色法測定總黃酮含量。結(jié)果：加樣回收率為102.5%，RSD為2.2%。野生及種植玫瑰、月季中總黃酮含量分別為1.94%、0.80%和2.79%。結(jié)論：該方法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，可為玫瑰、月季等觀賞植物的藥用研究提供一定依據(jù)。

玫瑰；月季；總黃酮；含量測定

玫瑰（Rosa rugosa）、月季（Rosa chinensis）均屬薔微科（Rosaceae）薔微屬（Rosa）落葉灌木，常作為觀賞類植物，多以花蕾入藥，其根和葉也有藥用。玫瑰花利肺膽，辟邪惡之氣，食之芳香甘美，令人神爽〔1〕，并且還能舒肝理氣、活血調(diào)經(jīng)，可用于胸悶，胃脘脹痛，吐血咳血，月經(jīng)不調(diào)等〔2〕。月季具有活血調(diào)經(jīng)的功效，用于治療月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)〔3〕。它們的花蕾還常用于養(yǎng)生保健，具有美容養(yǎng)顏的功效。二者皆含黃酮類物質(zhì)，該類物質(zhì)有抗衰老、抗癌、降血脂、增強(qiáng)機(jī)體免疫系統(tǒng)功能等多種生理活性。通過查閱文獻(xiàn)，未見對(duì)二者黃酮含量進(jìn)行比較的報(bào)道，因此對(duì)玫瑰、月季總黃酮含量進(jìn)行了測定和比較，為更有效、經(jīng)濟(jì)地開發(fā)利用該類植物提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 SY-8200T超聲提取器（上海聲源超聲波儀器設(shè)備有限公司產(chǎn)）；TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司產(chǎn)）；FA-2004N電子分析天平（上海有限公司產(chǎn)）。

1.2 試劑 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所產(chǎn)，批號(hào)：100080—200707）；乙醇，三氯化鋁（AlCl3）為分析純，水為重蒸水。

1.3 材料 野生玫瑰（1號(hào)）購自大理市集盛堂藥房，栽培玫瑰（2號(hào)）、栽培月季（3號(hào)）購買自鮮花市場，自然風(fēng)干。

2 方法和結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取于80℃干燥至恒重的蘆丁10.7mg，用75%的乙醇溶解，定容于100mL量瓶中，備用。

2.2 樣品溶液的制備 藥材干燥至恒重，粉碎，精密稱取約1.0 g至錐形瓶中，用75%乙醇各15mL超聲提取3次，每次30min，過濾，合并濾液，定容到50mL量瓶中，再精密量取1.50mL于25mL量瓶中，75%乙醇定容，即得樣品溶液。

2.3 吸光度測定 每個(gè)樣品溶液分別取10.00 mL加入5%AlCl3水溶液1mL顯色30min后，在411 nm處測定吸光度，空白對(duì)照為樣品溶液加水1mL〔4〕。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密量取蘆丁對(duì)照品液各2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL于25 mL量瓶中，75%的乙醇定容。依據(jù)“2.3”項(xiàng)測定吸光度。以25mL中蘆丁總量（mg）對(duì)吸光度求得回歸方程為：Y=0.844 9X+0.014 2，r=0.999 6。結(jié)果表明：蘆丁對(duì)照品在0.214～1.070 mg內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 顯色穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取1號(hào)樣品約1.0 g，按“2.2”項(xiàng)方法進(jìn)行提取，按“2.3”項(xiàng)下的測定方法，加入顯色劑30min后開始測定吸光度，每隔10 min測定一次，測60min，RSD為0.8%（n=6），說明樣品顯色后在30~90min內(nèi)比較穩(wěn)定。

2.6 儀器精密度試驗(yàn) 取供試溶液，按“2.3”項(xiàng)下的測定方法（空白不變）重復(fù)測定5次，吸光度RSD為0.9%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取1號(hào)樣品5份，按“2.1”項(xiàng)和“2.3”項(xiàng)操作，吸光度RSD為2.0%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取1號(hào)樣品（總黃酮含量1.94%）5份，分別加入相同量的蘆丁對(duì)照品4.32mg（精密稱取蘆丁0.024 g，75%的乙醇定容至50 mL，5份樣品中各加入9.0 mL），按“2.2”，“2.3”項(xiàng)操作，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率結(jié)果

2.9 玫瑰和月季中黃酮含量測定 分別取1號(hào)、2號(hào)和3號(hào)樣品，平行稱取3份，用“2.2”方法進(jìn)行提取，“2.3”方法測定各自吸光度，每份樣品平行測定3次，取其平均值，代入回歸方程計(jì)算總黃酮含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果

從表2結(jié)果看，總黃酮含量以月季最高，野生玫瑰高于栽培玫瑰。

3 討論

3.1 顯色方法的選擇 總黃酮含量測定中常采用供試液加5%亞硝酸鈉、10%硝酸鋁及氫氧化鈉〔5〕顯色后進(jìn)行比色測定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)此方法顯色后樣品溶液吸光度不穩(wěn)定，隨時(shí)間變化較大。后改為單獨(dú)用5%AlCl3〔6〕顯色，顯色后在30~90 min內(nèi)吸光度較穩(wěn)定。

3.2 測定波長的選擇 文獻(xiàn)〔5-6〕報(bào)道總黃酮顯色后可在272.5 nm、510 nm等多個(gè)波長處測定吸光度。通過對(duì)顯色前后的樣品和對(duì)照品在190~600 nm范圍內(nèi)掃描，結(jié)果見圖1。發(fā)現(xiàn)顯色后的蘆丁對(duì)照品和樣品最大吸收略有不同，分別為411 nm和391 nm，未顯色的蘆丁和樣品在相應(yīng)波長處吸收值都很小，樣品顯色后411 nm處也有較大吸收，所以我們選擇蘆丁顯色后的最大吸收波長411 nm為檢測波長。為消除樣品中其他雜質(zhì)吸收帶來的誤差，采用不加顯色劑的樣品溶液作為空白對(duì)照。

圖1 樣品、顯色前后吸收光譜圖

3.3 提取條件選擇 樣品溶液的制備中，分別對(duì)提取溶劑、提取次數(shù)和提取時(shí)間進(jìn)行了選擇，發(fā)現(xiàn)用75%的乙醇作溶劑比無水乙醇提取率要高，超聲提取3次，每次30min能基本提取完全。本實(shí)驗(yàn)提取條件為75%乙醇各15 mL超聲提取3次，每次30min。

3.4 顯色時(shí)間及穩(wěn)定性的考察 樣品加入顯色劑顯色5min后，開始測定其吸光度，每隔5min測定一次，發(fā)現(xiàn)在30 min之內(nèi)，吸光度值不穩(wěn)定，且逐漸增大，30 min以后，變化值很小，但90 min以后吸光度值不穩(wěn)定，建議在顯色后30~90min內(nèi)完成測定。此外，實(shí)驗(yàn)過程中還發(fā)現(xiàn)制備好的樣品溶液在第2天、第3天重復(fù)測定，吸光度值降低超過5%，所以在總黃酮類含量測定中，建議樣品提取制備后馬上測定，不要放置過夜。

〔1〕田建華.《本草綱目》彩色圖集〔M〕.石家莊：河北科學(xué)技術(shù)出版社，2007：169.

〔2〕鄭宏鉤，詹亞華.現(xiàn)代中藥材鑒別手冊〔M〕.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2001：541-542.

〔3〕徐國鈞.中草藥彩色圖譜〔M〕.2版.福州：福建科學(xué)技術(shù)出版社，1999：590-591.

〔4〕黃文波，蔡元菊，饒光福.扁蓄總黃酮提取方法的比較研究〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2008，8（6）：1078-1080.

〔5〕張鋒，宋康，王同燕.紫外分光光度法測定白首烏中黃酮類化合物含量方法研究〔J〕.中國食物與營養(yǎng)，2009，30（7）：43-45.

〔6〕張進(jìn)祥，段吉平.紫外分光光度法測定金蓮花中總黃酮的含量〔J〕.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2009，15（10）：36-37.

（責(zé)任編輯 蔣 康）

Com parative Study of the Total Flavonoids Contents in Rosa Rugosa and Rosa Chinensis

WANGMin,SHAO Dongmei,LIHaiyan,LIShuang,XIAO Huai*
（C ollege of Pharmacy，DaliUniversity，Dali，Yunnan 671000，China）

Objective：To determine the contents of total flavonoids inRosa.rugosaandRosa.chinensis.Methods:75%alcohol and AlCl3colorimetry was used to determine the content of total flavonoids,with rutin as the reference substance.Results:The average recovery was 102.5%and RSD 2.2%,and the contents of total flavonoids in wild and plantR.rugosaandR.chinensiswere 1.94%,0.80%and 2.79%respectively.Conclusion:Thismethod is convenient and accurate,which can offer some foundation to themedical study of sightseeing plants such asR.rugosaandR.chinensis.

R.rugosa;R.chinensis;total flavonoids;contents determination

Q949.751.8

A

1672-2345（2010）12-0013-02

大理學(xué)院大學(xué)生科研基金資助項(xiàng)目（2009DXSKY23）

2010-06-01

王敏，主要從事藥物分析研究.

*通信作者：肖懷，副教授，電話：0872-2257418.