淋巴細(xì)胞核化學(xué)染色表面分析

李大東楊興林

1(浙江海洋學(xué)院醫(yī)學(xué)院，舟山 316004)2(貴陽(yáng)市第五醫(yī)院，貴陽(yáng) 550001)

淋巴細(xì)胞核化學(xué)染色表面分析

李大東1*楊興林2

1(浙江海洋學(xué)院醫(yī)學(xué)院，舟山 316004)2(貴陽(yáng)市第五醫(yī)院，貴陽(yáng) 550001)

將圖像紋理特征和物質(zhì)含量測(cè)量參數(shù)—光密度值等結(jié)合起來(lái)，組成一種新的特征向量，用于分析肝癌、肝硬化時(shí)淋巴細(xì)胞化學(xué)染色核圖像的微小變化。通過(guò)改進(jìn)血液涂片載體，以利于提高光密度值的精度和核紋理分析。采用小波變換結(jié)合經(jīng)驗(yàn)?zāi)Ｊ椒纸猥@取圖像表面紋理特征，再與多種圖像光密度值和圖像能量等結(jié)合，構(gòu)成一種圖像組合特征多維向量，用支持向量機(jī)完成分類(lèi)識(shí)別。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該法較好地區(qū)別了正常人與肝硬化、肝癌病人以及肝硬化與肝癌病人的外周血淋巴細(xì)胞。分析了淋巴細(xì)胞核中核酸、蛋白質(zhì)等與核表面紋理及化學(xué)著色之間的關(guān)系。解決了淋巴細(xì)胞核染色表面微小變化人眼不能定量區(qū)分識(shí)別的困難。圖像組合特征多維向量可以有效地反映不同淋巴細(xì)胞核表面間的紋理差異，可作為識(shí)別淋巴細(xì)胞核染色表面變化新的特征量。

圖像處理;小波變換;淋巴細(xì)胞;核酸

Abstract:An eigenvector，composed by the image texture features，the optical density and image energy，was applied to analyze slight changes after lymphocyte staining on lymphocyte nucleus images of liver cancer and hepatocirrhosis patients.Improved slide of blood smear was used to enhance the precision of optical density and nuclear texture analysis.The wavelet transformation and the empirical mode decomposition were combined to obtain the image surface texture feature.The texture features，the image optical density and the energy were composed as a multi-dimensional vector，and the pattern recognition was performed with support vector machines.The experimental result showed the proposed method could distinguish normal and hepatocirrhosis，liver cancer patient′s lymphocyte with high accuracy.It was demonstrated that image feature multi-dimensional vectors were able to differentiate with different type of lymphocyte nucleus texture surfaces efficiently，and were promising in the recognition of lymphocyte changes in the nucleus of lymphoeytes staining as new features.

Key words:image processing;wavelet transformation;lymphocyte;nucleic acid

引言

將血液涂制在載玻片上，經(jīng)相應(yīng)化學(xué)染料染色后，在顯微鏡下可見(jiàn)各種血細(xì)胞的核表面呈現(xiàn)一定的顏色結(jié)構(gòu)和各種表面紋理結(jié)構(gòu)。對(duì)細(xì)胞核表面紋理結(jié)構(gòu)而言，可以說(shuō)是由緊密交織在一起的單元構(gòu)成的某種結(jié)構(gòu)。紋理圖像的局部區(qū)域內(nèi)呈現(xiàn)不規(guī)則性，而在整體上表現(xiàn)出某種規(guī)律性［1］。因表面紋理是物體內(nèi)在物質(zhì)結(jié)構(gòu)的一種反映，所以分析細(xì)胞核表面結(jié)構(gòu)，可以獲得細(xì)胞內(nèi)部重要的生命活動(dòng)信息。使用Wright、Giemsa等染色方法對(duì)血細(xì)胞進(jìn)行化學(xué)染色后，再根據(jù)血細(xì)胞形態(tài)學(xué)完成對(duì)血細(xì)胞的分類(lèi)計(jì)數(shù)(如白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù))是臨床醫(yī)學(xué)中一些疾病的輔助診治手段。血液中各種血細(xì)胞經(jīng)染色后，細(xì)胞核表面紋理反映了核染色質(zhì)的排列狀態(tài)。正常情況下，不同類(lèi)型的細(xì)胞和同類(lèi)型的細(xì)胞在不同分化階段，都有不同的核紋理結(jié)構(gòu)，如細(xì)網(wǎng)狀、細(xì)沙粒狀、緊密條塊狀等。而當(dāng)細(xì)胞受病理影響時(shí)，核染色質(zhì)則會(huì)出現(xiàn)輕微排列紊亂、方向性發(fā)生稍許改變、染色質(zhì)略為變粗、出現(xiàn)微細(xì)裂紋以及細(xì)胞黏附異常等肉眼不易觀察到的細(xì)微改變。因此可以說(shuō)，細(xì)胞核表面紋理的變化為疾病的診斷及治療觀察提供了重要的分析依據(jù)。但是，目前疾病過(guò)程中血細(xì)胞核的這些細(xì)微變化，作為重要的生物信息，在白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)這類(lèi)檢查方法中沒(méi)有被充分利用起來(lái)，完全白白浪費(fèi)了，究其原因則是由于人眼對(duì)色彩、粗糙度等分辨能力的局限性所致［2］，對(duì)其細(xì)胞核表面的細(xì)微變化(如顏色、粗糙度、粒度、網(wǎng)度和染色質(zhì)方向性等)則根本不能進(jìn)行量化分析。同時(shí)人眼的觀察識(shí)別還帶有很大的主觀性和隨意性，因而準(zhǔn)確性和重復(fù)性差［3］。有經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)醫(yī)師之間的辯識(shí)結(jié)果往往還存在著分歧。因此應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像處理和識(shí)別技術(shù)對(duì)血細(xì)胞核表面進(jìn)行分析，給出一定的客觀量化數(shù)據(jù)進(jìn)行分類(lèi)識(shí)別，對(duì)疾病的診斷和治療觀察具有十分重要的意義。

血細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果與血細(xì)胞核表面紋理結(jié)構(gòu)直接相關(guān)。但是，目前大多數(shù)血細(xì)胞染色方法的基本原理至今仍未徹底搞清楚。通常認(rèn)為細(xì)胞著色有些可能是物理因素，有些可能是化學(xué)因素，有些則可能是兩種機(jī)制都起作用。但實(shí)質(zhì)上大多數(shù)細(xì)胞染色法的基本染色物質(zhì)是 DNA、RNA、蛋白質(zhì)等生命單元，所以染料與生命單元間作用涉及到一門(mén)新興的學(xué)科——生物表面科學(xué)。生物表面是指與生命單元有關(guān)的表面或界面，主要為生物大分子(蛋白質(zhì)、核酸、糖類(lèi)等)表面、生物膜表面、細(xì)胞表面以及與生命單元發(fā)生作用的物質(zhì)界面等。這些元素或單元都具有很大的比表面。物質(zhì)、能量、信息的傳輸和傳遞等重要的生命過(guò)程都發(fā)生在生命物質(zhì)的表面或界面。因此DNA、RNA、蛋白質(zhì)、細(xì)胞膜、細(xì)胞等生命單元的表面行為一直是表面科學(xué)廣泛關(guān)注的領(lǐng)域之一。只是早期研究因?qū)嶒?yàn)條件的限制而發(fā)展緩慢。但在微電子學(xué)和計(jì)算機(jī)科學(xué)的快速發(fā)展和推動(dòng)下，H.G.Hansma在2001年提出的生物表面科學(xué)已成為一門(mén)新興交叉學(xué)科［4］。因生物表面在許多化學(xué)過(guò)程中起著重要的作用，所以在生物表面科學(xué)中，研究生物大分子(生命單元)的表面幾何復(fù)雜性(即粗糙度)就顯得十分重要。因小分子與大分子間或大分子與大分子間的相互作用均發(fā)生在分子表面［4-5］，所以化學(xué)染料分子與生物大分子的結(jié)合與二者分子空間構(gòu)象密切相關(guān)［6-7］。如當(dāng)機(jī)體感染肝炎病毒后，病毒除了侵犯肝細(xì)胞外，還可引起淋巴細(xì)胞核結(jié)構(gòu)受損［8］，即淋巴細(xì)胞中核酸、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)表面幾何復(fù)雜性發(fā)生變化，這些大分子物質(zhì)與染料分子的結(jié)合則會(huì)異于正常細(xì)胞，從而使淋巴細(xì)胞核化學(xué)染色表面粗糙度即表面紋理發(fā)生改變。

在解決了血細(xì)胞載體(載玻片)光密度一致性問(wèn)題的基礎(chǔ)上，將小波變換(wavelet transformation)、經(jīng)驗(yàn)?zāi)Ｊ椒纸?empirical mode decomposition EMD)與圖像多個(gè)波長(zhǎng)光密度(optical density)測(cè)定特征等結(jié)合起來(lái)，提取淋巴細(xì)胞核表面結(jié)構(gòu)微小變化的特征信息，以期用于檢測(cè)分析肝臟疾病時(shí)外周血淋巴細(xì)胞的受損情況及診斷應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 血細(xì)胞化學(xué)染色載體的選擇

將血液涂制在載體(一般為普通玻璃片，稱(chēng)載玻片)上成為血膜，也稱(chēng)血涂片，然后進(jìn)行細(xì)胞化學(xué)染色。這是現(xiàn)行一般的血細(xì)胞化學(xué)染色檢查方法，在整個(gè)制片和染色檢查過(guò)程中是從不考慮載體(載玻片)表面的光學(xué)和化學(xué)性質(zhì)的，玻片隨機(jī)取用，甚至新舊玻片混雜反復(fù)使用。但從生物表面化學(xué)知識(shí)可知，實(shí)際上血液中的蛋白質(zhì)在載體表面的吸附會(huì)影響白細(xì)胞、血小板等的黏附從而會(huì)影響其形態(tài)［9］。因此為了盡量減少白細(xì)胞在載體上黏附時(shí)發(fā)生形態(tài)的細(xì)微變化，所以在作血涂片細(xì)胞分析時(shí)應(yīng)考慮載體表面性質(zhì)的一致性。除此之外，還有另外一個(gè)更重要的一致性，那就是當(dāng)作細(xì)胞光密度測(cè)定時(shí)，要充分考慮血液涂片載體光學(xué)性質(zhì)的一致性。推導(dǎo)如下:

設(shè)M為被測(cè)物質(zhì)質(zhì)量;S為像素點(diǎn)面積;r0為圖像背景灰度;r為像素點(diǎn)變化量;由Lambert-Beer定律知:

1.2 標(biāo)本

取分光光度計(jì)比色杯透明面作血細(xì)胞涂片載體，按白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)方法采集血液標(biāo)本，推制成血膜后，在相同染色條件(試劑、溫度)和一致的顯微鏡光程下，用OLYMPUS CX31攝影顯微鏡隨機(jī)攝取分散存在的淋巴細(xì)胞，獲取淋巴細(xì)胞圖像后存貯在計(jì)算機(jī)硬盤(pán)中。

肝硬化淋巴細(xì)胞標(biāo)本取自經(jīng)臨床確診為病毒性肝炎肝硬化病人外周血。肝癌淋巴細(xì)胞標(biāo)本取自經(jīng)臨床確診為原發(fā)性肝癌病人外周血。

1.3 淋巴細(xì)胞化學(xué)染色

染色方法采用甲基綠-派羅林染色法。其染色基本原理為甲基綠和派羅林能與聚合程度不同的DNA、RNA及蛋白質(zhì)等結(jié)合。因染料與生物大分子的結(jié)合強(qiáng)度不同而表現(xiàn)出不同的染色效果。

(1)取外周血液涂片，干燥后放入偏酸混合固定液中固定10 min，取出。

(2)滴加配好的甲基綠-派羅林染液于血膜上，染色15 min。

(3)蒸餾水沖洗。

(4)乙醇溶液分色、晾干，顯微鏡檢查并攝取淋巴細(xì)胞圖像。

1.4 小波變換和經(jīng)驗(yàn)?zāi)Ｊ椒纸?/h3>

小波(Wavelet)分析被譽(yù)為數(shù)學(xué)“顯微鏡”。目前已經(jīng)在較多學(xué)科領(lǐng)域內(nèi)得到了應(yīng)用，取得了一定的科研成果。小波變換是信號(hào)處理的前沿課題，也是多學(xué)科關(guān)注的熱點(diǎn)［10］，小波分析及其在圖像處理中的應(yīng)用請(qǐng)參閱文獻(xiàn)［11］等。而上世紀(jì)末才提出的經(jīng)驗(yàn)?zāi)Ｊ椒纸?Empirical Mode Decomposition EMD)是當(dāng)前提取和分析數(shù)據(jù)序列趨勢(shì)的最好方法之一，具體參見(jiàn)文獻(xiàn)［12-13］。從淋巴細(xì)胞圖像的細(xì)胞核表面分割出40像素×40像素的核表面圖像作小波變換。提取小波水平、垂直、對(duì)角系數(shù)矩陣，此矩陣中包含了細(xì)胞核復(fù)雜的化學(xué)成分信息。取系數(shù)矩陣中N個(gè)數(shù)據(jù)求平均，得到長(zhǎng)為3n的序列作經(jīng)驗(yàn)?zāi)Ｊ椒纸?EMD)。由EMD分解為有限個(gè)具有不同特征尺度的數(shù)據(jù)序列，每一個(gè)序列為一個(gè)固有模式函數(shù)(intrinsic mode function，IMF)。經(jīng)EMD分解出來(lái)的前幾個(gè)IMF分量往往集中了原始信號(hào)最顯著和最重要的信息，從這個(gè)角度，EMD方法可以看做是一種新的主成分分析方法。

1.5 圖像光密度、能量測(cè)定和特征數(shù)據(jù)組合

為深入考察細(xì)胞內(nèi)生物大分子(生命單元)的表面幾何復(fù)雜性及其理化性質(zhì)的變化與細(xì)胞染色后核表面紋理和顏色結(jié)構(gòu)變化之間的關(guān)系，進(jìn)一步測(cè)定了淋巴細(xì)胞核圖像的紅光光密度(density〈red〉)、綠光光密度(density〈green〉)和藍(lán)光光密度(density〈blue〉)、平均光密度(density〈mean〉)、最大光密度(density〈max〉)和累積光密度(IOD Integrated Optical Density累積光密度是測(cè)量被測(cè)圖像面積內(nèi)各像素點(diǎn)光密度之和)。總的來(lái)說(shuō)，各光密度值可代表或反映細(xì)胞核著色的深淺及顏色結(jié)構(gòu)，可用于了解核內(nèi)物質(zhì)的構(gòu)成與相對(duì)含量。同時(shí)還測(cè)定了圖像的能量(energy E)，能量用于分析了解圖像灰度分布均勻程度和圖像表面紋理粗細(xì)度，圖像表面紋理越細(xì)，能量就越小，紋理越粗，能量就越大。這樣把每一個(gè)淋巴細(xì)胞核樣本圖像從1.4中所得矩陣(由前4個(gè)IMF組成)用奇異值分解方法得到“小波紋理特征值”，再加上這些光學(xué)特征數(shù)據(jù)，就構(gòu)成了一個(gè)“圖像組合特征”多維向量，用支持向量機(jī)(SVM)進(jìn)行模式識(shí)別。另外，還測(cè)定了淋巴細(xì)胞核圖像的對(duì)比度(contrast C)、均勻性(homogeneity H)、相關(guān)性(correlation R)等，但在后面的分類(lèi)識(shí)別測(cè)試試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)它們對(duì)提高淋巴細(xì)胞核表面圖像的分類(lèi)識(shí)別率影響不是很大，因此最后舍去了。

2 結(jié)果

從攝影顯微鏡隨機(jī)攝取的淋巴細(xì)胞圖像的胞核表面分割出大小為40像素×40像素的圖像，進(jìn)行小波和經(jīng)驗(yàn)?zāi)Ｊ椒纸狻Ｆ浞指畛龅拇治鰣D像結(jié)果如圖1所示。

經(jīng)驗(yàn)?zāi)Ｊ椒纸?EMD)前4個(gè)IMF結(jié)果見(jiàn)圖2。

淋巴細(xì)胞核表面“圖像組合特征”用支持向量機(jī)(SVM)分類(lèi)識(shí)別結(jié)果見(jiàn)表1。

表1是600多幅外周血淋巴細(xì)胞化學(xué)染色核表面“組合特征多維向量”的分類(lèi)識(shí)別結(jié)果，可見(jiàn)圖像組合特征多維向量作為識(shí)別淋巴細(xì)胞核染色表面變化新的特征量，可以有效地反映不同淋巴細(xì)胞核表面的差異?？梢钥闯觯瑢⒘馨图?xì)胞核圖像的表面紋理特征、能量與表達(dá)反應(yīng)強(qiáng)度或物質(zhì)含量的測(cè)量參數(shù)光密度值等結(jié)合起來(lái)構(gòu)成組合特征，可以同時(shí)客觀地獲得染色淋巴細(xì)胞核表面的更多特征信息和核內(nèi)一些物質(zhì)(如 DNA，RNA等)的量及結(jié)構(gòu)信息，克服了淋巴細(xì)胞核染色表面微小變化人眼不能定量區(qū)分識(shí)別的困難，較好地分類(lèi)識(shí)別了正常與肝癌、肝硬化患者以及肝癌與肝硬化患者的外周血淋巴細(xì)胞。

圖1 淋巴細(xì)胞染色圖像。(a)正常淋巴細(xì)胞;(b)肝癌淋巴細(xì)胞;(c)肝硬化淋巴細(xì)胞;(d)肝癌淋巴細(xì)胞Fig.1 Lymphocyte＇s staining image.(a)normal lymphocyte;(b)liver cancer lymphocyte;(c)hepatocirrhosis lymphocyte;(d)liver cancer lymphocyte

圖2 小波變換經(jīng)EMD分解后的前4個(gè)IMF分量。(a)第一分量;(b)第二分量;(c)第三分量;(d)第四分量Fig.2 The first four IMFs of wavelet after EMD.(a)the first component;(b)the second component;(c)the third component;(d)the fourth component

表1 細(xì)胞核表面組合特征識(shí)別結(jié)果Tab.1 The results of independent test by combining image feature and optical parameters

當(dāng)然經(jīng)過(guò)染料著色的淋巴細(xì)胞核表面已不是原始的細(xì)胞核生物表面，特別是細(xì)胞經(jīng)偏酸固定液作用后，細(xì)胞中大分子物質(zhì) DNA、RNA、蛋白質(zhì)等的高級(jí)結(jié)構(gòu)、聚合程度等以及表面化學(xué)、表面物理性質(zhì)都發(fā)生了變化，因此可以說(shuō)本實(shí)驗(yàn)是外周血中淋巴細(xì)胞核經(jīng)化學(xué)染色后的表面分析。

3 討論

由Singh等首次提出的單核細(xì)胞凝膠堿性電泳技術(shù)(single cell gel electrophoresis assay，SCGE)，又稱(chēng)為慧星試驗(yàn)(comet assay)，是一種檢測(cè)真核細(xì)胞DNA受損斷裂的方法［14］。何瑋等將其用于慢性乙型肝炎合并肝癌患者淋巴細(xì)胞DNA受損的分析，發(fā)現(xiàn)慢性乙肝患者外周血中淋巴細(xì)胞有少量慧星尾，肝癌患者有明顯的慧星尾存在，其原因可能是HBV DNA整合到外周血淋巴細(xì)胞內(nèi)，引起淋巴細(xì)胞的DNA 高級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變［8，15］。Wang 等［16］和張仁云等［7］用電化學(xué)方法和光譜法研究了亞甲基綠和亞甲基藍(lán)兩種染料與DNA的相互作用。特別是張仁云等通過(guò)光譜法研究，亞甲基綠(MG)與DNA結(jié)合越多，MG的吸收峰下降強(qiáng)度越多，同時(shí)吸收峰由647 nm紅移到656 nm，紅移約9 nm，原因是亞甲基綠分子插入到DNA堿基對(duì)之間的幾率增大，亞甲基綠發(fā)色基團(tuán)π—π*電子與DNA堿基的電子態(tài)相互交疊成鍵，由此導(dǎo)致吸收峰紅移。因此認(rèn)為亞甲基綠是以插入方式與DNA結(jié)合，而亞甲基藍(lán)(MB)則可能同時(shí)存在插入和溝槽兩種結(jié)合方式且以溝槽方式為主。但可得出重要的結(jié)論是:分子結(jié)構(gòu)的微小變化，導(dǎo)致分子表面性質(zhì)改變，都會(huì)影響到分子之間的聯(lián)系與結(jié)合。本實(shí)驗(yàn)中，血液制成血膜后，在偏酸性固定液作用下，核內(nèi) DNA、RNA及蛋白質(zhì)等大分子結(jié)構(gòu)、表面性質(zhì)均發(fā)生了變化。根據(jù)核酸的理化性質(zhì)，在酸性條件下，嘌呤堿糖苷健易斷裂，核酸受損，正常DNA超螺旋結(jié)構(gòu)變得松馳，分子大小和分子構(gòu)象發(fā)生改變;核酸解離而帶電。因此染料與DNA的結(jié)合，無(wú)論是插入方式或溝槽方式，與用乙醇或10%甲醛生理鹽水作固定液的細(xì)胞相比，核表面會(huì)出現(xiàn)更多的色彩與紋理。在統(tǒng)一的化學(xué)染色條件下，肝癌、肝硬化疾病時(shí)受損淋巴細(xì)胞核中生物大分子物質(zhì)性質(zhì)已發(fā)生改變，因而與染料結(jié)合后所產(chǎn)生的核表面色彩及紋理與正常淋巴細(xì)胞比較則出現(xiàn)一定的差異，經(jīng)“圖像組合特征”提取分析，從而反映出細(xì)胞核內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的變化情況(從生物大分子聯(lián)系到細(xì)胞核表面，從微觀聯(lián)系到宏觀表象)。

4 結(jié)論

針對(duì)化學(xué)染色后淋巴細(xì)胞核表面紋理結(jié)構(gòu)和顏色結(jié)構(gòu)微小變化的特征提取和識(shí)別，本研究提出一種 Wavelet-EMD-OP(optical parameters)綜合模型。根據(jù)計(jì)算機(jī)對(duì)血細(xì)胞圖像分析的要求，利用分光光度計(jì)比色杯透明面作血細(xì)胞涂片，改進(jìn)了血細(xì)胞涂片載體，從而滿(mǎn)足了細(xì)胞化學(xué)染色定量分析的要求。采用圖像組合特征方法，即將圖像紋理特征、灰度和各波長(zhǎng)光密度等有效地綜合利用起來(lái)，構(gòu)造了具有明確的數(shù)學(xué)、物理和化學(xué)意義的一種組合特征向量來(lái)分析和描述淋巴細(xì)胞核表面信息。通過(guò)以上工作，說(shuō)明利用計(jì)算機(jī)數(shù)值技術(shù)，同樣可對(duì)受損淋巴細(xì)胞進(jìn)行分析。解決了淋巴細(xì)胞核染色表面的微小變化人眼不能定量識(shí)別的困難，完成了正常淋巴細(xì)胞、肝癌病人淋巴細(xì)胞和肝硬化病人淋巴細(xì)胞化學(xué)染色后核表面的分類(lèi)識(shí)別。從生物表面分析角度，描述了肝臟疾病時(shí)淋巴細(xì)胞核染色后紋理、色彩變化的原因。同時(shí)也證實(shí)了系統(tǒng)生物學(xué)的觀點(diǎn):人體是一個(gè)復(fù)雜系統(tǒng)，存在于這一系統(tǒng)中的物質(zhì)以及細(xì)胞、組織器官之間必然存在著相互聯(lián)系和相互作用(相互影響)，通過(guò)計(jì)算生物學(xué)方法來(lái)定量描述和預(yù)測(cè)生物功能、表型和行為等等是有效可行的。進(jìn)一步結(jié)合臨床分析是要繼續(xù)進(jìn)行的工作。

(致謝:感謝貴陽(yáng)第五醫(yī)院(貴陽(yáng)傳染病院)檢驗(yàn)科王義光、熊金風(fēng)二位主任和貴州省腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科主任王偉對(duì)本工作的大力支持和幫助;感謝林慧敏，孫瑜二位老師的通力協(xié)助)

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Surface Analysis of Lymphocyte Nucleus by Chemical Staining

LI Da-Dong1*YANG Xing-Lin2
1(Zhejiang Ocean Universty Medical College，Zhoushan 316004，China)2(The Fifth Pepole’s Hospital of Guiyang，Guizhou 550001，China)

R318

A

0258-8021(2010)02-0190-05

10.3969/j.issn.0258-8021.2010.02.006

2009-02-15，

2009-10-20

浙江省教育廳科研項(xiàng)目(20070930)

*通訊作者。 E-mail:lddcg1222@yahoo.com.cn