一枝黃花的提取工藝優(yōu)選及質(zhì)量控制

馮 華，鄒孔強，王小東，張 強

（貴州省遵義市藥品檢驗所，貴州 遵義 563000）

一枝黃花的提取工藝優(yōu)選及質(zhì)量控制

馮 華，鄒孔強，王小東，張 強

（貴州省遵義市藥品檢驗所，貴州 遵義 563000）

目的 篩選一枝黃花中有效成分蘆丁提取工藝的最優(yōu)條件及對蘆丁進行含量測定。方法 采用正交試驗法，以提取時間、提取次數(shù)、甲醇質(zhì)量分數(shù)為考察因素，以蘆丁含量為指標，對提取條件進行優(yōu)選。采用高效液相色譜（HPLC）法對蘆丁含量進行測定。結(jié)果 最佳提取工藝為提取時間30 min，提取次數(shù)3次，甲醇質(zhì)量分數(shù)70%。含量測定以乙腈-甲醇-0.4%醋酸溶液(16∶8∶76)為流動相，流速為1.0 mL/min，檢測波長為360 nm，線性范圍為0.687 6～1.604 4!g(r=0.999 5)，平均回收率為99.27%，RSD為0.69%(n=6)。結(jié)論 優(yōu)選的工藝可行，具有操作性。用HPLC法測定含量簡便、靈敏、準確。

提取工藝；正交試驗；高效液相色譜法；含量測定

Abstract：ObjectiveTo optimize the extracting technology of the effective ingredient rutin from Solidago decurrens Lour and to establish its quality control.MethodsThe orthogonal test was used，with the extracting time，extracting times and methanol concentration as the factors，the content of rutin as the index for screening the extracting condition.Rutin content was determined by the HPLC methods.ResultsThe best optimized extracting procedure was：each time 30 min，extracting for 3 times and 70% methanol.The Diamonsil C18column was used with the mobile phase of CH3CN-methanol-0.4% acetic acid aqueous solution(16 ∶8 ∶76)，the detection wavelength was 360 nm，the flow rate was 1.0 mL/min.The good linear range of rutin was within 0.687 6-1.604 4!g，r=0.999 5.The average recovery rate was 99.27%and RSD was 0.69%(n=6).ConclusionThe optimized technology is feasible and easily operative.The HPLC determination method for the rutin content is simple，sensitive and accurate.

Key words：extacting technology；orthogonal design；HPLC；content determination

一枝黃花是菊科植物一枝黃花 Solidago virga-aure-aL.var.leiocarpa(Benth)A·Gray的干燥全草，為貴州省少數(shù)民族用藥[1]，具有疏風散熱、解毒消腫、退黃疸的功效，常用于治療感冒、百日咳、黃疸型肝炎、扁桃體炎。本試驗采用正交試驗法，以有效成分蘆丁為參考指標，對一枝黃花提取工藝進行優(yōu)選及質(zhì)量控制進行研究，為一枝黃花的開發(fā)利用及質(zhì)量控制提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Waters1525型高效液相色譜儀；KQ-300DE型超聲儀。蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為0080-9705)；一枝黃花藥材（采集于遵義縣，經(jīng)鑒定為菊科植物一枝黃花的干燥全草）；甲醇和乙腈為色譜純，水為純凈水，其他均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取工藝優(yōu)選

2.1.1 因素水平確定

分別選擇提取時間（因素A）、提取次數(shù)（因素B）、甲醇質(zhì)量分數(shù)（因素C）3個考察因素，以蘆丁含量為考察指標，每個因素分3個水平，因素水平表見表1。

表1 因素水平表

2.1.2 正交試驗與結(jié)果

用L9(34)正交試驗表進行試驗，結(jié)果見表2。方差分析見表3，可見提取時間、提取次數(shù)、甲醇質(zhì)量分數(shù)對提取的蘆丁含量無影響。直觀分析結(jié)果顯示，最佳提取工藝條件為A3B3C3，即提取時間為超聲30 min，提取次數(shù)3次，甲醇質(zhì)量分數(shù)為70%。

表2 正交試驗結(jié)果表

表3 正交試驗方差分析

工藝驗證結(jié)果見表4，表明優(yōu)選的提取工藝對蘆丁提取效果較好、工藝穩(wěn)定。

2.2 蘆丁含量測定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5!m)；流動相：乙腈 -甲醇 -0.4% 醋酸溶液(16 ∶8 ∶76)；流速：1.0 mL/min；柱溫：25℃；檢測波長：360 nm；進樣量：10!L。理論塔板數(shù)按蘆丁峰計應(yīng)不低于2 500。高效液相色譜圖見圖1。

2.2.2 溶液制備

精密稱取蘆丁對照品11.46 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取一枝黃花藥材粉末（過三號篩）約2.0 g，精密稱定，每次加溶劑15 mL，按正交表進行超聲試驗，最后加相應(yīng)質(zhì)量濃度的溶劑定容到50 mL量瓶中，制得供試品溶液。

表4 一枝黃花正交試驗的工藝驗證結(jié)果

圖1 高效液相色譜圖

2.2.3 方法學考察

線性關(guān)系考察：精密吸取對照品溶液，分別進樣6，8，10，12，14!L，測定峰面積，以蘆丁質(zhì)量濃度(!g)為橫坐標、峰面積積分值(A)為縱坐標進行線性回歸，回歸方程為 Y=3.0×109X-125.3，r=0.999 5(n=5)。結(jié)果表明蘆丁進樣量在0.687 6～1.604 4!g范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密吸取對照品溶液，依法測定。結(jié)果平均峰面積為1 762 972，RSD=1.3%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：同一供試品溶液，分別于0，4，8，16，24 h時測定。結(jié)果平均峰面積為1 759 985，RSD為1.2%(n=5)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗：取樣品粉末約2.0 g，精密稱定，依法制備供試品溶液并測定。結(jié)果平均峰面積為1 765 923，平均含量為0.171%，RSD=1.0%(n=5)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗：取已知含量(0.169%)的樣品6份，每份約為1.0 g，精密稱定，精密加入蘆丁對照品溶液(1.76 mg/mL)1.0，1.2，1.4 mL，置50 mL量瓶中，加相應(yīng)溶劑至刻度，依法測定含量，計算回收率，結(jié)果見表5。

表5 蘆丁加樣回收試驗結(jié)果（n=6）

2.2.4 含量測定

分別依法測定3批樣品結(jié)果平均含量為0.173%。

3 討論

一支黃花的有效成分蘆丁可用甲醇或乙醇提取。為選擇適合溶劑，以甲醇和乙醇為溶劑，以不同質(zhì)量分數(shù)進行超聲提取，結(jié)果以甲醇為溶劑的蘆丁提取率明顯高于以乙醇為溶劑，故本試驗選擇甲醇為提取溶劑。

優(yōu)選的提取工藝可行、穩(wěn)定。HPLC法簡便、靈敏、準確，可對一枝黃花的開發(fā)利用及質(zhì)量控制提供了一定的參考。

[1]DB52/YC001-2003，貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標準[S].

Study on Extracting Technology of Solidago Decurrens Lour and Its Quality Control

Feng Hua，Zou Kongqiang，Wang Xiaodong，Zhang Qiang
(Zunyi Institute for Drug Control，Zunyi，Guizhou，China 563000)

R284.2；R282.71

A

1006－4931(2010）08－0049－02

馮華，男，碩士研究生，主要從事藥品檢驗及新藥研 究 ，（電 話 ）0852-8928059（ 電 子 信 箱 ）fenghua781014@yahoo.com.cn。

2009－03－03；

2009－06－28）