反相高效液相色譜法測定達美康緩釋片中格列齊特的含量

羅海京，張文超

（1.暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥劑科，廣東廣州 510630；2.廣東省藥品檢驗所化標室，廣東廣州 510180）

格列齊特為第二代口服磺酰脲類降血糖藥，用于成年型糖尿病、糖尿病伴有肥胖癥者或伴有血管病變者。格列齊特緩釋片為新上市的改良劑型，采用的是羥丙甲纖維素系列控釋材料制備的親水性骨架片。這些高分子材料與胃腸道組織之間的粘附力可以減少胃腸蠕動對藥物顆粒的推動作用，延長藥物在胃腸道的停留時間，保證藥物充分釋放和吸收，每日給藥一次，就能24 h持續(xù)控制血糖[1-2]。中國藥典2005年版采用電位滴定法測定格列齊特片劑的含量，該法滴定過程中突躍不明顯。本文采用反相高效液相法測定格列齊特緩釋片中藥物含量，方法簡單，結(jié)果準確。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters高效液相色譜系統(tǒng)：510泵，486檢測器，7715手動進樣閥，2010色譜工作站；德國賽多利斯CP224S十萬分之一電子天平。

1.2 試藥

格列齊特緩釋片（商品名達美康，法國施維雅藥廠，批號4C5287，4E5287,4H5284）；格列齊特對照品（廣州貝氏藥業(yè)有限公司，純度100.3%）；格列吡嗪內(nèi)標物（中國藥品生物制品檢定所）；甲醇為色譜純；乙醇，磷酸為分析純；水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil C18（5 μm,150 mm×4.6 mm)；流動相：甲醇－水（60∶40，磷酸調(diào) pH 至 3.5）；紫外檢測波長：228 nm；流速：1.0 ml/min；進樣量：50 μl。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取格列齊特對照品10 mg，置于10ml容量瓶中，用甲醇溶解至刻度，搖勻，配成濃度為1 mg/ml的溶液作為對照溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取同一批號格列齊特緩釋片細粉適量（相當于格列齊特10 mg），置于100 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，過濾。

2.4 內(nèi)標溶液的制備

精密稱取格列吡嗪5 mg，置于10 ml容量瓶中，用乙醇溶解至刻度，搖勻，配成濃度為500 μg/ml的內(nèi)標溶液。

2.5 標準曲線繪制

精密吸取對照溶液和內(nèi)標溶液，以流動相配制成濃度為4、8、6、32、64 μg/ml的溶液，其中內(nèi)標濃度為 15 μg/ml。 再按“2.1”項下色譜條件各進樣50 μl，以格列齊特與內(nèi)標物的峰面積比（Y）對格列齊特的濃度（X）進行線性回歸，回歸方程為：Y＝0.047 1X+0.018 4，r=0.999 8，(n=5)。

結(jié)果表明，格列齊特在4～64 μg/ml的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗

按“標準曲線繪制”項下配制 4、16、64 μg/ml 3 個含內(nèi)標的格列齊特溶液，分別重復(fù)進樣5次，計算日內(nèi)變異系數(shù)分別為1.3%、0.9%、1.7%；3個不同濃度標準液每天測定1次，連續(xù)測定5 d，計算日間變異系數(shù)分別為1.6%、1.2%、1.9%。

2.7 穩(wěn)定性試驗

精密吸取供試品溶液2 ml，內(nèi)標溶液0.3 ml于10 ml的容量瓶中，加流動相稀釋刻度。按“2.1”項下色譜條件于0、2、4、6、8 h進行測定，結(jié)果測得格列齊特與內(nèi)標物峰面積比的相對標準偏差為1.5%。

2.8 重復(fù)性試驗

取同一批號樣品(4C5287),研細,準確稱取適量的粉末(相當于格列齊特10mg)，共6份，按“2.3”項下方法制備。精密吸取續(xù)濾液2 ml，內(nèi)標溶液0.3ml于10ml的容量瓶中，加流動相稀釋刻度，按“2.1”項下色譜條件分別測定6份樣品的含量，結(jié)果測得格列齊特與內(nèi)標物峰面積比的相對標準偏差為1.1%。

2.9 加樣回收率試驗

準確稱取已知含量的格列齊特緩釋片樣品細粉適量，加入定量的格列齊特對照品，按“2.3”項下方法操作，制成濃度為 100 μg/ml的溶液。 精密吸取該溶液 1、2、4 ml，內(nèi)標溶液0.3 ml，分別置于10 ml的容量瓶中，加流動相稀釋至刻度。進樣50 μl，分別重復(fù)進樣3次，回收率見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n=3）

2.10 樣品含量測定

取3個批號的格列齊特緩釋片各20片（批號分別為4C5287，4E5287，4H5284），精密稱定，研細。按“2.3”項下方法操作，制成濃度為100 μg/ml的溶液。精密吸取該溶液2 ml，內(nèi)標溶液0.3 ml，置于10 ml的容量瓶中，加流動相稀釋至刻度。進樣50 μl，分別重復(fù)進樣3次。得不同批號格列齊特片的標示量，結(jié)果見表2和圖1。

3 討論

表2 格列齊特緩釋片含量測定結(jié)果（n=3）

早期有文獻分別報道格列齊特在220、230、270和280 nm存在紫外吸收檢測波長，《中國藥典》記載格列齊特的最大紫外吸收檢測波長為226 nm，本實驗通過參考并優(yōu)化其他文獻[3-6]的檢測方法，選擇紫外檢測波長為228 nm。通過本文所采用高效液相色譜方法對格列齊特進行含量測定，其精密度、穩(wěn)定性及加樣回收率等試驗均符合要求，統(tǒng)計結(jié)果表明該方法簡便、準確、可靠。

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