銀杏葉提取物對肉雞免疫功能的試驗

童金水

（福建龍巖農(nóng)業(yè)學校，福建 龍巖 364000）

銀杏葉提取物(Extracts Ginkgo bilobal，EGB)化學成分復雜，含有黃酮類、萜類、酚類、等多種活性成分。EGB對腦循環(huán)及血腦屏障、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)，呼吸系統(tǒng)都有影響，并且具抑菌抗病毒、提高機體免疫功能等多種功效。本試驗旨在研究EGB（銀杏葉提取物）對肉雞免疫功能的影響，為EGB作為畜禽免疫增強劑提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設計與試驗材料

選1日齡健康AA肉仔雞360只，全部為母雛。隨機分成5組，每組設6個重復，每個重復12只，飼喂42天。第1組為對照組，基礎日糧中不添加抗生素和EGB；第2組為抗生素組，基礎日糧中只添加金霉素（90mg/kg飼料）；其余3組為試驗組，分別在基礎日糧中添加0.15%、0.2%、0.25%的銀杏葉提取物（EGB），EGB呈黃棕色粉狀物，含銀杏萜內(nèi)酯≥6%及黃酮成分≥24%。

1.2 飼養(yǎng)管理

基礎日糧為玉米-小麥型，參照NRC（1994）肉雞營養(yǎng)需要配合而成的粉料。試驗期6周，在7、21日齡接種新城疫-傳染性支氣管炎二聯(lián)苗。

1.3 檢測項目和方法

1.3.1 血液樣品的采集與處理 分別于試雞21、28、42日齡，每組隨機選取12只試雞（每個重復2只），每只雞心臟采血（5mL/只），靜置 2h，3000r/min離心20min，無菌分離血清，經(jīng)56℃水浴30min滅活后，用0.22μm微孔濾膜過濾除菌，置-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 免疫器官相對重量的測定 各階段試驗結(jié)束，每組隨機選取12只試雞（每個重復2只），空腹稱重，按常規(guī)方法屠宰，記錄有關數(shù)據(jù)。

計算公式為：免疫器官相對重量(g/kg)=免疫器官重量(g)÷雞活體重(kg)

1.3.3 血清免疫球蛋白的測定 采用ELISAD法測定。

1.3.4 外周血、脾臟淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的測定 采用MTT法檢測。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)使用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行方差分析，多重比較用S-N-K法，數(shù)據(jù)用±SD表示。

2 試驗結(jié)果與分析

2.1 試驗組對肉雞免疫器官相對重量的影響

由表1可見，21日齡時，試驗各處理組間的脾臟指數(shù)差異不顯著。28日齡、42日齡時，添加0.2%、0.25%EGB組的脾臟指數(shù)明顯高于對照組。添加0.2%、0.25%EGB組28日齡的脾臟指數(shù)較對照組分別提高了 29.9%（p＜0.05） 和 24.8%（p＜0.05），42日齡的脾臟指數(shù)較對照組分別提高了15.2%（p＜0.05）、10.4%（p＜0.05）。

21日齡、28日齡、42日齡時，添加EGB組的胸腺指數(shù)明顯高于對照組（p＜0.05）。各EGB組21日齡的胸腺指數(shù)較對照組分別提高了8.5%（p＜0.05）、11.5%（p＜0.05） 和 10.1%（p＜0.05），28 日齡的胸腺指數(shù)分別提高了 9.3%（p＜0.05）、13.4%（p＜0.05）和10.0%（p＜0.05），42 日齡的胸腺指數(shù)分別提高了6.6%（p＜0.05）、9.2%（p＜0.05）和 7.1%（p＜0.05）。

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21日齡時，試驗各處理組間的法氏囊指數(shù)差異不顯著。28日齡時，添加EGB組的法氏囊指數(shù)明顯高于對照組，分別提高了 12.8%（p＜0.05）、15.4%（p＜0.05）和 13.2%（p＜0.05）。42日齡時，添加 0.2%、0.25%EGB組的法氏囊指數(shù)明顯高于對照組，分別提高了 14.4%（p＜0.05）和 11.0%（p＜0.05）。

2.2 試驗組對肉雞體液免疫功能的影響

2.2.1 各處理組對肉雞血清IgG的影響

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由表2可見，21日齡、28日齡、42日齡添加EGB組的肉雞血清IgG含量顯著高于對照組（P＜0.05）。21日齡，添加EGB組的血清IgG含量較對照組分別提高了 53.0%（P＜0.05）、68.0%（P＜0.05）和 56.5%（P＜0.05）；28日齡時，EGB組的 IgG含量較對照組分別提高了 58.3%（P＜0.05）、78.9%（P＜0.05） 和 66.4%（P＜0.05）；42 日齡時，EGB組的IgG 含量分 別 提高 了 86.9%（P＜0.05）、95.5%（P＜0.05）和 85.4%（P＜0.05）。

2.2.2 各處理組對肉雞血清IgA的影響

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由表3可見，21日齡、28日齡，試驗各處理組的肉雞血清IgA差異不顯著。42日齡，添加0.2%、0.25%EGB組的肉雞血清IgA含量顯著高于對照組（P＜0.05），分別提高了 24.5%（P＜0.05） 和 23.9%（P＜0.05）

2.2.3 試驗組對肉雞外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的影響

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由表4可見，21日齡、28日齡，添加EGB組的外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化率明顯高于對照組（P＜0.05）。21日齡，添加EGB組的外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化率較對照組分別提高了 3.3%（P＜0.05）、4.5%（P＜0.05）和4.2%（P＜0.05）；28日齡，EGB組的外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化率分別提高了 5.5%（P＜0.05）、6.9%（P＜0.05）和6.4%（P＜0.05）。42日齡，添加 EGB組的外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化率明顯高于對照組（P＜0.05），分別提高14.3%（P＜0.05）、18.3%（P＜0.05）和 15.8%（P＜0.05）。2.2.4各處理組對肉雞脾臟淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的影響

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由表5可見，21日齡、28日齡、42日齡，添加EGB組的脾臟淋巴細胞轉(zhuǎn)化率明顯高于對照組（P＜0.05）。21日齡，添加EGB組的脾臟淋巴細胞轉(zhuǎn)化率較對照組分別提高了 11.3%（P＜0.05）、19.0%（P＜0.05）和 15.0%（P＜0.05）；28日齡，轉(zhuǎn)化率分別提高了 7.8%（P＜0.05）、13.8%（P＜0.05） 和 10.0%（P＜0.05）；42日齡，轉(zhuǎn)化率分別提高 22.0%（P＜0.05）、25.6%（P＜0.05）和 23.8%（P＜0.05）。

3 討論與小結(jié)

3.1 日糧中添加EGB對肉雞免疫器官相對重量的影響

本試驗結(jié)果表明，日糧中添加了EGB的各組肉雞的對中樞免疫器官的相對質(zhì)量均在不同程度上高于對照組，表明EGB對肉雞免疫器官有一定的增重作用，有利于增強肉雞的免疫性能。免疫器官的發(fā)育狀態(tài)直接影響機體免疫應答水平和抵抗外來微生物的感染和入侵的能力，免疫器官相對重量的增加，說明機體的細胞免疫和體液免疫水平增加。

3.2 日糧中添加EGB對肉雞血清IgG、IgA的影響

IgG是機體抗感染免疫的主力，同時也是血清學診斷和疫苗免疫后監(jiān)測的主要抗體。IgA是機體粘膜免疫的“屏障”。試驗結(jié)果表明，肉雞日糧中添加不同水平的EGB，各試驗組IgG、IgA較對照組均有所提高，21、28、42日齡時添加EGB組IgG較對照組差異顯著，42日齡時添加EGB組IgA較對照組差異顯著，21、28日齡時添加EGB組較對照組差異不顯著。結(jié)果表明EGB可以提高血清IgG、IgA，其中血清IgG、IgA以添加0.2%的EGB組42日齡提高最多。

3.3 日糧中添加EGB對肉雞外周血、脾臟淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的影響

淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的高低可以反映機體的細胞免疫水平。因此可作為測定機體免疫功能的指標之一。本試驗21日齡、28日齡、42日齡，添加EGB組的外周血、脾臟淋巴細胞轉(zhuǎn)化率均明顯高于對照組。結(jié)果表明添加EGB組均能顯著提高淋巴細胞轉(zhuǎn)化率，尤以添加0.2%的EGB組42日齡提高最多。

3.4 銀杏葉提取物（EGB）開發(fā)成動物免疫增強劑的效果有待進一步研究。 □

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