頭頸部腫瘤多瘤抑制基因p16表達(dá)研究

傅新文 ，胡銀英 ，宋曉萍 ，袁 鏗 ，郭江梅 ，袁佳蕾 ，李龔瓊 ，劉 利 ，張民憲

(1、江西省人民醫(yī)院，江西 南昌 330006；2、江西省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所；3、贛南醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系；4、江西省婦幼保健院；5、南昌大學(xué)現(xiàn)代教育技術(shù)中心)

多瘤抑制基因p16(multiple tumor suppressor l，MTS 1)作為一種新型的抑癌基因，它直接參與細(xì)胞周期的調(diào)控，可抑制細(xì)胞增殖及分裂，具有明顯抑癌作用，p16基因或蛋白異常與腫瘤發(fā)生、發(fā)展及惡性程度密切相關(guān)。檢測p16基因表達(dá)水平對(duì)判斷患者腫瘤的易感性以及預(yù)測腫瘤的預(yù)后具有十分重要的臨床意義。本研究以頭頸部病變細(xì)針吸取及術(shù)中印片細(xì)胞學(xué)為研究樣本，采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法，研究p16抑癌基因表達(dá)水平，探討原發(fā)性和繼發(fā)性頭頸部腫瘤的組織學(xué)類型、分化程度與生物學(xué)行為之間的關(guān)系，試圖建立基因診斷新方法，為腫瘤的臨床診斷、指導(dǎo)治療和預(yù)后判斷提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)告如下。

材料與方法

1 資料來源

本實(shí)驗(yàn)組220例頭頸部良、惡性腫瘤選自2005年7月～2009年12月江西省人民醫(yī)院頭頸部病變細(xì)針吸取細(xì)胞學(xué)病例，其中顱內(nèi)腫瘤標(biāo)本取自南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院術(shù)中印片病例。本組男性138例，女性82例，男女比為1.68:1。年齡范圍為16歲～84歲，平均年齡54歲。

2 方法

2.1 所有病例均經(jīng)細(xì)胞學(xué)及病理學(xué)明確診斷，同時(shí)留取針吸或印片細(xì)胞學(xué)涂片標(biāo)本行p16基因檢測。

2.2 固定：將針吸組織顆粒物均勻涂片或腫瘤切面印片于經(jīng)清潔處理過的載玻片上，于現(xiàn)配的4%多聚甲醛固定30min，自然干燥后密封置-30℃冰箱待測。

2.3 免疫細(xì)胞化學(xué)染色 采用DAKO公司p16檢測試劑盒產(chǎn)品，嚴(yán)格按照操作要求及步驟進(jìn)行。

3 結(jié)果判定

3.1 生物顯微鏡下p16基因表達(dá)陽性為棕色顆粒。陽性染色主要定位于細(xì)胞核中，細(xì)胞漿中也可見著色，陽性產(chǎn)物顯現(xiàn)為染色強(qiáng)度不等的棕黃色顆粒，采用盲法計(jì)數(shù)，每張標(biāo)本片至少計(jì)數(shù)500個(gè)有核細(xì)胞。

3.2 著色判定：①陰性(-)：細(xì)胞無棕色反應(yīng)；②陽性(+)：淺染色顆粒散在分布；③中度陽性(++)：顯色強(qiáng)度適中；④強(qiáng)陽性(+++)：細(xì)胞呈均一棕黃色染色。

3.3 陽性率表達(dá)：p16基因表達(dá)率=p16表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)/p16表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)+陰性細(xì)胞數(shù)×100%。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 利用SPSS 11.0軟件對(duì)研究結(jié)果進(jìn)行分析。

結(jié) 果

220例頭頸部病變中，淋巴結(jié)針吸細(xì)胞學(xué)標(biāo)本104例(含非腫瘤病變39例、惡性腫瘤65例)，涎腺腫瘤55例(良性腫瘤32例、涎腺癌23例)，甲狀腺腫瘤15例(甲狀腺瘤6例、甲狀腺癌9例)，顱內(nèi)腫瘤46例(良性及低惡度腫瘤41例、惡性腫瘤5例)。

上述各部位來源病例的p16基因表達(dá)顯示：各同組間良性病變與惡性腫瘤的比較分析均具有顯著性差異(P＜0.05)；頭頸部良性病變與惡性腫瘤p16蛋白的陽性總表達(dá)率差異非常顯著(P＜0.05)；見表1。

討 論

表1 220例頭頸部病變/腫瘤p16基因的表達(dá)情況

腫瘤的產(chǎn)生是由于多種癌基因激活、抑癌基因失活致細(xì)胞增殖失控造成的，參與細(xì)胞周期調(diào)控的分子與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展關(guān)系已成為腫瘤的研究熱點(diǎn)[1]。多瘤抑制基因p16為一種新型的抑癌基因，定位于第9號(hào)染色體短臂2區(qū)1帶(9p21)，編碼蛋白產(chǎn)物15845u，即p16蛋白。正常情況下p16蛋白通過與周期素依賴性激酶4(CDK4)結(jié)合(拮抗作用)，從而阻止細(xì)胞由G期進(jìn)入S期，在細(xì)胞周期的調(diào)控中起負(fù)性調(diào)節(jié)作用，其丟失和突變?cè)诙喾N惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要作用。近年來人們已深入研究p16的抑癌機(jī)制，仍尚無統(tǒng)一定論。但研究表明，p16基因在大多數(shù)人類腫瘤組(下轉(zhuǎn)第452頁)像學(xué)、病理學(xué)等檢查最后確診。本文有6例患者心肺功能及重要臟器功能良好，對(duì)于早期前列腺癌老年患者能進(jìn)行手術(shù)治療，術(shù)后兩年觀察TPSA和FPSA結(jié)果一直正常。但也有2例患者，因各器官功能有不同程度的衰退，免疫功能低下，并存疾病多，不適應(yīng)手術(shù)，只有采取中醫(yī)治療，病情逐漸惡化。

圖4 2例前列腺癌中藥治療后FPSA動(dòng)態(tài)變化

因此，老年男性健康查體檢測PSA對(duì)于前列腺癌的早發(fā)現(xiàn)、早治療具有重要意義。

[1]王自正主編.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)標(biāo)記免疫學(xué)[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,2000:64-65.

[2]Catalona WJ,Yu X,Roehl,KA,et al.Serum PSA correlates more strongly with the percentage of prostate cancer and cancer volume than with prostate size[J].J Urol,2005,173(4):257.

[3]張升勤.PSA檢測對(duì)前列腺疾病的診斷價(jià)值 [J].中國實(shí)用醫(yī)藥,2007,2(36):113.