結核桿菌蛋白芯片檢測對活動性肺結核的診斷價值

曹軍皓,黃前川,趙冰紅

(廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院檢驗科,湖北武漢 430070)

結核桿菌蛋白芯片檢測對活動性肺結核的診斷價值

曹軍皓,黃前川,趙冰紅

(廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院檢驗科,湖北武漢 430070)

目的評價結核桿菌蛋白芯片對肺結核的診斷價值及其影響因素。方法對痰涂片陽性肺結核病患者結核桿菌蛋白芯片和胸部CT掃描結果進行對比,分析肺結核病變范圍和類型等因素對結核桿菌蛋白芯片檢測的影響。結果結核桿菌蛋白芯片陽性率72.0%,CT診斷陽性率為90.0%,兩種方法同時檢測陽性率達到96.0%;多個肺野肺結核的結核桿菌蛋白芯片陽性率高于單個肺野(P＜0.05),有基礎疾病較無基礎疾病檢出率低(P＜0.01)。結論病變范圍及基礎疾病影響結核桿菌蛋白芯片的陽性率,胸部CT掃描聯合結核桿菌蛋白芯片檢測可以提高肺結核的診斷率。

蛋白芯片;肺結核;CT掃描

(Chin J Lab Diagn,2010,14:1440)

肺結核(Pulmonary tuberculosis)是由結核分枝桿菌(Mycobacteruin tuberculosis)引起的一種慢性傳染病。我國結核病形勢嚴峻,每年新發(fā)生肺結核患者約145萬,全年死于結核病者達20萬余人,相當于各種其他傳染病死亡人數總和的2倍。常規(guī)實驗痰涂片抗酸染色鏡檢和痰結核菌培養(yǎng)法存在著檢出率低、周期長等不足,嚴重影響著肺結核的臨床診斷和治療。本實驗通過結核蛋白芯片技術檢測痰涂陽性肺結核患者血清中3種特異性抗體(LAM、38 KD和16 KD),結合胸部CT掃描檢測結果,評價結核蛋白芯片技術在肺結核中的診斷價值及影響因素。

1 材料與方法

1.1 標本來源

收集我院經CT檢查及痰涂陽性肺結核患者的血液標本50例,其中男33例,女17例,平均年齡55歲,診斷均符合2001年中華醫(yī)學會結核分會制定的《肺結核診斷和治療指南》中肺結核的診斷標準。另留取50例健康體檢者血液標本,其中男31例,女19例,平均年齡53歲。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 結核分枝桿菌IgG抗體(結核蛋白芯片)檢測試劑盒及PBT—X2型芯片閱讀儀由南京大淵生物技術工程有限責任公司提供。

1.2.2 結核抗體蛋白檢測芯片的操作步驟 在芯片盒窗口內加入4滴A試劑,使膜完全浸濕;待完全滲入后,室溫放置 1 min,加入待檢血清 100 μ l;待血清完全滲入后,滴加B試劑6滴;待完全滲入后,滴加C試劑10滴;待完全滲入后,最后滴加D試劑6滴。反應完畢后30 min內,將蛋白檢測芯片放入芯片閱讀儀進行檢測分析,結果根據南京大淵生物技術工程有限責任公司生產的芯片閱讀儀設置參數自動判別。

1.2.3 結果判斷 蛋白芯片試劑盒采用基因工程表達的結核分枝桿菌16 KD蛋白、38 KD蛋白及LAM酯多糖3種結核菌復合群特異性的抗原來檢測待檢血清中的抗體,如果任一抗體檢測陽性,結果可判定為陽性,3種抗體檢測均為陰性,結果可判定為陰性。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用 χ2檢驗,P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 結核桿菌蛋白芯片檢測痰涂陽性肺結核患者結果 靈敏度為72.0%(36/50),特異度 98.0%(49/50),見表 1。

表1 結核桿菌蛋白芯片檢測肺結核患者和健康人的結果

2.2 結核蛋白芯片檢測與胸部CT掃描結果 50例痰涂陽性確診為肺結核患者的CT檢測陽性為45例;結核蛋白芯片檢測陽性為36例,其中3例CT檢測為陰性,見表2。

2.3 結核蛋白芯片與胸部CT掃描結果比較 結核蛋白芯片陽性率(72%,36/50)低于胸部CT(90%,45/50),χ2=4.27,P＜0.05,兩者符合率為 70%。見表3。

表2 結核蛋白芯片檢測與胸部CT掃描結果

表3 結核蛋白芯片與胸部CT檢測比較

2.4 結核蛋白芯片檢測技術影響因素分析 結核病病變范圍影響及基礎疾病影響陽性檢出率(χ2值為5.06和12.70),患者結核病類型、年齡和性別對檢測結果無影響(χ2值為0.08、0.40和1.65),見表4。

表4 結核蛋白芯片檢測影響因素

3 討論

長期以來結核病的診斷存在許多不足,抗酸桿菌涂片檢查陽性率平均檢出率只有25%-35%[1],結核菌培養(yǎng)時間長達4-8周,聚合酶鏈反應(PCR)技術雖然靈敏度高,卻易產生假陽性[2]。結核蛋白芯片技術是近期研發(fā)的一種檢測結核病的方法,原理是利用芯片技術和免疫滲濾技術同時檢查三種結核特異性抗體的方法,本研究通過比較50例痰涂片陽性肺結核病患者的結核桿菌蛋白芯片和胸部CT掃描結果,對結核桿菌蛋白芯片檢測技術的臨床價值及其影響因素進行評價。

根據結核蛋白芯片結果判斷標準,50例痰涂陽性確診為肺結核患者的結核蛋白芯片檢測陽性率為72%(36例),高于任何單一抗體檢測的陽性率,與郭光云等的檢測結果基本一致[3];表2和表3結果顯示結核蛋白芯片檢測陽性率低于CT(90%,45例),兩者符合率為70.0%(35/50),但其中3例陽性患者CT掃描呈現陰性,兩種方法同時檢測陽性率可達96%(48/50);患者的年齡、性別和肺結核的類型不影響結核蛋白芯片的檢測結果(P＞0.05,本研究僅發(fā)現浸潤型和慢性纖維空洞型兩種肺結核,與病例數有限相關),但多個肺野結核陽性率高于單個肺野結核(P＜0.05),有可能與病變范圍越大,變態(tài)反應越強,產生的抗體滴度越高有關。此外,有基礎疾病較無基礎疾病檢出率低(P＜0.01),基礎疾病可致假陰性,其中以糖尿病為主(7/14),其次為腫瘤和重癥感染,作者認為這類患者免疫功能下降,或者用藥后抑制了免疫功能,造成了患者體內的抗體水平低于檢測下限相關,結核菌素試驗陽性率也較低,并且免疫功能低下時缺乏典型的影像和臨床表現。本研究中有3例CT結果呈假陰性,Christie Y等研究發(fā)現糖尿病患者的活動性肺結核病發(fā)生率可增加3-4倍[4],因此當糖尿病或免疫功能低下的臨床疑似結核患者,如果胸部影像學不典型時,可采用結核蛋白芯片進一步明確診斷[5-6]。

以上數據顯示,結核蛋白芯片技術較抗酸染色、結核菌培養(yǎng)及結核桿菌PCR具有簡便、快速(＜20 min)、靈敏度高、特異性強、低成本等顯著優(yōu)點,與胸部CT掃描相結合可降低結核病的漏診率,是影像學檢測的重要補充,值得推廣應用。

[1]邱森靈,林開生,賀 惠,等.迪比多檢測結核分枝桿菌抗體在肺結核診斷中的應用[J].現代檢驗醫(yī)學雜志,2005,21(3):60.

[2]劉麗英,董小青,王丹敏.幾種常見的結核桿菌快速檢測方法[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2004,14(3):341.

[3]郭光云,陳 功,郭凌鄖,等.結核蛋白芯片對肺結核診斷的臨床價值[J].中國防癆雜志,2005,279(6):367.

[4]Christie Y,Jeon,Megan B.Murray Diabetes Mellitus Increases the Risk of Active Tuberculosis:A Systematic Review of 13 Observational Studies[J].PLoS Medicine,2008,5(7):1091.

[5]TatarD,Senol G,AlptekinS,et al.Tuberculosis in diabetics:features inan endemic area[J].Jpn J Infect Dis,2009,62(6):423.

[6]程瑞新,詹松華,畢小利.免疫功能低下患者肺部感染的CT表現與鑒別診斷[J].中國中西醫(yī)結合影像學雜志,2009,7(4):245.

Study on the detection of anti-mycobacterium tuberculosis antibodies using protein chip technology

CAO Jun-hao,HUANG Qian-chuan,ZHAO Bin-hong.(Department of Laboratory Medicine,Wuhan General Hospital of Guangzhou Command,Wuhan430070,China)

ObjectiveTo evaluate the application value of protein chip technology in the detection of patients with active pulmonary tuberculosis.MethodsCompared the results of Mycobacterium tuberculosis protein chip and chestCT test in 50 patientswith sputum smear-positive pulmonary tuberculosis patients,analyzed the effect of lesion and type of pulmonary tuberculosis on protein chip technology.ResultsThe positive rate of protein chip,CT and combined detection was 72.0%,90.0%and 96.0%respectively,which is higher inthe patientswithout underlying disease or with multiple lung field tuberculosis.ConclusionBoth the leison of lung and immune fuction could affect the positive rate,combined measurement of protein chip and chest CT will enhance diagnosis of pulmonary tuberculosis.

Protein chip;pulmonary tuberculosis;CT scanning

R521

A

1007-4287(2010)09-1440-03

曹軍皓(1959-),女,廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院檢驗科主任,學士,主要從事臨床檢驗及病毒性肝炎的實驗研究。

2009-12-25)