高效液相色譜法測定復(fù)方石韋薄膜衣片中苦參堿的含量

劉振華，李忠思，商春麗，米學(xué)敏

（1.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科，河北承德 067000；2.承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所；3.承德頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司）

復(fù)方石韋片處方由石韋、扁蓄、苦參、黃芪四味藥材組成，方由《證治匯補(bǔ)》中石韋散化裁而來，由承德頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司獨(dú)立開發(fā)研制，1991年收載于河北省藥品標(biāo)準(zhǔn)（1991年版），現(xiàn)收載于中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十五冊，是國家中藥保護(hù)品種[1]。復(fù)方石韋片具有清熱燥濕、利尿通淋之功效，用于小便不利、尿頻、尿急、尿痛、下肢浮腫等癥；也可用于急慢性腎小球腎炎、腎盂腎炎、膀胱炎、尿道炎，療效顯著，臨床應(yīng)用前景廣闊。復(fù)方石韋片原為半浸膏糖衣片，由于糖衣片存在包衣時(shí)間長、成品易吸潮褪色等缺陷，現(xiàn)已改為薄膜衣片；原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用薄層掃描法測定苦參堿的含量，為更有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測定苦參堿的含量。

1 儀器與試藥

Agilent HP 1100高效液相色譜儀，美國安捷倫公司；苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品，中國藥品生物制品檢定所（110805-200306）；復(fù)方石韋薄膜衣片，承德頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司；甲醇、乙腈，色譜純；其它試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Kromasil KR100-5C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱；流動(dòng)相：乙腈-0.025M磷酸（1:24）；流速：1ml/min；檢測波長：220nm；理論塔板數(shù)按苦參堿計(jì)算不低于2000。

2.2 供試品溶液的制備 取復(fù)方石韋薄膜衣片10片，研細(xì)、混勻，精密稱取粉末0.5g，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入氯仿40ml，濃氨水0.5ml，浸泡過夜后用脫脂棉濾過，精密吸取續(xù)濾液10ml，過中性氧化鋁柱（內(nèi)徑1.5cm，內(nèi)裝中性氧化鋁8g），用氯仿30ml洗脫，洗脫液40℃水浴蒸干，用甲醇定容至5ml，搖勻，即為供試品溶液。

2.3 對照品溶液的制備

2.3.1 對照樣品：精密稱取苦參堿對照品1.6mg至10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即為對照品溶液。

2.3.2 陰性對照：稱取復(fù)方石韋片處方中除去苦參以外的藥材，與樣品相同工藝制備空白樣片，依2.2的方法制備陰性對照液。取陰性對照液，按照2.1色譜條件進(jìn)行HPLC分析。結(jié)果表明，陰性對照液在苦參堿相應(yīng)的保留時(shí)間無吸收峰，因此認(rèn)為空白無干擾。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0ml，分別置10ml容量瓶中，甲醇定容，分別取上述溶液5μl進(jìn)樣，按2.1色譜條件進(jìn)行HPLC分析。以苦參堿的峰面積Y為縱坐標(biāo)，苦參堿的濃度X為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=1.3851+2919.9X，r=0.9999（n=6）。結(jié)果表明，苦參堿在16.01μg/ml-320.40μg/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 對照品的精密度 精密吸取苦參堿對照品溶液5μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果表明，苦參堿峰面積的RSD為0.37%（n=6），對照品具有良好的精密度。2.6 供試品的精密度 精密吸取復(fù)方石韋片供試品溶液5μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果表明，苦參堿峰面積的RSD為0.40%（n=6），供試品具有良好的精密度。2.7 對照品的穩(wěn)定性 精密吸取苦參堿對照品溶液5μl，每隔1h進(jìn)樣一次，連續(xù)進(jìn)樣8次，記錄峰面積。結(jié)果表明，苦參堿峰面積的RSD為0.85%（n=8），對照品在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 供試品的穩(wěn)定性 精密吸取復(fù)方石韋衣片供試品溶液5μl，每隔1h進(jìn)樣一次，連續(xù)進(jìn)樣8次，記錄峰面積。結(jié)果表明，苦參堿峰面積的RSD為0.76%，供試品在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 配制濃度為0.1490mg/ml的對照品溶液（精密稱取苦參堿對照品14.90mg至100ml容量瓶中，用氯仿溶解定容，搖勻）。精密稱取已知含量（每片含苦參堿1.73mg）的復(fù)方石韋薄膜衣片粉末9份，每份0.25g；1-3份，每份精密加入對照品溶液8ml；4-6份每份精密加對照品溶液10ml；7-9份，每份精密加入對照品溶液12ml；然后分別精密加入氯仿至40ml、再精密加入濃氨水0.5ml，按2.2的方法制成供試品液，進(jìn)行HPLC分析，計(jì)算回收率。結(jié)果表明苦參堿的平均加樣回收率為100.64%，RSD為0.87%。

2.10 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批復(fù)方石韋薄膜衣片粉末9份,1-3份每份0.4g，4-6份每份0.5g，7-9份每份0.6g，按2.2的方法制成供試品液，按2.1色譜條件進(jìn)行HPLC分析，測定苦參堿峰面積，計(jì)算含量，RSD為0.54%。

2.11 苦參堿含量測定 取10批復(fù)方石韋薄膜衣片，按2.2的方法制成供試品液，進(jìn)行HPLC分析，苦參堿含量分別為2.11、2.12、1.95、2.46、2.08、2.30、1.89、2.53、2.23、2.22mg/片，平均含量2.19mg/片，均符合成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定（苦參堿含量1mg/片）。

3 討論

復(fù)方石韋片原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中苦參堿的含量測定方法采用薄層掃描法[2]。此方法雖然具有快速、簡便的特點(diǎn)，但準(zhǔn)確度、精密度不甚理想，測定誤差一般在±2-±5%的范圍內(nèi)。薄層掃描法的誤差主要由薄層性質(zhì)及操作方法引起，同時(shí)也與掃描定量方法的選擇、掃描參數(shù)的設(shè)定等因素有關(guān)。此外，苦參堿薄層掃描法的提取方法較繁瑣，薄層色譜斑點(diǎn)與顯色劑反應(yīng)結(jié)果的重現(xiàn)性差。高效液相色譜法具有靈敏度高、分離性能好、適用范圍廣等特點(diǎn)，為更有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，采用高效液相色譜法替代原薄層色譜掃描法測定復(fù)方石韋薄膜衣片中苦參堿的含量。本研究通過提取溶劑、不同流動(dòng)相的選擇，得到了滿意的分離效果；通過加樣回收率、精密度實(shí)驗(yàn)等方法學(xué)的考察，表明HPLC測定復(fù)方石韋薄膜衣片中苦參堿含量的方法簡便易行、結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好，可用于測定復(fù)方石韋薄膜衣片中苦參堿的含量。

[1]李云章.山莊牌復(fù)方石韋片[J].中草藥，1997，28（3）：190.

[2]董海榮，楊穎.薄層掃描法測定復(fù)方石韋片中苦參堿的含量[J].中草藥，1999，30（1）：22-23.