• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    慢性疼痛基因治療的研究現(xiàn)狀

    2010-08-15 00:53:27田玉科楊少兵
    關(guān)鍵詞:基因治療麻醉學(xué)脂質(zhì)體

    田玉科 楊少兵

    華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院麻醉科教研室

    慢性疼痛是指急性組織損傷修復(fù)后疼痛持續(xù)狀態(tài)超過(guò)1個(gè)月或疼痛反復(fù)發(fā)作超過(guò)3個(gè)月以上。長(zhǎng)期嚴(yán)重的慢性疼痛會(huì)明顯影響患者生活質(zhì)量,給患者帶來(lái)生理、心理和社會(huì)功能的改變。目前的常規(guī)治療方法中沒(méi)有一種治療能獲得非常滿意的療效, 每種方法都存在一定的缺陷以及各種不良反應(yīng)。因此尋找一種安全有效、作用持久、經(jīng)濟(jì)方便、副作用小的鎮(zhèn)痛方法已成為目前研究的焦點(diǎn)。隨著細(xì)胞分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)的發(fā)展,基因治療作為一項(xiàng)新的生物治療手段,已被廣泛應(yīng)用于多種疾病的治療與研究。

    疼痛的基因療法是引入外源基因以超表達(dá)內(nèi)源性止痛物質(zhì)、抗炎物質(zhì)或抑制傷害性物質(zhì)的作用[1-4]而實(shí)現(xiàn)的。包括兩方面:一是上調(diào)抗痛基因的表達(dá),利用基因重組技術(shù)將抗痛基因、調(diào)控因子基因以及疼痛相關(guān)受體基因[5]插入載體,構(gòu)建重組病毒載體或非病毒載體,導(dǎo)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi),以初級(jí)傳入神經(jīng)和脊髓背角神經(jīng)作為靶點(diǎn)產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用;二是下調(diào)疼痛基因表達(dá),通過(guò)反義寡核苷酸使目標(biāo)蛋白水平下調(diào),降低神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)源性疼痛分子的表達(dá)以達(dá)到鎮(zhèn)痛目的,或者下調(diào)疼痛作用位點(diǎn),如蛋白激酶C、NMDA受體和神經(jīng)素1受體等。

    1 鎮(zhèn)痛基因

    1.1 阿片肽基因

    目前發(fā)現(xiàn)的阿片肽類(lèi)有二十多種,可分4類(lèi):腦啡肽類(lèi)、β-內(nèi)啡肽類(lèi)、強(qiáng)啡肽類(lèi)及前孤啡肽類(lèi)。目前用于鎮(zhèn)痛研究主要是前兩類(lèi):

    ①腦啡肽基因(enkephalin):包括甲硫氨酸腦啡肽和亮啡肽,是重要的鎮(zhèn)痛介質(zhì),對(duì)δ受體的選擇性較強(qiáng),許多抑制性遞質(zhì)通過(guò)腦啡肽介導(dǎo)的阿片受體作用發(fā)揮鎮(zhèn)痛效應(yīng)。研究人員將人前腦啡肽原基因插入單純皰疹病毒(HSV),在小鼠皮下注射腦啡肽原基因重組的病毒后,能逆轉(zhuǎn)百日咳細(xì)菌毒素所引起的熱痛敏,提示重組有人前腦啡肽原基因的病毒能削弱中樞調(diào)節(jié)的病理性疼痛和痛覺(jué)過(guò)敏[6]。此外,攜帶前腦啡肽原基因的HSV對(duì)嗎啡耐受的慢性疼痛具有鎮(zhèn)痛效果,而利用納洛酮拮抗可以逆轉(zhuǎn)其鎮(zhèn)痛效應(yīng)[7],這表明其鎮(zhèn)痛作用是通過(guò)阿片受體介導(dǎo)的。我們的研究也證實(shí)腦啡肽基因是一種良好的鎮(zhèn)痛基因:將腦啡肽基因轉(zhuǎn)染入永生化星形膠質(zhì)細(xì)胞,在注射入大鼠蛛網(wǎng)膜下腔后可表達(dá)腦啡肽,產(chǎn)生良好的鎮(zhèn)痛效果[8],利用慢病毒作用載體也有同樣的鎮(zhèn)痛效應(yīng)[9]。

    ②β-內(nèi)啡肽基因(beta-endorphin):β-內(nèi)啡肽對(duì)μ和δ受體均有較強(qiáng)的親和力,它的鎮(zhèn)痛效應(yīng)要強(qiáng)于腦啡肽。β-內(nèi)啡肽能夠直接作用于脊髓的μ受體,還能夠通過(guò)結(jié)合脊髓后角中的ε受體,增加腦啡肽的分泌從而產(chǎn)生更強(qiáng)的鎮(zhèn)痛效應(yīng)。研究人員將β-內(nèi)啡肽基因轉(zhuǎn)入大鼠疼痛模型,測(cè)量大鼠的熱痛和機(jī)械痛,并測(cè)定腦脊液內(nèi)β-內(nèi)啡肽的濃度,發(fā)現(xiàn)β-內(nèi)啡肽的表達(dá)量明顯提高,大鼠痛閾也相應(yīng)增高[10]。

    1.2 細(xì)胞因子家族

    可用于慢性疼痛基因治療的免疫調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子有IL-2和IL-10,具有中樞和外周鎮(zhèn)痛作用。Yao等[11]將IL-2基因重組在pcDNA3.1上,構(gòu)建大鼠疼痛模型后測(cè)量其熱痛閾,發(fā)現(xiàn)采用轉(zhuǎn)IL-2基因能明顯發(fā)揮鎮(zhèn)痛效應(yīng),且鎮(zhèn)痛效果同IL-2基因表達(dá)水平成正相關(guān)。

    1.3 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子

    神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子是一類(lèi)能夠促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞分化和再生、刺激神經(jīng)遞質(zhì)釋放及改變神經(jīng)元特性的蛋白分子,目前用于基因治療的主要是腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)。BDNF能在大腦和脊髓水平調(diào)節(jié)神經(jīng)肽的功能,從而抑制疼痛信息的傳遞。Cejas等[12]用永生化神經(jīng)細(xì)胞株轉(zhuǎn)染BDNF基因后,移植到疼痛模型大鼠的蛛網(wǎng)膜下腔,在第2~7周發(fā)現(xiàn)能明顯降低觸誘發(fā)痛和熱痛過(guò)敏。

    1.4 疼痛傳導(dǎo)路徑

    痛覺(jué)由外周神經(jīng)進(jìn)入脊髓背角,在此更換神經(jīng)元后發(fā)出纖維交叉到對(duì)側(cè),經(jīng)脊髓丘腦側(cè)束上行抵達(dá)丘腦,并經(jīng)過(guò)換元進(jìn)一步投射到大腦皮層,其中的任何一個(gè)環(huán)節(jié)都可能是治療疼痛的潛在靶點(diǎn)。例如,NR2B是神經(jīng)元胞膜NMDA受體(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)的2B亞基,在脊髓水平主要分布于脊髓背角的淺層,參與痛覺(jué)信息的傳遞和調(diào)控。我們將NR2B基因插入腺病毒,能在大鼠體內(nèi)表達(dá)NR2B抗原以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生NR2B特異性抗體,并與神經(jīng)元或膠質(zhì)細(xì)胞膜上的NR2B結(jié)合,下調(diào)NR2B的表達(dá)或阻斷NR2B的激活,在神經(jīng)病理性疼痛模型中發(fā)揮良好的鎮(zhèn)痛作用[13,14]。

    2 基因轉(zhuǎn)移載體

    載體攜帶目的基因的高效表達(dá)是基因治療成功的關(guān)鍵。目前將轉(zhuǎn)基因物質(zhì)導(dǎo)入靶組織的有效方法有多種[2],可用物理方法如電穿孔、超聲、基因槍等,也可用生物或化學(xué)載體的方法。載體方法可粗略分為兩大類(lèi):病毒載體和非病毒載體。

    2.1 病毒載體

    病毒載體以病毒顆粒的方式,通過(guò)病毒包膜蛋白和宿主細(xì)胞膜的相互作用,使外源基因進(jìn)入宿主細(xì)胞內(nèi)。病毒載體轉(zhuǎn)染效率高,轉(zhuǎn)基因表達(dá)穩(wěn)定。這些病毒載體包括腺病毒、腺相關(guān)病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒和單純皰疹病毒。

    2.1.1 腺病毒及腺相關(guān)病毒腺病毒載體

    不同于單鏈逆轉(zhuǎn)錄DNA 病毒載體感染分裂細(xì)胞,它在分裂和非分裂細(xì)胞中均有高轉(zhuǎn)染效率。有研究證明鞘內(nèi)注射腺病毒載體后主要感染腦膜細(xì)胞,提示腺病毒載體可能有其他特異性的靶細(xì)胞[15]。我們的研究采用腺病毒作為載體能夠有效表達(dá)目的基因,從而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛效果[13,14]。腺病毒靶細(xì)胞的高逆轉(zhuǎn)引起的外源基因瞬時(shí)表達(dá)是限制其應(yīng)用的最大障礙。對(duì)腺病毒載體進(jìn)行修飾即為腺相關(guān)病毒載體,其本身無(wú)害,也不致炎或產(chǎn)生抗體。利用腺相關(guān)病毒感染坐骨神經(jīng),可以發(fā)現(xiàn)在背根神經(jīng)節(jié)上的細(xì)、中和粗神經(jīng)纖維均能有效地表達(dá)[16]。相似的研究也證實(shí):攜帶IL-10基因的腺病毒或腺相關(guān)病毒,在注射入蛛網(wǎng)膜下腔后移入腦膜細(xì)胞,能逆轉(zhuǎn)脊神經(jīng)結(jié)扎誘發(fā)的慢性疼痛癥狀[17,18]。

    2.1.2 單純皰疹病毒(Herpes Simplex Virus, HSV)

    HSV為雙鏈DNA病毒,其固有靶細(xì)胞是初級(jí)傳入神經(jīng)元,這賦予其它載體系統(tǒng)所不能相比的優(yōu)越性,而其它載體系統(tǒng)沒(méi)有特異性的靶細(xì)胞[19,20]。皮下注射HSV后,直接感染神經(jīng)元,經(jīng)過(guò)幾個(gè)周期的復(fù)制,進(jìn)入外周傳入神經(jīng)末梢,逆行至脊髓背根感覺(jué)神經(jīng)節(jié)胞體,在胞體中潛伏并不與宿主染色體組發(fā)生整合。單純皰疹病毒載體有如下優(yōu)點(diǎn):由其嗜神經(jīng)性能夠作用于專(zhuān)一的靶細(xì)胞;經(jīng)過(guò)神經(jīng)軸突進(jìn)入中樞,避免了血腦屏障的障礙,給藥方式簡(jiǎn)便,能減少給藥次數(shù)及減輕藥物的副作用。這些優(yōu)點(diǎn)使HSV在慢性疼痛的基因治療中頗具前景[21,22]。

    2.2 非病毒載體

    包括細(xì)胞載體、脂質(zhì)體載體、細(xì)菌載體、人工染色體載體及受體載體等。細(xì)胞載體包括早期使用的腫瘤細(xì)胞,和最近研究較多的神經(jīng)干細(xì)胞、永生化神經(jīng)細(xì)胞,以及骨髓間充質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、造血干細(xì)胞等其他非神經(jīng)細(xì)胞,具有取材和培養(yǎng)方便、基因轉(zhuǎn)染容易、表達(dá)效率高、無(wú)移植排斥反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn),動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中能發(fā)揮較好的鎮(zhèn)痛效應(yīng)[8]。脂質(zhì)體載體已經(jīng)用于臨床,目前用于基因治療載體的脂質(zhì)體及其類(lèi)似物包括陽(yáng)離子脂質(zhì)體及其類(lèi)似物如脂聚-L/D-賴(lài)氨酸、聚陽(yáng)離子脂質(zhì)體、陰離子脂質(zhì)體、pH敏感型脂質(zhì)體、融合脂質(zhì)體以及在脂質(zhì)體上連接糖脂或含多羥基物質(zhì)(如PEG)的立體穩(wěn)定性脂質(zhì)體等[23]。目前細(xì)菌作為基因治療載體的實(shí)驗(yàn)均是在小鼠體內(nèi)完成,載體的效力和安全性尚有待進(jìn)一步研究[24]。

    3 慢性疼痛基因治療的臨床研究

    目前關(guān)于慢性疼痛的基因治療大都只限于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)水平,雖然在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)擁有很好的鎮(zhèn)痛效果,但是由于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的局限性,使基因鎮(zhèn)痛療法離臨床應(yīng)用依然十分遙遠(yuǎn)。

    目前研究人員已經(jīng)開(kāi)始關(guān)注基因治療的臨床應(yīng)用前景。2009年Wolfe的研究小組[25,26]率先將基因治療疼痛帶入臨床研究階段中。他們首先進(jìn)行了完善的臨床前期準(zhǔn)備。在構(gòu)建了HSV介導(dǎo)的前腦啡肽原表達(dá)載體和谷氨酸脫羧酶(Glutamic Acid Decarboxylase,GAD)表達(dá)載體后,通過(guò)動(dòng)物疼痛模型觀察了兩種HSV病毒載體的鎮(zhèn)痛效果。之后進(jìn)一步對(duì)該病毒載體進(jìn)行基因修飾,以減少其同源性重組和野生型突變的發(fā)生率。兩種基因載體經(jīng)皮下注射小鼠后檢測(cè)各組織中HSV所攜帶目的基因的表達(dá)水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)除了注射部位皮膚、鄰近肌肉組織以及相應(yīng)節(jié)段的DRG神經(jīng)元中發(fā)現(xiàn)目的基因前腦啡肽原和GAD的表達(dá)外,其他組織中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯的表達(dá),表明該基因載體擁有良好的生物學(xué)分布特性。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)小鼠的體重、進(jìn)食沒(méi)有變化,各種組織在肉眼及顯微鏡下均未見(jiàn)明顯的病理學(xué)改變,小鼠的各項(xiàng)血液生化指標(biāo)也均正常。這些臨床前期研究表明,HSV介導(dǎo)的鎮(zhèn)痛基因載體不僅擁有良好的鎮(zhèn)痛效果,而且擁有良好的靶向性,在生物學(xué)分布以及毒理學(xué)上已符合臨床研究的要求。這些都是基因治療疼痛應(yīng)用于臨床人群的基本要求,同時(shí)也是一直以來(lái)限制基因治療手段應(yīng)用于臨床的主要因素。Wolfe的研究小組[25,26]在完善的臨床前期準(zhǔn)備后將這兩種HSV基因載體應(yīng)用于12~24名頑固性癌痛患者,比較不同濃度病毒的鎮(zhèn)痛效果,并觀察臨床副作用。目前該實(shí)驗(yàn)結(jié)果尚未報(bào)道。這是首次將基因治療慢性疼痛應(yīng)用于臨床人群,其結(jié)果值得期待。

    4 慢性疼痛基因治療存在的問(wèn)題

    4.1 慢性疼痛基因治療的安全性

    4.1.1 載體的安全性

    非病毒載體一般無(wú)毒,而病毒載體都具有一定的神經(jīng)毒性,特別是HSV。腺病毒的毒性反應(yīng)主要是通過(guò)激發(fā)細(xì)胞免疫反應(yīng)造成炎性浸潤(rùn)。同源性重組和野生型突變,以及病毒基因整合入宿主DNA所產(chǎn)生的影響是限制病毒載體應(yīng)用的一個(gè)主要因素。研究表明腺相關(guān)病毒能夠整合到宿主DNA中,破壞一些重要基因如腫瘤抑制基因、癌基因等,導(dǎo)致腫瘤的產(chǎn)生,從而成為致癌物質(zhì)[27]。

    另外,病毒載體的免疫反應(yīng)也是其毒性之一。腺相關(guān)病毒能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫反應(yīng),不僅能夠在外周血清中檢測(cè)出抗體,而且在中樞系統(tǒng)中的腦脊液、腦實(shí)質(zhì)等也能發(fā)現(xiàn)抗體的存在[28-30]。尤其是當(dāng)腺相關(guān)病毒攜帶異原性基因時(shí),更容易誘發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng)。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)雖然沒(méi)有發(fā)現(xiàn)腺相關(guān)病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫,而在一些臨床試驗(yàn)中卻發(fā)現(xiàn)腺相關(guān)病毒能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫反應(yīng),并使病毒所攜帶的目的基因不能表達(dá)[31],但是關(guān)于這一方面的臨床研究非常有限,缺乏足夠的數(shù)據(jù)支持。

    4.1.2 基因產(chǎn)物的安全性

    基因產(chǎn)物的有效表達(dá)是達(dá)到鎮(zhèn)痛目的的關(guān)鍵因素,但是其過(guò)量表達(dá)可能會(huì)引起相應(yīng)的副作用,導(dǎo)致神經(jīng)功能的損害,如含阿片肽基因載體的過(guò)量表達(dá)可能會(huì)導(dǎo)致呼吸抑制和成癮性的產(chǎn)生。

    當(dāng)所選擇的鎮(zhèn)痛靶點(diǎn)不僅僅在疼痛中起重要作用時(shí),其過(guò)量表達(dá)也會(huì)可能引起其他的副作用。如利用蛋白激酶C、NMDA受體、BDNF等基因治療疼痛時(shí),均存在這種可能性。以NMDA受體為例,NMDA受體是腦內(nèi)受谷氨酸調(diào)控的一類(lèi)興奮性氨基酸受體,被激活后可引起鈣內(nèi)流,而鈣內(nèi)流是傳遞一些細(xì)胞內(nèi)生理病理信號(hào)的重要途徑。其不僅參與了疼痛病理過(guò)程,而且廣泛參與機(jī)體的多種生理活動(dòng),如學(xué)習(xí)記憶、突觸可塑性等,并在其中起著重要的作用[32]。以NMDA受體作為基因治療的靶點(diǎn),在達(dá)到鎮(zhèn)痛目的的同時(shí)可能會(huì)影響到正常的生理功能,改變神經(jīng)元的突觸可塑性,甚至產(chǎn)生認(rèn)知功能的損害。我們?cè)诶肗MDA基因治療慢性疼痛時(shí)已經(jīng)注意到這些問(wèn)題,并對(duì)大鼠的認(rèn)知功能和運(yùn)動(dòng)功能進(jìn)行了相應(yīng)的觀察,其結(jié)果令人滿意[14,33]。

    4.2 基因治療疼痛的障礙

    大多數(shù)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)受到血腦屏障的障礙。血腦屏障是中樞神經(jīng)系統(tǒng)與外周之間的生理屏障和代謝屏障,它是一種動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu),能夠根據(jù)機(jī)體環(huán)境快速做出調(diào)整以維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)。研究表明病毒載體、裸寡核苷酸等基因治療手段均不能有效進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)。解決這一問(wèn)題的方法有:①直接從實(shí)質(zhì)內(nèi)或蛛網(wǎng)膜下注射復(fù)合物;②繞開(kāi)血腦屏障轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入中樞;③一過(guò)性地破壞血腦屏障,使注射的復(fù)合物能透過(guò)。第一種方法雖然能夠取得最為直接的鎮(zhèn)痛效果,但其注射方式所帶來(lái)的創(chuàng)傷也不容忽視。HSV是第二種方法的典型代表,利用HSV作為載體能夠經(jīng)過(guò)外周內(nèi)源性軸漿轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)繞開(kāi)血腦屏障,進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng),這似乎是疼痛基因治療的理想方法。第三種方法也許會(huì)拓寬我們的治療手段,例如疼痛對(duì)血腦屏障通透性的影響,使得外周用藥進(jìn)入中樞系統(tǒng)成為可能。因?yàn)榘ㄌ弁丛趦?nèi)的一些病理狀態(tài)會(huì)影響血腦屏障的結(jié)構(gòu)和功能,使其通透性發(fā)生相應(yīng)的調(diào)整。而且,疼痛引起的炎性反應(yīng)也能破壞內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連接和粘著連接,形成內(nèi)皮裂縫,導(dǎo)致血腦屏障的完整性遭到破壞,通透性增加[34]。這為外周給藥到中樞神經(jīng)系統(tǒng)提供了良好的途徑。

    隨著生物治療技術(shù)的發(fā)展,有望發(fā)現(xiàn)并篩選出更為合適的基因載體,能夠更有效地表達(dá)目的基因;同時(shí)對(duì)慢性疼痛機(jī)制的深入研究,會(huì)發(fā)現(xiàn)更為明確的疼痛干擾基因,將兩者有效結(jié)合有望能為慢性疼痛患者帶來(lái)滿意的治療效果。而且,在對(duì)基因治療安全性的不斷追求與驗(yàn)證中,基因治療這一新穎的治療方法不僅能夠提供足夠的鎮(zhèn)痛效果,還能為慢性疼痛患者排除其他治療手段所帶來(lái)的副作用。

    [1]Meunier A., Braz J, Cesselin F, et al. From inflammation to pain:experimental gene therapy[J]. Med Sci (Paris), 2004, 20(3): 325-30.

    [2]Pohl M, Braz J. Gene therapy of pain: emerging strategies and future directions[J]. Eur J Pharmacol., 2001, 429(1-3): 39-48.

    [3]Pohl M, Meunier A, Hamon M, et al. Gene therapy of chronic pain [J]. Curr Gene Ther., 2003, 3(3): 223-38.

    [4]Glorioso JC, Mata M, Fink DJ. Gene therapy for chronic pain [J]. Curr Opin Mol Ther., 2003, 5(5): 483-8.

    [5]Xu Y, Gu Y, Xu GY, et al. Adeno-associated viral transer of opioid receptor gene to primary sensory neurons: a strategy to increase opioid antinociception [J]. Proc Natl Acad Sci USA., 2003, 100: 6204-9.

    [6]Yeomans DC ,Jones T ,Laurito CE, et al. Reversal of ongoing thermal hyperalgesia in mice by a recombinant herpesvirus that encodes human preproenkephalin[J]. Mol Ther., 2004, 9 (1) : 24-9.

    [7]Yoshimura N, Franks ME, Sasaki K, et al. Gene therapy of bladder pain with herpes simplex virus (HSV) vectors expressing preproenkephalin(PPE) [J]. Urology, 2001, 57:116.

    [8]Xu Y, Tian XB, An K, et al. Lumbar transplantation of immortalized enkephalin-expressing astrocytes attenuates chronic neuropathic pain[J].Eur J Pain., 2008, 12(4): 525-33.

    [9]Tian X, Wang G, Xu Y, et al. An improved tet-on system for gene expression in neurons delivered by a single lentiviral vector [J]. Hum Gene Ther., 2009, 20(2): 113-23.

    [10]Wu CM, Lin MW, Cheng JT, et al. Regulated ,electroporation-mediated delivery of pro- opiomelanocortin gene suppresses chronic constriction injury-induced neuropathic pain in rats[J ]. Gene Ther., 2004, 11(11): 933-40.

    [11]Yao MZ, Gu JF, Wang JH, et al. Adenovirus-mediated interleukin-2 gene therapy of nociception [J]. Gene Ther., 2003, 10 (16) :1392-9.

    [12]Cejas PJ ,Martinez M ,Karmally S, et al. Lumbar transplant of neurons genetically modified to secrete brain - derived neurotrophic factor attenuates allodynia and hyperalgesia after sciatic nerve constriction [J].Pain, 2000, 86 (1-2): 195-210.

    [13]Wang GM, Tian YK, Chen JP, et al. Evaluation of NR2B peptide as subunit vaccines against experimental neuropathic pain [J]. Chin Med J (Engl).,2007, 120(8): 643-7.

    [14]Wang GM, Tian XB, Chen JP, et al. Prevention of neuropathic pain in an animal model of spare nerve injury following oral immunization with recombinant adenovirus serotype 5-mediated NR2B gene transfer [J].Gene Ther., 2007, 14(24): 1681-7.

    [15]Gudmundsson G, Bosch A, Davidson BL, et al. Interleukin-10 modulates the severity of hypersensitivity pneumonitis in mice [J]. Am J Respir Cell Mol Biol., 1998, 19(5): 812-8.

    [16]Gu Y, Xu Y, Li GW, et al. Remote nerve injection of mu opioid receptor adeno-associated viral vector increases antinociception of intrathecal morphine[J]. J Pain.,2005, 6(5): 447-54.

    [17]Milligan ED, Sloane EM, Langer SJ, et al. Controlling neuropathic pain by adeno-associated virus driven production of the anti-in fl ammatory cytokine,interleukin-10[J]. Mol Pain., 2005, 1:9.

    [18]Milligan ED, Langer SJ, Sloane EM, et al. Controlling pathological pain by adenovirally driven spinal production of the anti-in fl ammatory cytokine,interleukin-10[J]. Eur J Neurosci., 2005a, 21(8): 2136-48.

    [19]Mata M, Hao S, Fink DJ. Gene therapy directed at the neuroimmune component of chronic pain with particular attention to the role of TNF-α[J].Neurosci Lett., 2008, 437(3): 209-13.

    [20]Mata M, Glorioso J, Fink DJ. Development of HSV-mediated gene transfer for the treatment of chronic pain [J]. Exp Neurol., 2003, 184(Suppl 1):S25-9.

    [21]Zhou Z, Peng X, Hao S, et al. HSV-mediated transfer of interleukin-10 reduces inflammatory pain through modulation of membrane tumor necrosis factor alpha in spinal cord microglia [J]. Gene Ther., 2008, 15(3):183-90.

    [22]Hao S, Mata M, Glorioso JC, et al. HSV-mediated expression of interleukin-4 in dorsal root ganglion neurons reduces neuropathic pain[J].Mol Pain., 2006, 2:6.

    [23]Ramesh R ,Saeki T ,Templeton NS, et al. Successful treatment of primary and disseminated human lung cancers by systemic delivery of tumor suppressor genes using an improved liposome vector[J]. Mol Ther., 2001,3(3): 337-50.

    [24]Mei S, Theys J, Landuyt W, et al. Optimization of tumor-targeted gene delivery by engineered attenuated Salmonella typhimurium[J]. Anticancer Res., 2002, 22 (6A): 3261-6.

    [25]Wolfe D, Wechuck J, Krisky D, et al. A Clinical Trial of Gene Therapy for Chronic Pain [J]. Pain Med., 2009, 10(7): 1325-30.

    [26]Wolfe D, Mata M, Fink DJ. A human trial of HSV mediated gene transfer for the treatment of chronic pain [J]. Gene Therapy, 2009,16(4): 455-60.

    [27]Smith RH. Adeno-associated virus integration: virus versus vector [J].Gene Therapy, 2008, 15: 817–22.

    [28]Kaplitt MG, Feigin A, Tang C, et al. Safety and tolerability of gene therapy with an adenoassociated virus (AAV) borne GAD gene for Parkinson’s disease: an open label, phase I trial[J]. Lancet, 2007, 369: 2097-105.

    [29]Marks Jr WJ, Ostrem JL, Verhagen L, et al. Safety and tolerability of intraputaminal delivery of CERE-120 (adeno-associated virus serotype 2-neurturin) to patients with idiopathic Parkinson’s disease: an openlabel, phase I trial[J]. Lancet Neurol, 2008, 7:400-8.

    [30]Worgall S, Sondhi D, Hackett NR, et al. Treatment of late infantile neuronal ceroid lipofuscinosis by CNS administration of a serotype 2 adenoassociated virus expressing CLN2 cDNA[J]. Hum Gene Ther., 2008,19: 463-74.

    [31]Herzog RW. Immune responses to AAV capsid: are mice not humans after all[J]? Mol Ther., 2007, 15: 649-50.

    [32]Kalia LV, Kalia SK, Salter MW. NMDA receptors in clinical neurology:excitatory times ahead[J]. Lancet Neurol., 2008, 7(8):742-55.

    [33]楊少兵, 王公明, 田玉科, 等. rAd5/NR2B鎮(zhèn)痛疫苗對(duì)神經(jīng)病理性痛大鼠認(rèn)知功能的影響[J]. 中華麻醉學(xué)雜志, 2010, 30(2): 162-4.

    [34]Lalive PH. Autoantibodies in in fl ammatory demyelinating diseases of the central nervous system[J]. Swiss Med Wkly., 2008, 138(47-48): 692-707.

    傅志儉,女,主任醫(yī)師,山東大學(xué)教授、博士生導(dǎo)師,現(xiàn)任山東省立醫(yī)院麻醉科主任兼疼痛科主任。

    為國(guó)際疼痛研究會(huì)(IASP)會(huì)員、中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)麻醉學(xué)醫(yī)師分會(huì)副主任委員、中華醫(yī)學(xué)會(huì)疼痛學(xué)分會(huì)常務(wù)委員、山東省醫(yī)師協(xié)會(huì)麻醉學(xué)醫(yī)師分會(huì)主任委員、山東省醫(yī)學(xué)會(huì)疼痛學(xué)分會(huì)主任委員、山東省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)麻醉與鎮(zhèn)痛專(zhuān)業(yè)委員會(huì)副主任委員、《中華麻醉學(xué)雜志》通訊編委、《國(guó)際麻醉學(xué)與復(fù)蘇雜志》、《中國(guó)疼痛醫(yī)學(xué)雜志》、《臨床麻醉學(xué)雜志》、《實(shí)用疼痛學(xué)雜志》、《山東醫(yī)藥》、Anaesthesia(中文版)編委。

    電子郵箱:zhijian_fu@163.com

    田玉科,主任醫(yī)師、教授、博士生導(dǎo)師、博士后指導(dǎo)教師。

    現(xiàn)任華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院麻醉學(xué)教研室主任。中華醫(yī)學(xué)會(huì)理事、中華醫(yī)學(xué)會(huì)麻醉學(xué)分會(huì)副主任委員、中德醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)副理事長(zhǎng)、中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)麻醉學(xué)醫(yī)師分會(huì)常委、湖北省醫(yī)學(xué)會(huì)常務(wù)理事、中華醫(yī)學(xué)會(huì)武漢分會(huì)副會(huì)長(zhǎng)、武漢市科協(xié)委員、德國(guó)麻醉與危重醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)“榮譽(yù)會(huì)士”、美國(guó)麻醉醫(yī)師協(xié)會(huì)會(huì)員;《中華麻醉學(xué)雜志》、《臨床麻醉學(xué)雜志》常務(wù)編委,《華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(英德文版)》,《臨床外科學(xué)雜志》編委。1992年起享受?chē)?guó)務(wù)院特殊津貼。

    從事臨床麻醉及危重醫(yī)學(xué)三十余年,主要研究方向?yàn)樘弁椿A(chǔ)與治療,麻醉與免疫,血液稀釋在圍術(shù)期的應(yīng)用。近年來(lái)在國(guó)際國(guó)內(nèi)專(zhuān)業(yè)雜志上發(fā)表論文二百余篇,SCI收錄8篇,其主要研究成果發(fā)表在Gene Therapy、Huamn Gene Therapy、European Journal of Pain、Brain Research等雜志。主編著作4部,副主編著作2部,參編教材及著作十余部。先后以課題負(fù)責(zé)人承擔(dān)國(guó)家自然科學(xué)基金4項(xiàng),國(guó)家教育部歸國(guó)人員基金1項(xiàng),國(guó)家教育部博士點(diǎn)基金1項(xiàng),湖北省科技廳重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目2項(xiàng),湖北省衛(wèi)生廳科研基金1項(xiàng),國(guó)際合作課題2項(xiàng)。

    2006年獲湖北省科技進(jìn)步二等獎(jiǎng)1項(xiàng),2001年獲湖北省科技進(jìn)步三等獎(jiǎng)1項(xiàng),1999年湖北省衛(wèi)生廳科技進(jìn)步二等獎(jiǎng)1項(xiàng),2005年、2006年連續(xù)兩年獲武漢市科技進(jìn)步三等獎(jiǎng)1項(xiàng)。

    電子郵箱:yktian@tjh.tjmu.edu.cn

    猜你喜歡
    基因治療麻醉學(xué)脂質(zhì)體
    PEG6000修飾的流感疫苗脂質(zhì)體的制備和穩(wěn)定性
    麻醉學(xué)省級(jí)一流本科專(zhuān)業(yè)建設(shè)的探索與實(shí)踐
    ——以川北醫(yī)學(xué)院為例
    麻醉學(xué)專(zhuān)業(yè)導(dǎo)論課程教學(xué)的回顧與展望
    中美麻醉學(xué)家合作研究發(fā)現(xiàn)丙泊酚可有效控制剖宮產(chǎn)術(shù)中產(chǎn)婦惡心
    超濾法測(cè)定甘草次酸脂質(zhì)體包封率
    中成藥(2018年2期)2018-05-09 07:20:08
    洪專(zhuān):中國(guó)基因治療領(lǐng)域的引路人
    基因治療在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用?
    首都醫(yī)科大學(xué)麻醉學(xué)系
    TPGS修飾青蒿琥酯脂質(zhì)體的制備及其體外抗腫瘤活性
    中成藥(2017年3期)2017-05-17 06:08:52
    封閉端粒酶活性基因治療對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的影響
    国产亚洲最大av| 插逼视频在线观看| 精品一区二区三卡| 在线观看人妻少妇| 日日啪夜夜爽| 十八禁国产超污无遮挡网站| 嘟嘟电影网在线观看| 能在线免费看毛片的网站| 99九九线精品视频在线观看视频| 看非洲黑人一级黄片| 男人舔奶头视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 精品久久久噜噜| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 能在线免费看毛片的网站| 在线 av 中文字幕| 高清欧美精品videossex| 国产综合精华液| 亚洲欧洲日产国产| 色综合站精品国产| 久久久久精品久久久久真实原创| 看免费成人av毛片| 日韩一区二区视频免费看| 成年版毛片免费区| eeuss影院久久| 一级a做视频免费观看| 好男人视频免费观看在线| 热99在线观看视频| 女人十人毛片免费观看3o分钟| av女优亚洲男人天堂| 国产乱人偷精品视频| 国产午夜精品论理片| 日本黄大片高清| 亚洲av成人精品一二三区| 日韩制服骚丝袜av| 91久久精品国产一区二区成人| 人妻系列 视频| 99热这里只有是精品50| 插逼视频在线观看| 99热网站在线观看| 亚洲精品久久午夜乱码| 直男gayav资源| 联通29元200g的流量卡| 麻豆久久精品国产亚洲av| 黑人高潮一二区| 国产在视频线精品| 中文字幕久久专区| 亚洲精品亚洲一区二区| or卡值多少钱| 亚洲精品456在线播放app| av在线亚洲专区| 免费看a级黄色片| 日韩强制内射视频| 国产一级毛片在线| 99re6热这里在线精品视频| av在线观看视频网站免费| 综合色av麻豆| 国产精品伦人一区二区| 亚洲经典国产精华液单| 久久久久久久久久黄片| 五月天丁香电影| 成人美女网站在线观看视频| 国产乱人视频| 国国产精品蜜臀av免费| 婷婷色av中文字幕| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 日本wwww免费看| 国产精品久久久久久av不卡| 日本一本二区三区精品| 中文天堂在线官网| 一级片'在线观看视频| 久久久色成人| 久久久欧美国产精品| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久99热这里只频精品6学生| 极品教师在线视频| 精品国产露脸久久av麻豆 | 亚洲最大成人手机在线| 日韩欧美一区视频在线观看 | 特大巨黑吊av在线直播| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 五月玫瑰六月丁香| 麻豆乱淫一区二区| 看十八女毛片水多多多| 亚洲国产av新网站| 好男人在线观看高清免费视频| 国产色婷婷99| 91久久精品电影网| 日韩强制内射视频| 免费看日本二区| 岛国毛片在线播放| 亚洲综合色惰| 精品一区二区三区视频在线| 尾随美女入室| 精品一区二区免费观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产熟女欧美一区二区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 亚洲国产精品国产精品| 91久久精品电影网| 国产av国产精品国产| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲电影在线观看av| 一边亲一边摸免费视频| 三级国产精品片| 欧美+日韩+精品| 日本午夜av视频| 国产成人a∨麻豆精品| 丝瓜视频免费看黄片| 色网站视频免费| 爱豆传媒免费全集在线观看| 麻豆av噜噜一区二区三区| 国产成人freesex在线| 男人舔女人下体高潮全视频| 六月丁香七月| 中文字幕久久专区| 亚洲精品成人久久久久久| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 久久久久久久久久久丰满| 国产精品久久久久久久电影| 超碰av人人做人人爽久久| 免费黄网站久久成人精品| 欧美区成人在线视频| 2018国产大陆天天弄谢| 成人鲁丝片一二三区免费| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 亚洲av成人精品一二三区| 男插女下体视频免费在线播放| 国产色婷婷99| 国产一区二区在线观看日韩| 免费观看的影片在线观看| 欧美3d第一页| 老女人水多毛片| 欧美变态另类bdsm刘玥| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 我的女老师完整版在线观看| 天美传媒精品一区二区| 简卡轻食公司| 国产一区有黄有色的免费视频 | freevideosex欧美| 亚洲成人av在线免费| 免费看a级黄色片| 亚洲精品国产成人久久av| 99热全是精品| 啦啦啦韩国在线观看视频| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 午夜福利成人在线免费观看| 久久亚洲国产成人精品v| 国产免费一级a男人的天堂| 国产精品无大码| 床上黄色一级片| 免费观看的影片在线观看| 国产乱人偷精品视频| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 国产午夜福利久久久久久| 日韩人妻高清精品专区| 26uuu在线亚洲综合色| 爱豆传媒免费全集在线观看| av一本久久久久| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲最大成人手机在线| 午夜精品国产一区二区电影 | 日韩欧美精品免费久久| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 国产在视频线精品| 亚洲av电影不卡..在线观看| 午夜视频国产福利| 女人久久www免费人成看片| 亚洲欧美精品专区久久| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲综合精品二区| 51国产日韩欧美| 亚洲精品一区蜜桃| 成人午夜精彩视频在线观看| 久久亚洲国产成人精品v| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲欧美精品专区久久| 淫秽高清视频在线观看| 美女cb高潮喷水在线观看| 美女cb高潮喷水在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 在线a可以看的网站| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 黄片wwwwww| 精品午夜福利在线看| 国内精品宾馆在线| a级毛色黄片| 日韩欧美国产在线观看| 波多野结衣巨乳人妻| 永久网站在线| 日韩大片免费观看网站| 两个人视频免费观看高清| 水蜜桃什么品种好| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲欧美日韩东京热| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 91精品伊人久久大香线蕉| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 最新中文字幕久久久久| 亚洲av一区综合| 久99久视频精品免费| 久久精品国产亚洲av天美| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 男女边摸边吃奶| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 久久久久久久久大av| 久久久久久国产a免费观看| 一级毛片电影观看| 精品久久久精品久久久| 美女高潮的动态| 丝袜喷水一区| 少妇熟女aⅴ在线视频| freevideosex欧美| 国产av不卡久久| 嫩草影院入口| 色尼玛亚洲综合影院| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 国产三级在线视频| 综合色av麻豆| 国产精品嫩草影院av在线观看| 99热这里只有精品一区| 久久久久久久久中文| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲成人中文字幕在线播放| 一级二级三级毛片免费看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲图色成人| 搞女人的毛片| 午夜福利在线在线| 听说在线观看完整版免费高清| 久99久视频精品免费| 啦啦啦韩国在线观看视频| 欧美三级亚洲精品| 精品国产三级普通话版| 久久99热这里只频精品6学生| 秋霞在线观看毛片| 久久久精品免费免费高清| 欧美精品一区二区大全| 国产亚洲91精品色在线| 国产片特级美女逼逼视频| 日韩视频在线欧美| 1000部很黄的大片| 有码 亚洲区| 简卡轻食公司| 国产在线男女| 人人妻人人澡欧美一区二区| 搡老乐熟女国产| 国产美女午夜福利| 成人综合一区亚洲| 免费观看av网站的网址| 免费av毛片视频| 日本一二三区视频观看| 亚洲在线观看片| 中文天堂在线官网| 欧美另类一区| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲无线观看免费| 亚洲精品aⅴ在线观看| 男女国产视频网站| 亚洲一区高清亚洲精品| 久久精品国产亚洲av涩爱| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲国产精品成人综合色| 久久久久久久国产电影| 国产精品1区2区在线观看.| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 日日摸夜夜添夜夜爱| 直男gayav资源| 国产一级毛片七仙女欲春2| 久久久国产一区二区| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 欧美日韩在线观看h| 青春草亚洲视频在线观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 一个人看视频在线观看www免费| 日韩欧美精品v在线| 激情 狠狠 欧美| 国产69精品久久久久777片| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| or卡值多少钱| 国产91av在线免费观看| av在线亚洲专区| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲综合精品二区| 久久久久久久久中文| 日本与韩国留学比较| 国产高清有码在线观看视频| 中文字幕免费在线视频6| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产男人的电影天堂91| 五月天丁香电影| 中文资源天堂在线| 亚洲伊人久久精品综合| 69人妻影院| 观看免费一级毛片| 国产有黄有色有爽视频| 床上黄色一级片| 一级av片app| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 欧美日韩精品成人综合77777| 一夜夜www| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 天堂中文最新版在线下载 | 免费av不卡在线播放| 色吧在线观看| 亚洲人与动物交配视频| 国产探花极品一区二区| 美女黄网站色视频| 少妇熟女欧美另类| av福利片在线观看| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲欧美一区二区三区国产| 欧美人与善性xxx| 男女下面进入的视频免费午夜| 精品久久久久久久末码| av专区在线播放| 欧美bdsm另类| 在线 av 中文字幕| 久久久欧美国产精品| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 日韩亚洲欧美综合| 看免费成人av毛片| 丰满人妻一区二区三区视频av| 久久精品夜色国产| 亚洲,欧美,日韩| 在线观看免费高清a一片| 如何舔出高潮| 国产成人精品久久久久久| www.色视频.com| 熟女人妻精品中文字幕| 久久精品国产亚洲av涩爱| 99久久精品热视频| 亚洲国产精品成人综合色| 老女人水多毛片| 2022亚洲国产成人精品| 久久韩国三级中文字幕| 精品一区二区三卡| 亚洲熟女精品中文字幕| 男人狂女人下面高潮的视频| 深夜a级毛片| 成人鲁丝片一二三区免费| 久久99精品国语久久久| 国产精品一二三区在线看| 国产极品天堂在线| 三级国产精品片| 午夜日本视频在线| 少妇人妻精品综合一区二区| 亚洲av国产av综合av卡| 日本黄色片子视频| 婷婷色综合大香蕉| 国产久久久一区二区三区| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 中文字幕免费在线视频6| 日韩伦理黄色片| 国产v大片淫在线免费观看| av播播在线观看一区| 久久精品国产亚洲网站| 99re6热这里在线精品视频| 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲av不卡在线观看| 黄片无遮挡物在线观看| 国产精品久久久久久久久免| 婷婷色综合大香蕉| av线在线观看网站| 97超视频在线观看视频| 亚洲三级黄色毛片| 91久久精品国产一区二区三区| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 精品人妻偷拍中文字幕| 久久午夜福利片| av在线亚洲专区| 色综合亚洲欧美另类图片| 午夜激情福利司机影院| 国产在视频线在精品| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产淫语在线视频| 欧美三级亚洲精品| 日本av手机在线免费观看| 青春草视频在线免费观看| 搡女人真爽免费视频火全软件| 久久精品夜色国产| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 五月玫瑰六月丁香| 少妇熟女欧美另类| 免费大片黄手机在线观看| 午夜激情久久久久久久| 中文字幕亚洲精品专区| 1000部很黄的大片| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 久久久午夜欧美精品| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 尾随美女入室| 亚州av有码| 亚洲精品456在线播放app| 人妻夜夜爽99麻豆av| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产69精品久久久久777片| 1000部很黄的大片| 能在线免费看毛片的网站| 亚洲国产高清在线一区二区三| 五月天丁香电影| 日韩人妻高清精品专区| 最近的中文字幕免费完整| 2022亚洲国产成人精品| 成人亚洲精品av一区二区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 精品久久久久久久久久久久久| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 波多野结衣巨乳人妻| 久久久精品欧美日韩精品| 色5月婷婷丁香| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产亚洲精品久久久com| 中文天堂在线官网| 超碰97精品在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 内地一区二区视频在线| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 国产伦精品一区二区三区四那| 国国产精品蜜臀av免费| 伊人久久精品亚洲午夜| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 两个人的视频大全免费| 久久久久性生活片| 黄片wwwwww| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲18禁久久av| 国产成人午夜福利电影在线观看| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 色哟哟·www| 久久久久免费精品人妻一区二区| 亚洲精品影视一区二区三区av| 国产精品久久久久久久电影| 免费黄色在线免费观看| 免费观看a级毛片全部| 久久精品国产亚洲av天美| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 18+在线观看网站| 天美传媒精品一区二区| 国产av码专区亚洲av| 人妻少妇偷人精品九色| 免费观看a级毛片全部| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产黄a三级三级三级人| av在线亚洲专区| 性插视频无遮挡在线免费观看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 成人av在线播放网站| av在线观看视频网站免费| 亚洲人成网站在线播| 国产精品人妻久久久影院| 日韩电影二区| 久久这里只有精品中国| 日韩电影二区| 69人妻影院| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 最近2019中文字幕mv第一页| 亚洲欧美日韩无卡精品| 在线观看人妻少妇| 我要看日韩黄色一级片| 老司机影院毛片| 人妻少妇偷人精品九色| 3wmmmm亚洲av在线观看| 免费少妇av软件| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 白带黄色成豆腐渣| 简卡轻食公司| 久久精品国产自在天天线| 久久久a久久爽久久v久久| 国产视频首页在线观看| .国产精品久久| 精品一区二区三区视频在线| 日本色播在线视频| 免费少妇av软件| 免费看美女性在线毛片视频| 高清午夜精品一区二区三区| 少妇人妻精品综合一区二区| 久久这里只有精品中国| 日韩欧美一区视频在线观看 | 日本黄大片高清| 国产亚洲一区二区精品| 美女国产视频在线观看| 18+在线观看网站| 男女视频在线观看网站免费| 国产高潮美女av| 亚洲一区高清亚洲精品| 97超视频在线观看视频| 日韩成人伦理影院| av女优亚洲男人天堂| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲人成网站在线播| 一边亲一边摸免费视频| 久久鲁丝午夜福利片| 国产亚洲av嫩草精品影院| 神马国产精品三级电影在线观看| 亚洲av在线观看美女高潮| 爱豆传媒免费全集在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产亚洲91精品色在线| 成人二区视频| 91精品一卡2卡3卡4卡| 精品一区在线观看国产| 少妇的逼水好多| 国产精品av视频在线免费观看| 中文字幕亚洲精品专区| 五月伊人婷婷丁香| 特大巨黑吊av在线直播| 欧美bdsm另类| 国产91av在线免费观看| 亚洲av成人精品一二三区| 直男gayav资源| 我的女老师完整版在线观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲人成网站在线观看播放| 日韩强制内射视频| 人妻一区二区av| 欧美zozozo另类| 在线a可以看的网站| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 精品熟女少妇av免费看| 日韩亚洲欧美综合| 国产永久视频网站| 青春草国产在线视频| 日本午夜av视频| 久久久久久久久久久丰满| 亚州av有码| 99久久精品一区二区三区| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产探花极品一区二区| 国产精品久久久久久av不卡| 在线天堂最新版资源| 精品一区二区三区视频在线| 久久久午夜欧美精品| 在线观看一区二区三区| 嘟嘟电影网在线观看| 久久这里只有精品中国| 真实男女啪啪啪动态图| 一级片'在线观看视频| 看黄色毛片网站| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 搞女人的毛片| 毛片一级片免费看久久久久| 国产精品久久久久久久电影| 久久久久精品性色| 久久热精品热| 欧美3d第一页| 少妇丰满av| 最近最新中文字幕大全电影3| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 床上黄色一级片| 在线播放无遮挡| 日日摸夜夜添夜夜爱| 插逼视频在线观看| 能在线免费观看的黄片| 亚洲精品,欧美精品| 精品久久久久久成人av| 在线免费观看的www视频| 欧美潮喷喷水| 嫩草影院精品99| 黄色一级大片看看| 精品久久久精品久久久| ponron亚洲| 婷婷色av中文字幕| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产大屁股一区二区在线视频| 日韩av免费高清视频| 色5月婷婷丁香| 亚洲精品影视一区二区三区av| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 三级经典国产精品| 国产精品国产三级国产专区5o| 五月玫瑰六月丁香| h日本视频在线播放| 国产中年淑女户外野战色| 亚洲精品色激情综合| 亚洲色图av天堂| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲内射少妇av| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 亚洲怡红院男人天堂| 麻豆成人av视频| 熟女人妻精品中文字幕| 最近最新中文字幕免费大全7| 免费大片黄手机在线观看| 免费在线观看成人毛片| 亚洲国产欧美在线一区| av福利片在线观看| 嘟嘟电影网在线观看| 淫秽高清视频在线观看| 日本黄大片高清| 精品亚洲乱码少妇综合久久|