改良EDTA-Na2滴定法測定乳鈣的方法

李 群 王桂芝 黑龍江省鶴崗疾病預(yù)防控制中心（154101)

由于乳中富含脂肪，用測定血液總鈣的EDTA-Na2滴定法測定乳中鈣的含量，存在滴定終點(diǎn)不易判斷，顏色不穩(wěn)定易褪色等缺點(diǎn)，為此同事們在原方法的基礎(chǔ)上，于鈣紅指示劑中添加聚山梨酯-80，并增加氫氧化鈉的濃度，以此提高乳鈣測定結(jié)果的可靠性。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本 用消毒濕毛巾清潔乳頭、乳房，然后收集乳汁（晨乳）約2～3ml。

1.2 試劑 ①鈣紅指示劑：稱取鈣紅0.5g，溶于100ml甲醇中，于上述鈣紅指示劑中按100ml加入2.0ml聚山梨酯-80。②0.8mmol/L氫氧化鈉溶液。③EDTA-Na2溶液：溶解EDTA-Na20.4g于500ml去離子水中，再稀釋至1L，用鈣標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行標(biāo)定，結(jié)果EDTA-Na21ml相當(dāng)于0.1mg鈣。④鈣標(biāo)準(zhǔn)液2.5mmol/L。

1.3 方法 取試管2只，各加入1份母乳0.2ml，然后加0.8mmol/L NaO H1.0ml，其中1只試管加原鈣紅指示劑1滴，另1只加鈣紅-吐溫指示劑1滴，分別用EDTA-Na2溶液進(jìn)行滴定，測定30份乳。

2 結(jié)果

2.1 比較試驗(yàn) 取乳30份，分別用原法和改良法測定乳中鈣含量，結(jié)果原法為（6.77±1.53）mmol/L，改良法為（6.64±1.54）mmol/L，兩種方法相比較差異無顯著性（t=1.296，P＞0.05）。

2.2 回收試驗(yàn) 取鈣含量為5.4mmol/L的乳0.2ml，加入濃度為2.5mmol/L的鈣標(biāo)準(zhǔn)液0.1ml，平行測定5份回收實(shí)驗(yàn)樣品，其回收率為97.6%～101.4%，平均回收率99.5%。

2.3 重復(fù)性試驗(yàn) 同份乳等份分裝，分5d測定，每天5份，作批內(nèi)、批間試驗(yàn)，結(jié)果批內(nèi)試驗(yàn)為（5.49±0.72）mmol/L，RSO為13.07%。

2.4 試劑穩(wěn)定性試驗(yàn) 改良配方置室溫應(yīng)用3個(gè)月與置冰箱保存的原配方和改良配方在滴定結(jié)果，終點(diǎn)顏色變化深淺均一致。

2.5 褪色時(shí)間觀察 用原配方指示劑滴定母乳鈣后的終點(diǎn)顏色褪色很快，約5～10min，改良指示劑的終點(diǎn)顏色在室溫(18℃)放置30min才完全褪去，褪色時(shí)間較原配方明顯延長。

2.6 改良法滴定后終點(diǎn)觀察 反應(yīng)液較原法清晰，終點(diǎn)顏色變化明顯，易于掌握。

3 應(yīng)用

用改良法測定鮮乳64份，其中高于或等于正常生理母乳鈣7.5mmol/L，僅有19例，占29.6%，其余均低于7.5mmol/L，平均值為6.1mmol/L，最低值僅2.6mmol/L。

4 討論

經(jīng)用原法和改良法分別測定母乳鈣30例，兩者比較差異無顯著性（P＞0.05），改良法不僅終點(diǎn)易判斷，而且穩(wěn)定時(shí)間較長。

從測定64份母乳鈣發(fā)現(xiàn)，我地區(qū)母乳鈣含量普遍低于正常生理含量，合格僅點(diǎn)29.6%，因此要加強(qiáng)這方面的宣傳。