高效液相色譜法測定硫辛酸注射液中有關(guān)物質(zhì)及其含量

費(fèi)瑞娟，陳祥峰 ，倪靜文

（1.江蘇省電業(yè)職工療養(yǎng)院，江蘇無錫 214164；2.江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司，江蘇南京 211112）

硫辛酸，亦稱α-硫辛酸[1]，其具備一般抗氧化劑所不能及的抗氧化性，可以祛除機(jī)體自由基，既溶于水又溶于脂肪，有良好的配伍性，能促進(jìn)機(jī)體利用葡萄糖合成維生素C，并且促進(jìn)合成谷胱甘肽，能有效祛除黑色素，還可協(xié)助輔酶進(jìn)行有利于機(jī)體免疫力的生理代謝[2]。國外科學(xué)家最近研究發(fā)現(xiàn)，從臨床角度看，僅α-硫辛酸對于阿爾茨海默痛有抑制效果，并且α-硫辛酸能保存和再生其他抗氧化劑[3]，在德國用于治療糖尿病性神經(jīng)病已有數(shù)十年的歷史，其醫(yī)用價值也正在得到認(rèn)可[2]。國內(nèi)一些廠家亦將其用作肝保護(hù)劑，并不斷有新用途的報(bào)道[4]，國外常采用手性柱，以電化學(xué)檢測法[5]、脈沖安培檢測法[6]或熒光檢測法[7]作為生化樣品的檢測手段，利用二極管陣列檢測器測定制劑中硫辛酸的含量[8]。本文建立一種用普通ODS柱紫外檢測硫辛酸的高效液相色譜法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器：島津LC-10Avp高效液相色譜儀系統(tǒng)，包括LC-10ATvp泵、SPD-10Avp紫外檢測器、C-R6A色譜數(shù)據(jù)處理儀。

試劑：乙腈，色譜純（J&KSCIENTIFIC.LTD；批號：LK20K02）；磷酸二氫鉀，分析純（上海凌峰化學(xué)試劑有限公司；批號：20090208）。

1.2 液相色譜條件

色譜柱：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，粒度5 μm，規(guī)格:150.0 mm×4.6 mm，不銹鋼柱（Shimpack CLC-ODS）；流動相：乙腈—0.005 mol/L 磷酸二氫鉀溶液（v∶v=50∶50），用磷酸調(diào)節(jié) pH 值至 3.0；流速：1.0 ml/min；檢測波長：212 nm；進(jìn)樣量：20 μl。

1.3 供試溶液配制

有關(guān)物質(zhì)檢測項(xiàng)下供試品溶液Ⅰ配制：避光操作。取本品內(nèi)容物適量（約相當(dāng)于硫辛酸25 mg），精密稱定，置25 ml棕色量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。

含量測定項(xiàng)下供試品溶液Ⅱ配制：避光操作。取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物適量（約相當(dāng)于硫辛酸25 mg），精密稱定，置25 ml棕色量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 ml置25 ml棕色量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。

1.4 方法的專屬性考察

1.4.1 空白試驗(yàn) 取處方量的空白輔料—甘露醇加0.001 mol/L氫氧化鈉溶液溶解并稀釋，量取20 μl進(jìn)樣，結(jié)果可見稀釋液及輔料對含量及有關(guān)物質(zhì)檢查均無干擾。

1.4.2 酸破壞 取本品內(nèi)容物適量（約相當(dāng)于硫辛酸25 mg），置25 ml棕色量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液5 ml，搖勻，于室溫條件下放置4 h后，滴加1 mol/L氫氧化鈉溶液中和，再加流動相稀釋至刻度，搖勻。

1.4.3 堿破壞 取本品內(nèi)容物適量（約相當(dāng)于硫辛酸25 mg），置25 ml棕色量瓶中，加0.1 mol/L氫氧化鈉溶液5 ml，搖勻，于室溫條件下放置4 h后，滴加1 mol/L鹽酸溶液中和，再加流動相稀釋至刻度，搖勻。

1.4.4 氧化破壞 取本品內(nèi)容物適量（約相當(dāng)于硫辛酸25 mg），置25 ml棕色量瓶中，加30%過氧化氫5 ml，搖勻，于室溫條件下放置2 h后，加流動相稀釋至刻度，搖勻。

1.4.5 光照破壞 取本品內(nèi)容物適量（約相當(dāng)于硫辛酸25 mg），置25 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，置強(qiáng)光條件下（450 0 Lx）放置4 h后，取出。

1.4.6水浴破壞 取本品內(nèi)容物適量（約相當(dāng)于硫辛酸25 mg），置燒瓶中，加流動相使溶解并稀釋至25 ml，搖勻，置100℃水浴上加熱回流4 h取出，冷卻。

測試結(jié)果表明：該方法專屬性強(qiáng)，能有效檢測本品經(jīng)酸、堿、氧化、光照、熱破壞后產(chǎn)生降解產(chǎn)物等雜質(zhì)，說明本色譜條件可行。

1.5 含量測定方法

1.5.1 定量限、檢測限 取硫辛酸對照品加流動相溶解并逐級稀釋，取 20 μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，按10倍信噪比計(jì)算本品的檢測定量限，結(jié)果為3.6 ng；按3倍信噪比計(jì)算本品的最低檢測限，結(jié)果為1.1 ng。

1.5.2 精密度試驗(yàn) 取含量測定項(xiàng)下的供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，根據(jù)主峰面積計(jì)算進(jìn)樣精密度RSD為0.20%。

1.5.3 準(zhǔn)確性試驗(yàn) 取硫辛酸原料，按本品處方量的80%、100%、120%分別投料，按處方工藝與100%的量的輔料混勻，照含量測定項(xiàng)下的方法，測得RSD為0.53%。

1.5.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號注射用硫辛酸，照含量測定項(xiàng)下的方法測定本品中硫辛酸的含量，共測定6次，計(jì)算含量及偏差，RSD為0.26%，表明本方法重現(xiàn)性良好。

1.5.5 中間精密度試驗(yàn) 取同一批號樣品，照本品含量測定項(xiàng)下的方法，分別由不同人不同時間于不同的高效液相色譜儀上測定本品中硫辛酸的含量，結(jié)果硫辛酸峰面積的RSD為0.16%，表明進(jìn)樣精密度良好。

1.5.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下的供試品溶液，于室內(nèi)避光條件下放置，并且分別于 0、1、2、4、6、8 h 進(jìn)樣，測定硫辛酸峰面積及有關(guān)物質(zhì)的RSD分別為3.0%、0.35%，結(jié)果顯示兩者均無明顯變化，表明硫辛酸溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2 結(jié)果

取經(jīng)40℃減壓干燥至恒重的硫辛酸對照品適量（約50mg），精密稱定，置50 ml棕色量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取該溶液 1、3、5、7 和 10 ml，置 25 ml棕色量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以進(jìn)樣量（W）為橫坐標(biāo)，以其相應(yīng)的硫辛酸峰面積（A）為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程，線性方程為 A＝279 45 w-115 7，r＝0.999，線性范圍 0.81～8.10 μg，相關(guān)系數(shù) r＝0.999。

3 討論

本文建立一種用普通ODS柱紫外檢測硫辛酸的高效液相色譜法。硫辛酸檢測濃度的線性范圍為0.81 μg～8.10 μg(r：0.999)；平均回收率為 99.17%(RSD=0.40%)；日內(nèi)、日間 RSD均小于2.6%。本方法簡便、準(zhǔn)確，可用于硫辛酸注射液的有關(guān)物質(zhì)及其含量的測定。

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