規(guī)?；i場(chǎng)豬瘟免疫超前免疫與非超前免疫效果的試驗(yàn)觀察

王治方,郭成留,薛曉波,徐引弟,朱文豪,李建林,張玉楊

(1.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所,河南 鄭州 450002;2.河南省淇縣永昌公司,河南 淇縣 456750)

豬瘟是威脅我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的重要疾病因素之一,國(guó)內(nèi)對(duì)豬瘟的控制主要依靠疫苗的免疫接種,業(yè)內(nèi)對(duì)豬瘟的免疫程序研究報(bào)道很多,但也存在分歧。在生產(chǎn)實(shí)踐中,對(duì)豬瘟超前免疫的分歧最為明顯,一部分養(yǎng)殖場(chǎng)表示超前免疫對(duì)預(yù)防豬瘟(特別是豬瘟疫區(qū))是一種很好的免疫方法;部分養(yǎng)殖場(chǎng)認(rèn)為超前免疫效果不明顯,操作起來(lái)費(fèi)時(shí)、費(fèi)力,還經(jīng)常發(fā)生過(guò)敏死亡現(xiàn)象。為了驗(yàn)證豬瘟超前免疫的效果,課題組作了以下試驗(yàn),報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 妊娠母豬:品種、胎次、預(yù)產(chǎn)期相同的健康母豬3頭,分別編號(hào)為A、B、C,產(chǎn)前30 d經(jīng)血清學(xué)檢驗(yàn),偽狂犬gE抗體陰性、豬繁殖與呼吸綜合征和豬瘟抗原陰性。

試驗(yàn)仔豬: 3頭試驗(yàn)?zāi)肛i所產(chǎn)相應(yīng)仔豬(母豬 A 產(chǎn) 12頭 ,編號(hào)分別為 A1、A2、A3…A12;母豬B產(chǎn)12 頭,編號(hào)分別為B1、B2、B3…B12;母豬C產(chǎn) 10頭,編號(hào)分別為 C1、C2、C3…C10),每窩仔豬隨機(jī)分為超免組和非超免組,超免組包括A4 、A5 、A6 …A12;B7、B8 、B9 …B12;C6 、C7 、C8…C10。非超免組包括 A1、A2、A3;B1、B2、B3…B6;C1、C2、C3…C5。

1.2 試驗(yàn)用疫苗 ST豬瘟活疫苗(傳代細(xì)胞源),由廣東永順生物制藥有限公司生產(chǎn)(批號(hào)871)。零免豬瘟活疫苗 ,由廣東永順生物制藥有限公司生產(chǎn)(批號(hào)816)。豬瘟淋脾弱毒組織苗,由廣東永順生物制藥有限公司生產(chǎn)(批號(hào)756)。

1.3 檢測(cè)試劑 豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒(阻斷ELISA),美國(guó)IDEXX公司生產(chǎn)(批號(hào)43220-R941)。

1.4 試驗(yàn)器材 3000 g臺(tái)式離心機(jī)、微量移液器(50～ 1000μL)、酶標(biāo)儀(美國(guó) ELX800)、微量振蕩器、恒溫培養(yǎng)箱等。

1.5 免疫方案 超免組的免疫方案:0日齡,零免豬瘟活疫苗1頭份/份;40日齡,豬瘟淋脾弱毒組織苗1頭份/份。

非超免組免疫方案:20日齡,ST豬瘟活疫苗5頭份/份;60日齡,豬瘟淋脾弱毒組織苗1頭份/份。

試驗(yàn)豬其他疾病的防疫均按該場(chǎng)原有免疫程序執(zhí)行。

1.6 樣品采集 所有試驗(yàn)豬只分別于20、30、40、50、60、70、90日齡采集血液樣品,分離血清,-20℃凍存,試驗(yàn)結(jié)束后統(tǒng)一檢測(cè)抗體效價(jià)。

1.7 效價(jià)檢測(cè) 試驗(yàn)操作步驟嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 判定標(biāo)準(zhǔn) 豬瘟抗體檢測(cè)試驗(yàn)(阻斷ELISA)成立條件:陰性對(duì)照的平均OD450值應(yīng)大于0.50;陽(yáng)性對(duì)照的阻斷率應(yīng)大于50%;試驗(yàn)方法有效。樣品阻斷率=(陰性對(duì)照平均OD450-樣品OD450)/陰性對(duì)照平均OD450×100%

被檢樣品的阻斷率大于或等于40%,該樣品為豬瘟抗體陽(yáng)性;樣品阻斷率小于或等于30%,該樣品為陰性(無(wú)豬瘟抗體存在);樣品阻斷率在30%～40%,該樣品為可疑。

2.2 結(jié)果 A、B、C母豬所產(chǎn)仔豬各時(shí)期的豬瘟抗體效價(jià)分別見(jiàn)表1、表2、表3;A、B、C三組豬瘟超前免疫與非超前免疫豬瘟抗體曲線圖分別見(jiàn)圖1、圖2、圖3。

2.3 結(jié)果分析 通過(guò)方差分析顯示,母豬A所產(chǎn)仔豬超免組和非超免組在20日齡豬瘟抗體效價(jià)差異不顯著(P＞0.05);在30、40、50日齡二者差異極顯著(P＜0.01),超免組效價(jià)明顯高于非超免組;在60、70、90日齡二者差異不顯著(P＞0.05)。母豬B所產(chǎn)仔豬超免組和非超免組在20、30日齡豬瘟抗體效價(jià)差異不顯著(P ＞0.05);在 40、50、60、70、90 日齡二者差異極顯著(P＜0.01),超免組效價(jià)明顯高于非超免組。母豬C所產(chǎn)仔豬超免組和非超免組在20日齡豬瘟抗體效價(jià)差異不顯著(P＞0.05);在30、40、50 、60、70、90 日齡二者差異極顯著(P ＜0.01),超免組效價(jià)明顯高于非超免組。

表1 A母豬所產(chǎn)仔豬各日齡豬瘟抗體效價(jià)

表2 B母豬所產(chǎn)仔豬各日齡豬瘟抗體效價(jià)

表3 C母豬所產(chǎn)仔豬各日齡豬瘟抗體效價(jià)

3 討論

3.1 20日齡A、B、C豬瘟超前免疫組和非超免組豬瘟抗體效價(jià)差異不顯著,但在30日齡后超免組均明顯高于非超免組,充分說(shuō)明豬瘟超前免疫的真正價(jià)值體現(xiàn)在仔豬斷奶后的一段時(shí)期,而這一階段往往是養(yǎng)殖場(chǎng)(特別是豬瘟污染場(chǎng))最危險(xiǎn)的時(shí)期。筆者認(rèn)為豬瘟超前免疫是控制斷奶仔豬感染豬瘟的十分有效的免疫方法。

3.2 超前免疫也稱乳前免疫、零時(shí)免疫,即仔豬出生后去除體表黏液,頸部消毒后肌肉接種豬瘟疫苗,與母豬隔離1.5～2 h后再吃初乳的免疫方法。該免疫方法操作難度不大,但要求具體操作者有很高的責(zé)任心,堅(jiān)決避免仔豬吃乳后免疫,造成免疫失敗。在生產(chǎn)實(shí)踐中,遇到這種情況可做上標(biāo)記進(jìn)行豬瘟常規(guī)免疫。試驗(yàn)中超免組有個(gè)別豬只,筆者就懷疑有這種情況發(fā)生。

3.3 通過(guò)試驗(yàn)不難看出,超前免疫雖然能明顯提高仔豬前期的豬瘟抗體水平,但到40日齡沒(méi)有得到理想水平,通過(guò)40日齡的常規(guī)加強(qiáng)免疫,抗體效價(jià)有了明顯升高,得到較為理想水平。可見(jiàn),在生產(chǎn)實(shí)踐中,豬瘟超前免疫需要配合1～2次常規(guī)免疫,才能使豬群得到理想的免疫效果。

3.4 試驗(yàn)中使用的零免豬瘟活疫苗,很大程度上減少了豬瘟超前免疫常見(jiàn)的過(guò)敏反應(yīng),這種免疫方法值得推廣應(yīng)用。