環(huán)孢素A單克隆全血試劑盒殘余試劑再利用研究

鄭芝欣，翟保同，周 成

（河南省南陽市中心醫(yī)院，河南南陽 473001）

環(huán)孢素A是目前臨床常用的強效免疫抑制劑，廣泛用于器官移植術(shù)后抗排異反應和某些自身免疫性疾病的治療[1]。由于在治療劑量下，其生物利用度和藥動學個體差異很大，治療中進行血藥濃度監(jiān)測及藥動學和藥效學研究，對提高移植器官的存活率、減少毒性反應和排異反應的發(fā)生具有重要的臨床意義[2-3]。環(huán)孢素A的血藥濃度監(jiān)測方法有高效液相色譜法（HPLC）、放射免疫法（RIA）、熒光偏振免疫法（FPIA）等[4-5]。FPIA因方法快捷、靈敏可靠、重現(xiàn)性好而被臨床廣泛采用。在利用FPIA對環(huán)孢素A進行血藥濃度監(jiān)測過程中，主要依賴于環(huán)孢素A試劑盒，由于目前國內(nèi)尚無技術(shù)生產(chǎn)該試劑盒，試劑盒的供應還依賴于進口，價格較為昂貴，是環(huán)孢素A血藥濃度監(jiān)測的最主要耗材，也是造成臨床上環(huán)孢素A血藥濃度監(jiān)測成本和費用較高的主要原因。在環(huán)孢素A的實際血藥濃度監(jiān)測中，每套試劑盒利用100次左右時就不能再用，而試劑盒中仍殘余不少試劑，扔掉極為可惜。為探討如何利用這些殘余試劑，降低臨床監(jiān)測成本，筆者進行了該項研究。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

TDX/FLX全自動快速血藥濃度測定儀，高速離心機，TDX單克隆全血濃度標準曲線盒（批號93258Q100），質(zhì)控盒（批號 03071Q100），標準試劑盒（批號 13107Q102），混合試劑盒（批號13107Q100的殘余試劑與批號17774Q101的殘余試劑進行混合）；以上均為美國ABBOTT公司產(chǎn)品。

1.2 樣品來源

2007年6～9月在我院進行環(huán)孢素A血藥濃度監(jiān)測的20例腎移植患者，年齡20～60歲，手術(shù)時間6個月～5年，均同時于9∶00服藥前抽取血樣，分別用標準試劑盒和混合試劑盒進行環(huán)孢素A血藥谷濃度測定。

1.3 方法

所有樣品均在同一上午測定。標準試劑盒測定：用微量移液器精密吸取150 μl混勻后的全血樣品，置于離心管中，精密加50 μl紅細胞溶解劑，再精密加300 μl沉淀劑，在渦旋混合器上充分混勻，高速離心后將上清液全部倒入樣品杯中用標準試劑盒進行測定?；旌显噭┖袦y定：用微量移液器精密吸取168 μl混勻后的全血樣品，置于離心管中，精密加50 μl紅細胞溶解劑，再精密加 282 μl沉淀劑，在渦旋混合器上充分混勻，高速離心后將上清液全部倒入樣品杯中用混合試劑盒進行測定。所有操作均嚴格按照操作規(guī)程進行，微量移液器使用也嚴格按照說明書要求進行。

2 結(jié)果

2.1 兩試劑盒的質(zhì)控結(jié)果比較

質(zhì)控標準分三檔，分別為高（680～920 ng/ml）、中（340～460 ng/ml）、低（120～180 ng/ml），兩試劑盒質(zhì)控均符合標準要求，但混合試劑盒高、中、低質(zhì)控值均比目標濃度低約12%。見表1。

表1 兩試劑盒質(zhì)控結(jié)果（ng/ml）Tab.1 The results of control in two reagent packs(ng/ml)

2.2 兩試劑盒測定結(jié)果比較

標準試劑盒測定結(jié)果（X）＞混合試劑盒測定結(jié)果（Y）的樣品數(shù)為11個，X＜Y的樣品數(shù)為9個，同一樣品最大差距為7.26 ng/ml，最小差距為0.44 ng/ml，兩組數(shù)據(jù)經(jīng)配對t檢驗，無顯著性差異（P＞0.05）。 見表 2。

表2 兩試劑盒測定結(jié)果統(tǒng)計學分析（n=20）Tab.2 The statistic analysis of the results in two reagent packs(n=20)

2.3 兩試劑盒測定結(jié)果相關(guān)性分析

以標準試劑盒測定結(jié)果為X，混合試劑盒測定結(jié)果為Y進行線性回歸分析，得回歸方程為：Y=-1.9380+1.0058X，r=0.9994（n=20）。

3 討論

由表1可以看出，標準試劑盒高、中、低質(zhì)控結(jié)果與目標濃度吻合較好，說明測定所用標準曲線液、試劑、質(zhì)控液均較穩(wěn)定，對測定結(jié)果影響較小；而混合試劑盒高、中、低質(zhì)控結(jié)果雖然也在要求范圍之內(nèi)，但3個質(zhì)控結(jié)果均比目標濃度低約12%，說明兩個殘余試劑盒混合后也很穩(wěn)定，但與標準試劑盒相比存在一定的偏差，而偏差方向一致，存在一定的系統(tǒng)誤差，為使測定結(jié)果更加準確，在利用混合試劑盒測定樣品時筆者對每個樣品均比常規(guī)抽取量（150 μl）多抽取12%（18 μl），而對沉淀劑比常規(guī)抽取量（300 μl）少抽取 18 μl，每份樣品混合后總量仍為500 μl。

結(jié)果表明，利用標準試劑盒對標準抽取量的樣品進行測定結(jié)果與利用混合試劑盒對經(jīng)過調(diào)整抽取量的樣品測定結(jié)果吻合非常好，統(tǒng)計學處理顯示無顯著性差異，相關(guān)性分析顯示相關(guān)性較強，說明采取該種方案可行。據(jù)此，我們在實際操作中可以根據(jù)每套殘余試劑混合后與標準質(zhì)控存在的偏差比例，對抽取的樣品量作出適當調(diào)整，使測定結(jié)果更加準確，更能反映真實的血藥濃度。由于機器內(nèi)部設定操作次數(shù)限制和試劑盒中殘余試劑液面較低，每套環(huán)孢素A試劑盒用到100次左右就無法再用，而每套試劑盒中殘余的試劑經(jīng)與另一套殘余試劑混合后至少還可操作15～20次，可節(jié)約成本2000～3000元，經(jīng)濟效益非常明顯。

[1]陳耿,董家鴻.環(huán)孢素A治療藥物監(jiān)測的研究進展[J].第三軍醫(yī)大學學報,2003,25(6):551-554.

[2]李金恒.臨床治療藥物監(jiān)測的方法和應用[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:102-103.

[3]魏筱華,劉通,劉明珪,等.腎移植術(shù)后CsA血藥濃度監(jiān)測及其臨床意義[J].江西醫(yī)藥,2003,38(6):414-416.

[4]繆海均,鄧渝林,惲蕓蕾,等.不同免疫分析儀在環(huán)孢素A血藥濃度監(jiān)測中的差異[J].中國醫(yī)院藥學雜志,2004,24(4):223.

[5]劉文豹,劉杰,劉增.FPIA、RIA在環(huán)孢素A血藥濃度監(jiān)測中的對比分析[J].放射免疫學雜志,2008,21(5):423.