生殖器皰疹的研究和治療進(jìn)展

劉 卉，程培華

生殖器皰疹（genital herpes，GH）是由單純皰疹病毒（herpes simplex virus，HSV）感染生殖器部位皮膚粘膜所引起的一種性傳播疾病。以往認(rèn)為生殖器皰疹的病原體為單純皰疹病毒2型（HSV-2），但隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展及推廣應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)單純皰疹病毒1型（HSV-1）感染也占有一定的比例[1]。單純皰疹病毒感染的一個重要特點(diǎn)是感染后能在宿主體內(nèi)建立潛伏感染，并于一定條件下如應(yīng)激、疲勞、免疫功能低下等情況下再次激活而致病情反復(fù)發(fā)作。研究顯示HSV-2與女性宮頸癌的發(fā)生有一定的關(guān)系，且還能激活HIV復(fù)制，增加HIV的感染幾率[2]。鑒于近幾年本病的發(fā)病率呈上升趨勢，其預(yù)防與控制愈發(fā)顯得重要。本文就近幾年的研究及治療進(jìn)展情況，綜述如下。

1 生殖器皰疹復(fù)發(fā)機(jī)制的研究進(jìn)展

1.1 潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄體

HSV潛伏感染再激活的機(jī)制復(fù)雜，其過程與病毒基因轉(zhuǎn)錄水平及編碼蛋白的數(shù)量和性質(zhì)有關(guān)，其中潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄體（latency associated transcript, LAT）作為少數(shù)在潛伏期間大量轉(zhuǎn)錄的基因而倍受關(guān)注。LAT基因編碼多個轉(zhuǎn)錄體，HSV-1編碼8.3kb非主要LAT和2.0kb、1.5kb主要LAT，HSV-2編碼9.0kb非主要LAT和2.2kb主要LAT。HSV-2的LAT基因位于長重復(fù)序列（TRL和IRL）與長單一序列（UL）相連接的區(qū)域，其主要LAT基因包含3個蛋白開放讀碼框（open reading frame, ORF），分別為ORF1、ORF2、ORF3，這三個ORFs分別保留214、74、119個密碼子，其ATG分別位于HSV-2主要LAT序列的第784、1267、1496堿基位。在真核基因表達(dá)調(diào)控中轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控為最重要的一環(huán)，而LAT啟動子即是決定LAT表達(dá)的關(guān)鍵[3]。LAT有兩個啟動子LAP1和LAP2，LAP1是HSV處于潛伏狀態(tài)的最基本啟動子，參與各種因素引起的HSV-2的潛伏、感染和再激活。LAP1含有多個RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的結(jié)合位點(diǎn)，如TATA-box、激活蛋白1（AP1）、激活蛋白2（AP2）等，這些轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子保證了LAT于潛伏期間在神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄。LAP2在HSV急性感染時最早開始活動，當(dāng)缺乏LAP1或LAP1活動被阻滯時，LAP2發(fā)揮功能。LAP2含有兩個SP1位點(diǎn)、1個AP2結(jié)合位點(diǎn)、腺病毒E2蛋白因子結(jié)合位點(diǎn)，此外還有GT、GC密集區(qū)、ICP0、ICP4結(jié)合基序，其中ICP0、ICP4結(jié)合基序參與了細(xì)胞裂解反饋抑制調(diào)節(jié)LAP表達(dá)的過程。Chen等[4]研究表明LAT與ICP4的表達(dá)呈反向互動關(guān)系，LAT通過反義抑制ICP4而下調(diào)HSV裂解基因的表達(dá)，從而促進(jìn)HSV潛伏感染的建立和維持。LAT還具有抗神經(jīng)凋亡功能，它通過編碼MiR-LAT進(jìn)行RNAi介導(dǎo)的病毒抗凋亡，從而使HSV病毒免于因宿主的凋亡而被清除[5]，Carpenter等[6]通過實(shí)驗(yàn)還證實(shí)LAT基因的抗調(diào)亡作用也有利于潛伏病毒的再次激活。Thomas等[7]現(xiàn)LAT內(nèi)ORFs在潛伏期間不表達(dá)蛋白，在病毒激活時讀碼框可表達(dá)蛋白，在無ICP0蛋白表達(dá)而只有ORF1表達(dá)的情況下，病毒仍可被激活，故而認(rèn)為LAT的 ORFs編碼蛋白在功能上類似于HSV病毒的即早蛋白ICP0，LAT可通過HSV潛伏感染期間表達(dá)其ORFs編碼蛋白來代替增殖性感染早期的調(diào)控蛋白ICP0，進(jìn)而介導(dǎo)病毒的再激活。LAT對HSV潛伏感染的建立、維持和激活有著重要的作用，但確切機(jī)制尚未明確，仍有待于進(jìn)一步研究。

1.2 Us3基因

Us3基因?qū)儆贖SV的一個多功能基因，與病毒復(fù)制并無直接關(guān)系[8]，其編碼的Us3蛋白激酶（Us3PK）是第一個被鑒定的HSV絲/蘇蛋白激酶，具有自磷酸化活性。Us3基因可通過影響細(xì)胞凋亡內(nèi)外部途徑相關(guān)因子活性而介導(dǎo)HSV抗宿主凋亡[9]。在細(xì)胞外部途徑中，氨基酸末端激酶（JNK）的活化可觸發(fā)凋亡的啟動。Us3基因的表達(dá)能明顯抑制山梨醇誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，Us3PK抑制山梨醇誘導(dǎo)的JNK磷酸化。在細(xì)胞內(nèi)部途徑中，Bcl-2家族成員如Bax、Bid、Bad等多個蛋白是關(guān)鍵的調(diào)節(jié)因子。Us3PK可阻斷Bad過表達(dá)引起的細(xì)胞凋亡，其作用與Bad 112-Ser、136-Ser磷酸化有關(guān)。Us3基因還能影響病毒的包封，Us3PK對編碼病毒被膜磷蛋白UL46基因產(chǎn)物的穩(wěn)定性有顯著影響，當(dāng)Us3基因突變?nèi)笔r，UL46蛋白穩(wěn)定性下降，并且在Us3基因缺失突變的病毒中無法檢測到UL46，而體外檢測也表明UL46蛋白可被Us3PK磷酸化[10]。HSV-2 UL46基因產(chǎn)物常在病毒復(fù)制后期表達(dá)，主要編碼病毒被膜磷蛋白VP11和VP12，它們能被Us3PK磷酸化，這可能是Us3基因調(diào)控病毒釋放及擴(kuò)散的方式之一。

1.3 TLR9介導(dǎo)的免疫作用

大量體外實(shí)驗(yàn)和動物實(shí)驗(yàn)提示，天然免疫在抑制皰疹病毒的復(fù)制和傳播方面有重要的作用。TLR9（toll-like receptor 9）為天然免疫的一部分，它定位于染色體3p21.3，與MyD88基因相連，是免疫細(xì)胞識別細(xì)菌和病毒非甲基化DNA的必需成分，其表達(dá)于富含免疫細(xì)胞的組織如脾臟、淋巴結(jié)和骨髓中，而在外周血單個核細(xì)胞中，主要是漿細(xì)胞來源的樹突狀細(xì)胞（plasmacyt-oid dendritic cells，pDC）和B細(xì)胞。通過TLR9，免疫細(xì)胞識別不同的病毒分子模式，最終誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素（Interferon， IFN）等抗病毒蛋白的合成[11]。Ⅰ型IFN的合成是抗病毒先天性免疫反應(yīng)中的關(guān)鍵一環(huán)，合成的IFNα和IFNβ可以通過JAK/STAT細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)節(jié)其他抗病毒蛋白與免疫調(diào)節(jié)因子的合成，并且激活獲得性免疫進(jìn)一步清除入侵病毒。Lund等[12]研究TLR9是否介導(dǎo)了HSV-2誘導(dǎo)IFN-α分泌，結(jié)果顯示此過程需要TLR9介導(dǎo)，且純化的HSV-2 DNA還能誘導(dǎo)漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞(pDC)分泌IFN-α，抑制CpG寡聚核 苷 酸（CpG oligodeoxynucle- otides，CpG ODN），則HSV-2誘導(dǎo)的IFN-α分泌減少。AshKar等[13]發(fā)現(xiàn)，CpG- ODN被局部粘膜遞呈給生殖道細(xì)胞，使小鼠免于致命的HSV-2陰道感染。同時在以生殖器粘膜為靶位的研究結(jié)果表明，CpG ODN局部遞呈誘導(dǎo)生殖道上皮細(xì)胞快速增生和上皮增厚，并引起粘膜下炎癥細(xì)胞大量募集。用CpG ODN局部處理也可抑制HSV-2復(fù)制，但對HSV-2侵入生殖道粘膜無影響，而且CpG ODN處理過的小鼠也不受致死劑量的HSV-2感染，用轉(zhuǎn)染了鼠TLR9的HEK293細(xì)胞實(shí)驗(yàn)顯示，CpG ODN 抗病毒活性是受TLR9介導(dǎo)的。上述實(shí)驗(yàn)表明，粘膜天然免疫的的局部誘導(dǎo)可在粘膜表層為HSV-2的感染提供保護(hù)作用。

2 生殖器皰疹的治療現(xiàn)狀及進(jìn)展

2.1 治療現(xiàn)狀

抗病毒治療仍然是目前主要的治療方法，常用的藥物有阿昔洛韋、泛昔洛韋、伐昔洛韋等。國內(nèi)對抗病毒藥物的用藥周期及臨床療效做了大量的臨床觀察及研究，劉恩讓等[14]比較兩種伐昔洛韋抑制療法預(yù)防生殖器皰疹復(fù)發(fā)，發(fā)現(xiàn)療效相同，具體方法為Ⅰ組以伐昔洛韋300mg 1次/d；Ⅱ組以伐昔洛韋300mg 1次/隔日。兩組均連續(xù)服用6個月后對復(fù)發(fā)情況觀察比較，兩種治療方案平均年復(fù)發(fā)次數(shù)明顯減少，且兩組間平均復(fù)發(fā)次數(shù)差異無顯著性差異。在對生殖器皰疹患者機(jī)體免疫狀況的研究中發(fā)現(xiàn)，生殖器皰疹患者普遍存在免疫功能紊亂，Th1/ Th2細(xì)胞水平失衡，且隨病情反復(fù)而加劇[15]。因而在抗病毒治療的同時，調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫狀態(tài)則顯得頗為重要。增加應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)劑，如α-2b干擾素、轉(zhuǎn)移因子、卡介菌多糖[16,17]等在臨床治療中都取得了較好的治療效果。

2.2 治療的研究進(jìn)展

在對Th1/ Th2分化失衡的研究中，轉(zhuǎn)錄因子T-bet（T-box expressed in T cell）、GATA-3（GATA binding protein-3）被發(fā)現(xiàn)與Th1/ Th2分化有關(guān)。T-bet是IFN-γ基因的強(qiáng)力轉(zhuǎn)錄激活劑，其轉(zhuǎn)錄只出現(xiàn)于Th1系統(tǒng)，在Th1分化中起重要作用。T- bet可誘導(dǎo)初始型CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生大量IFN-γ，而且還可以利用逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)T- bet轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)入已分化的Th2細(xì)胞，效應(yīng)性Th2細(xì)胞及已分化的Th2細(xì)胞也可產(chǎn)生大量的 IFN-γ，并抑制 IL-4、IL-5 的表達(dá)[18]。IFN-γ與 IFN-γR1、IFN-γR2結(jié)合后，又能激活 T-bet基因誘導(dǎo)其表達(dá)，而T- bet又將進(jìn)一步促進(jìn)CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ，從而形成一個正反饋調(diào)節(jié)環(huán)。GATA-3正調(diào)節(jié)Th2型細(xì)胞因子，其可以強(qiáng)烈激活I(lǐng)L-5啟動子，而微弱刺激IL-4啟動子，從而促進(jìn)IL-4、IL-5等細(xì)胞因子的表達(dá)。如果能人為的選擇性誘導(dǎo)或調(diào)控這些基因的表達(dá)，促使 Th1/Th2的分化朝向利于疾病治療的方向，將可能為患者帶來一個特異性更強(qiáng)，副作用更小的治療新途徑。

由于目前的抗病毒治療或聯(lián)合應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)劑，都不能徹底清除病毒而達(dá)到治愈效果，因而疫苗的研究一直廣受關(guān)注。早期的滅活病毒疫苗因存在免疫效應(yīng)差及潛在的致癌性而被淘汰。許多研究也采用了HSV表面糖蛋白gB和gD作為免疫原來制作亞單位疫苗。gB和gD能誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫，并且gD是抗HSV感染中最重要的保護(hù)性抗原，能抑制潛伏感染的發(fā)生。目前亞單位疫苗已在動物和人體中進(jìn)行了試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)有不同程度的保護(hù)作用，但亞單位疫苗也存在窄譜、效果短暫等問題。DNA疫苗在20世紀(jì)90年代開始興起，是一種以核酸為基礎(chǔ)的免疫接種技術(shù)。目前DNA疫苗的研制包括多效價DNA疫苗、重組質(zhì)粒DNA疫苗、細(xì)胞因子為佐劑的DNA疫苗、粘附分子LFA-3為佐劑的DNA疫苗、CCR7為配體的DNA疫苗等，通過動物實(shí)驗(yàn)證明，DNA疫苗具有抗感染作用強(qiáng)，抑毒作用明顯等特點(diǎn)，具有廣闊的開發(fā)前景。雖然疫苗的研制已經(jīng)取得較大的進(jìn)展，但目前所獲得的疫苗并不能完全阻止HSV感染[19]，但隨著基因工程的發(fā)展和對免疫反應(yīng)認(rèn)識的深入，疫苗的效用和安全性將可能進(jìn)一步提高，如若疫苗研制成功，徹底治愈生殖器皰疹感染將成為可能。

3 小結(jié)

生殖器皰疹是一種易反復(fù)發(fā)作的性傳播疾病，危及人類健康。雖對其發(fā)病機(jī)制取得一定進(jìn)展，但仍未有徹底的治療方法，因此預(yù)防是最重要的。我們應(yīng)加強(qiáng)宣傳，要求潔身自愛，提倡安全性行為，對已感染生殖器皰疹的患者則應(yīng)盡早積極治療，加強(qiáng)體育鍛煉，增強(qiáng)體質(zhì)。復(fù)發(fā)性生殖器皰疹患者由于病情反復(fù)發(fā)作，往往伴有焦慮煩躁等負(fù)性情緒，對這些患者應(yīng)采取必要的心理干預(yù)，幫助患者樹立戰(zhàn)勝疾病的信心。

[1]Tran T, Druce JD, Catton MC, et al. Changing epidemiology of genital herpes simplex virus infection in Melbourne,Australia, between 1980 and 2003 [J]. Sex Transm Infect, 2004,80(4):277-279.

[2]Andreoletti L, Piednior E, Legoff J, et al. High seroprevalence of herpes simplex virus type2 infection in French human immunodeficiency virus type 1-infected outpatients [J]. Clin Microbid, 2005, 43(8):4215-4217.

[3]Rajcani J, Andrea V, Ingeborg R, et al. Peculiarities of herpes simplex virus (HSV) transcription; An overview [J]. Virus Genes, 2004, 28(3):293-310.

[4]Chen SH, Lee LY, Garber DA, et al. Neither LAT nor open reading fram P mutations increase expression of spliced or intron-containg ICP0 transcripts in mouse ganglia latently infected with herpes simplex virus [J]. J Virol, 2002,76(10):4764-4772.

[5]Gupta A, Gartner JJ, Sethupathy P, et al. Anti-apoptotic function of a microRNA encoded by the HSV-1 latency-associated transcript [J]. Nature, 2006, 442(7098):82-85.

[6]Carpenter D, Henderson GA, Hsiang CH, et al. Introducing point mutations into the ATGs of the putative open reading frames of the HSV-1 gene encoding the latency associated transcripts(LAT) reduce it anti-apoptosis activity [J]. Microb Pathog, 2008, 44(2):98-102.

[7]Thomas SK, Liliey CE, Latchman DS, et al. A protein encoded by the herpes simplex virus(HSV)type 1 2-kilobase latencyassociated transcript is phosphorylated localized to the nucleus,and overcomes the repression of expression from exogenous promoters when inserted into the quiescent HSV genome [J]. J Virol, 2002, 76(8):4056-4067.

[8]Bjerke SL, Roller RJ. Roles for herpes simplex virus type 1 UL34 and Us3 proteins in disrupting the nuclear lamina during herpes simplex virus type 1 egress [J]. J Virol, 2006, 347(2):261-276.

[9]Cartier A, Komai T, Masucci MG. The Us3 protein kinase of herpes simplex virus 1 blocks apoptosis and induces phosporylation of the Bcl-2 family member BAD [J]. Exp Cell Res, 2003, 291(1):242-250.

[10]Matsuzaki A, Yamauchi Y, Kato A. Us3 protein kinase of herpes simplex virus type 2 is required for the stability of the UL46-encoded tegument protein and its association with virus praticles[J]. J Gen Virol, 2005, 86(7):1979-1985.

[11]Akria S, Takeda K. Toll-like receptor signalling [J]. Nat Rev Inmunol, 2004, 4(7):499-511.

[12]Partida-Sánchez S, Randall TD, Lund FE. Innate immunity is regulated by CD38, an eto-enzyme with ADP-ribosyl cyclase activity [J]. Microbes infect, 2003, 5(1):49-58.

[13]Ashkar AA, Bauer S, Mitchell WJ, et al. Local delivery of CpG oligodeoxynucleotides induces rapid changes in the genital mucosa and Inhibits replication, but not entry, of herpes simplex virus type 2 [J]. J virol, 2003, 77(16):8948-8956.

[14]劉恩讓, 張書嶺, 王福喜, 等. 兩種伐昔洛韋抑制療法方案預(yù)防生殖器皰疹復(fù)發(fā)作用比較 [J]. 中國醫(yī)院用藥評價與分析,2007, 7(4):304-305.

[15]田中偉, 宋向鳳, 馮捷. 不同病程生殖器皰疹患者外周血Th1/Th2亞群分布的變化及其臨床意義 [J]. 免疫學(xué)雜志, 2006,22(1):114-115.

[16]李新生, 陳西成. 局部注射重組α-2b干擾素合用伐昔洛韋治療男性復(fù)發(fā)性生殖器皰疹的療效觀察 [J]. 中國麻風(fēng)皮膚病雜志,2005, 21(9):748-749.

[17]李勇, 趙進(jìn), 黃培勇. 轉(zhuǎn)移因子聯(lián)合阿昔洛韋治療頻發(fā)性生殖器皰疹療效觀察 [J]. 中國皮膚病性病學(xué)雜志, 2008, 22(3):161-162.

[18]Szabo SJ, Kim ST, Costa GL, et al. A novel transcription factor, T-bet,directs Th1 lineage commitment [J]. Cell, 2000, 100(6):655-669.

[19]傅錦堅(jiān), 林元藻, 胡立勇. 單純皰疹病毒疫苗的研究進(jìn)展 [J]. 廣東藥學(xué)院學(xué)報, 2008, 24(1):89.