梁紅峰 梁 健
廣東省陽(yáng)江市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科(529500)
目前,乙型肝炎病毒 (hepatitis B virus,HBV)感染的診斷主要依賴于血清特異性抗原抗體和HBV DNA檢測(cè),外周血中HBV DNA是病毒復(fù)制活躍最直接和可靠的標(biāo)志,其含量能直接代表患者病毒血癥的水平。聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)是檢測(cè)乙型肝炎病毒血癥的最敏感技術(shù),應(yīng)用定量 PCR技術(shù)檢測(cè)病毒基因水平國(guó)內(nèi)已有報(bào)道[1]。我們采用熒光定量PCR方法檢測(cè)150例不同類型慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA基因含量,以探討輕、中、重度慢性乙型肝炎患者與病毒復(fù)制水平之間的相關(guān)性。
研究對(duì)象為2007年8月至2008年8月陽(yáng)江市人民醫(yī)院傳染科收治住院的不同類型慢性乙型肝炎患者150例,診斷符合2000年(西安)全國(guó)病毒性肝炎與肝病學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。其中慢性乙型肝炎輕度70例、中度60例、重度20例,男性126例,女性24例,年齡5~60歲,平均32.7歲,平均病程(6.0±5.4)年。
表1 慢性乙型肝炎患者肝損害程度與血清 HBV DNA含量的關(guān)系(±s)
表1 慢性乙型肝炎患者肝損害程度與血清 HBV DNA含量的關(guān)系(±s)
注:*與重度比較P>0.05
組別 例數(shù) HBV DNA (拷貝/mL) HBV DNA≤103 104~106 ≥107慢性乙型肝炎(輕度) 70 17 44 16 5.57±1.80*慢性乙型肝炎(中度) 60 11 35 26 6.25±1.95*慢性乙型肝炎(重度) 20 5 17 7 5.71 ±1.89
HBV DNA基因含量檢測(cè)采用美國(guó)Biotronics公司生產(chǎn)的熒光標(biāo)記(Amp liSensor)HBV DNA定量試劑盒進(jìn)行定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè),檢測(cè)儀器采用美國(guó)Biotronics公司AG9600熒光定量PCR分析儀,以<5×103拷貝/mL為陰性結(jié)果。為易于統(tǒng)計(jì),均以檢測(cè)結(jié)果絕對(duì)值的對(duì)數(shù)值進(jìn)行比較。血清TBil、ALT、AST測(cè)定采用美國(guó) BECKMAN COUT LER CX5PRO全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定,TBil>17.1μmol /L、ALT> 40U/L、AST>40U/L為異常,所有檢測(cè)及實(shí)驗(yàn)均嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作。
采用t檢驗(yàn)及χ2檢驗(yàn)。
見(jiàn)表1。
見(jiàn)表2。
表2 慢性乙型肝炎血清 HBV DNA基因含量與肝功能的關(guān)系(±s)
表2 慢性乙型肝炎血清 HBV DNA基因含量與肝功能的關(guān)系(±s)
注:各組間比較無(wú)明顯差異,TBil組、ALT組、AST組,P>0.05
HBV DNA(拷貝/mL) 例數(shù) TBil(μmol /L) ALT(U /L) AST(U /L)≤103 23 42.00±56.79 222±343 137±220 104~106 86 38.22±54.02 259±326 204±335≥107 41 28.41±39.00 335±447 218±278合計(jì) 150 36.13±50.73 274±368 196±301
在我國(guó)HBV慢性感染者大約占10%,是慢性肝炎、肝硬化、肝癌發(fā)生的主要原因。而 HBV感染傳統(tǒng)的血清學(xué)診斷指標(biāo)多采用ELISA法檢測(cè),它實(shí)際檢測(cè)的是人體對(duì)HBV的免疫反應(yīng)狀態(tài),該方法除敏感性較PCR低外,而熒光定量PCR方法則是檢測(cè) HBV DNA的基因含量,更準(zhǔn)確靈敏、真實(shí)地反映了HBV的感染狀態(tài)和復(fù)制情況,對(duì)于乙型肝炎的臨床診斷、治療方案的選擇和療效評(píng)價(jià)均具有較重要的指導(dǎo)作用[3]。文獻(xiàn)報(bào)道檢測(cè)血清HBV DNA含量,能較好地反映HBV感染者的病毒血癥水平和傳染性強(qiáng)弱程度,本研究150例慢性乙型肝炎雖然有的病例血清HBeAg陰性,但部分患者有高水平的HBV DNA,提示有活躍的病毒復(fù)制[4]。對(duì)于血清HBeAg陰性、抗-HBe陽(yáng)性,而HBVDNA高水平、肝功能異常的患者在臨床上應(yīng)引起足夠的重視,因此類患者常存在HBV持續(xù)活躍復(fù)制,且與乙型肝炎慢性化、病變活動(dòng)或重型化等有關(guān)[5,6]。血清HBV DNA含量與慢性乙型肝炎病情輕重的關(guān)系仍不十分清楚。國(guó)內(nèi)報(bào)道,慢性乙型肝炎患者中隨著肝損害程度的加重(依次為輕度、中度、重度),其HBV DNA基因含量逐漸下降,認(rèn)為患者病情越重病毒復(fù)制水平越低[7,8]。本研究結(jié)果顯示,慢性乙型肝炎輕度、中度血清HBV DNA基因含量與慢性乙型肝炎重度比較,無(wú)明顯差異,未發(fā)現(xiàn)慢性乙型肝炎患者隨肝損害程度的加重HBV DNA基因含量逐漸下降的現(xiàn)象。本文研究結(jié)果顯示血清HBV DNA基因含量與血清TBil、ALT、AST水平無(wú)相關(guān)性,即血清HBV DNA的復(fù)制水平與肝臟的炎癥程度無(wú)關(guān),提示機(jī)體對(duì)HBV的免疫應(yīng)答是造成肝組織破壞和肝功能損害的主要機(jī)制,而HBV并不直接導(dǎo)致肝臟細(xì)胞病變。
[1] 丁世濤,湯影子,范熠等.不同方法檢測(cè)血清HBV DNA水平的比較[J].山東醫(yī)藥,2010,50(1):11.
[2] 肖艷華,易俊卿,陳偉烈等.慢性乙型肝炎患者病毒基因B、C分型及HBV DNA載量與肝組織病理的關(guān)系[J].廣東醫(yī)學(xué),2009,30(12):1840-1842.
[3] 葉賢林,劉曉紅,馬蘭等.實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)HBsAg陰性、抗HBc陽(yáng)性獻(xiàn)血者血液中HBV DNA研究[J].中國(guó)感染控制雜志,2009,8(4):241-244.
[4] 陳善昌,胡靜云,龍麗娜等.1000例HBsAg陰性體檢人群血清HBV DNA檢測(cè)分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2010,7(2):140-141.
[5] 陳健,施民新,劉繼斌.HBVDNA陽(yáng)性肝癌患者血清HBeAg檢測(cè)與肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2009,17(11):2187-2189.
[6] 王桂爽,蔡晧東.HBeAg水平與下降速率在抗病毒治療中的意義[J].傳染病信息,2009,22(4):224-227.
[7] 楊秀清,高蕾,彰穎等.乙型肝炎患者HBV DNA定量與血清標(biāo)志物的關(guān)系分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2009,6(16):1332-1333.
[8] 鈕志林,高勝利,俞凈等.慢性乙型肝炎患者肝組織病理學(xué)分析[J].實(shí)用肝臟病雜志,2010,10(1):26-28.