實(shí)驗(yàn)性肌炎動(dòng)物模型中肌電圖變化分析

楊蘊(yùn)天,江新梅

(1.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科,內(nèi)蒙古呼和浩特010050;2.吉林大學(xué)第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科)

在臨床上,肌電圖對(duì)于多發(fā)性肌炎的診斷有著重要的意義[1],為了探討多發(fā)性肌炎動(dòng)物模型中肌電圖的作用,我們應(yīng)用改良方法用家兔骨骼肌勻漿加佛氏佐劑制作實(shí)驗(yàn)性自身免疫性肌炎(EAM)的動(dòng)物模型[2],觀察其在肌酶、肌電圖及肌肉病理上的改變,著重對(duì)EAM動(dòng)物肌電圖變化進(jìn)行分析。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物模型的建立與分組

16只健康英國(guó)短毛豚鼠(吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供),體重300-400克,雌雄各半。4-5只同處一籠,每日給以適量的新鮮蔬菜,以免維生素C缺乏。第一周所有的豚鼠均于項(xiàng)背部皮下注射肌勻漿0.2ml+完全佛氏佐劑0.1ml。以后每周注射一次,連續(xù)4周。開(kāi)始免疫注射6周后,取肌酶譜升高的豚鼠作為多發(fā)性肌炎的動(dòng)物模型(16只豚鼠肌酶譜均升高)。隨機(jī)分為A組(8只),B組(8只)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

在開(kāi)始免疫注射6周后,A組豚鼠每只經(jīng)胃管喂以強(qiáng)的松3 mg/(kg·d),連續(xù)6周;B組豚鼠作為空白對(duì)照,繼續(xù)喂養(yǎng)6周。

1.3 肌電圖檢測(cè)

于免疫前、免疫注射6周后及藥物治療6周后檢測(cè)豚鼠的前肢近端外側(cè)肌EMG,左右隨機(jī)進(jìn)行,肌電圖儀為國(guó)產(chǎn)JD-Ⅱ型肌電圖儀,室溫15-25℃。

1.4 肌肉病理

免疫注射6周后及藥物治療6周后處死豚鼠,取股四頭肌進(jìn)行肌肉活檢,采用常規(guī)蘇木精-伊紅(HE)染色。

1.5 血清肌酶檢測(cè)

所有豚鼠分別于免疫前、免疫注射6周后和藥物治療6周后,經(jīng)心臟穿刺取血1-2 ml,3 000 r/min離心5分鐘,取上層血清,用日立747型生化自動(dòng)分析儀檢測(cè)肌酸磷酸激酶(CPK),乳酸脫氫酶(LDH),谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

各組內(nèi)數(shù)據(jù)比較采用兩樣本均數(shù)的 t檢驗(yàn),各組間數(shù)據(jù)比較采用方差分析。

2 結(jié)果

2.1 動(dòng)物的一般情況

免疫注射前豚鼠體型豐滿(mǎn),皮毛光滑,活動(dòng)攝食好;免疫注射6周后各組動(dòng)物均表現(xiàn)倦怠,消瘦,生長(zhǎng)緩慢,肌肉軟,喜臥位,局部皮膚破潰;治療4周后A組癥狀明顯好轉(zhuǎn),皮膚破潰處結(jié)痂、愈合,活動(dòng)能力增強(qiáng);B組動(dòng)物癥狀進(jìn)行性加重,直至處死。

2.2 肌電圖

免疫6周后運(yùn)動(dòng)單位時(shí)限明顯縮短,波幅降低,多相波增多(運(yùn)動(dòng)電位超過(guò)基線(xiàn)4次以上者為多相波)。A藥物干預(yù)6周后運(yùn)動(dòng)單位時(shí)限延長(zhǎng),波幅升高,多相波減少,各項(xiàng)值與治療前比較有顯著差異(P＜0.05),B組改變不明顯(P＞0.05),A組與B組各項(xiàng)值比較有顯著差異(P＜0.05)。(見(jiàn)表1)

表1 EAM豚鼠治療前及治療后的肌電圖各項(xiàng)值比較

2.3 肌肉病理

免疫6周后發(fā)現(xiàn)肌肉病理改變,病變以骨骼肌多發(fā)性炎癥為特點(diǎn)。鏡下見(jiàn)橫紋肌呈灶性分布的肌細(xì)胞變性、壞死和炎細(xì)胞浸潤(rùn),間質(zhì)小血管壁增厚,周?chē)醒准?xì)胞浸潤(rùn)(見(jiàn)圖1);A組藥物干預(yù)6周后肌肉病損明顯得到緩解,炎細(xì)胞浸潤(rùn)和骨骼肌壞死程度都有明顯減輕(見(jiàn)圖2);B組病理改變緩解不明顯(見(jiàn)圖3)。

2.4 肌酶

圖1 免疫6周后出現(xiàn)肌炎改變HE×200

圖2 A組藥物干預(yù)6周后肌肉炎癥改變減輕 HE×200

表2 EAM豚鼠治療前及治療后肌酶譜值比較(IU/L,s)

表2 EAM豚鼠治療前及治療后肌酶譜值比較(IU/L,s)

治療前 治療后A組 B組CPK 1567.540±160.49 480.200±237.309 888.717±211.730 LDH 232.767±187.734 28.840±34.763 125.671±83.165 AST 136.200±41.881 75.013±19.374 99.820±65.198

3 討論

多發(fā)性肌炎(PM)是神經(jīng)肌肉疾病中的常見(jiàn)病,是一種以四肢近端肌無(wú)力、肌萎縮及血清肌酶水平升高為特點(diǎn)的骨骼肌特發(fā)性炎癥,肌電圖靜息電位出現(xiàn)大量纖顫正尖波,運(yùn)動(dòng)單位時(shí)限縮短,波幅降低,多相波增多,募集反應(yīng)呈病理干擾相[3,4]。本實(shí)驗(yàn)所采用的實(shí)驗(yàn)方法參考趙紅東等的報(bào)道[2],成功的制成了與人類(lèi)PM病變相似的動(dòng)物模型。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,免疫注射后豚鼠肌電圖出現(xiàn)了肌源性損害征象,經(jīng)過(guò)藥物治療后,肌電圖改變明顯好轉(zhuǎn),同時(shí)肌肉病理、血清肌酶亦平行好轉(zhuǎn)。肌炎時(shí)肌細(xì)胞變性壞死,肌電圖可較全面反映肌肉病變程度,肌電圖的改變與肌肉病理改變相平行[5],我們的實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了這一點(diǎn)。但與肌電圖相比,病理檢查雖是最后的確診標(biāo)準(zhǔn),但因其創(chuàng)傷大,不易重復(fù)檢查,不宜作為動(dòng)態(tài)觀察指標(biāo)。因此肌電圖對(duì)于評(píng)估EAM模型建立及藥物療效有著重要意義。

[1]張乃崢.多發(fā)性肌炎和皮肌炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志,1998,2(3):184.

[2]趙紅東,陳祖舜,沈鳴久.實(shí)驗(yàn)性肌炎動(dòng)物模型制作的研究[J].臨床神經(jīng)病學(xué)雜志,2000,13(5):275.

[3]Dimitri D.Inflammatory myopathies:diagnosis and classifications[J].Presse Med,2009,38(7-8):1141.

[4]Kawai S.Diagnosis and therapy for polymyositis and dermatomyositis[J].Nippon Naika Gakkai Zasshi,2007,96(10):2171.

[5]Blijham PJ,Hengstman GJ,Hama-Amin AD,et al.Needle electromyographic findings in 98 patients with myositis[J].Eur Neurol,2006,55(4):183.